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1、安捷伦-液质联用技术(LC/MS)及其应用1by Li Ping液质(LC/MS)联用技术基础2by Li Pingo质谱分析仪(MS)P需要高真空条件P质量分析系统P最好使用挥发性缓冲液o液相(HPLC)v高效分离混合物v流动相挥发后产生大量气体v出口压力为大气压v无质量限制v可以使用缓冲盐溶液液相(HPLC) 到 质谱(MS)的接口HPLCMSInterface (Key to Success!)3by Li PingLC-MS的接口的发展和种类p传送带(moving belt)式的LC-MS: 目前已 经停用 p热喷雾(TSP) LC-MS接口: 已经很少使用 p粒子束(PBI) p大气
2、压电离源(API):目前最常用的方法电喷雾(ESI)大气压化学电离源(APcI)4by Li PingLC/MS联用技术的相对适用范围5by Li Ping大气压电喷雾质谱应用范围大气压电喷雾源大气压化学源分子量化合物极性1000100,00010,000非极性极性化合物气相色谱/质谱6by Li Ping库仑爆炸 （Coulomb Explosions）Rayleigh Limit Reached+ +-+-+-+-溶剂蒸发+带电液滴分析物离子溶剂离子束分析物离子溶剂离子束 盐/离子对 中性化和物电喷雾(ESI)的电离过程7by Li PingNeutral Molecules Analyt
3、e Ions Clusters Salts毛细管液相的入口雾化器加热 N2雾化气入口碎片碰撞电压 (CID)锥孔八极杆四极杆高能打拿极/ 电子倍增器+ +透镜+液质联用的电喷雾(ESI)接口8by Li PingES电离原理9by Li Ping蒸汽通过电晕针放电形 成带电荷的反应剂 离子溶剂在蒸发 器中蒸发+含有气溶胶的分析物分析物离子+ + + + +电荷转移至 分析物分子+流动相分析物溶剂-溶剂+H+溶剂+H+M-溶剂+M+大气压化学电离源(APCI)的电离过程10by Li Ping毛细管碎片碰撞电压（CID）Corona needle+锥孔透镜四极杆+八极杆热氮气液质联用的大气压化学
4、电离源(APCI)接口高能打拿极/ 电子倍增器11by Li PingAPCI电离原理12by Li Ping大气压源子化技术电喷雾(ESI)化合物无需具有挥发性是分析热不稳定化和物的 首选方法离子在溶液中以已生成除了生成单电荷离子之外 还可以生成多电荷离子大气压化学电离源(APCI)J化和物需具有一定的挥发性J化和物必需是热稳定的J离子在气态条件中生成J只生成单电荷离子13by Li Ping电喷雾(ESI)和大气压化学离子化(APCI)农药及残留化合物多肽及蛋白的分子量测定确定氨基酸序列多肽及蛋白的纯度分析单糖和多糖的结构分析中极性到高极性,包括离子化合物 的分析,如表面活性剂分析农药及残
5、留化合物抗生素碱性药物小分子量样品类固醇, 雌激素单磺酸偶氮染料ESIAPCI14by Li Ping什麽是诱导解离碰撞? (Collision Induced Dissociation)?N在特定的区域, 通过与氮气分子 碰撞导致分子解离, 从而产生特征 碎片离子N可以得到结构信息用于化和物的 定性分析N可以提供用于定量分析目地的确 任碎片离子N只要改变单一参数 “fragmentor”来控制CID.CapillaryFragmentation Zone (CID)SkimmersOctopoleLensesQuadrupoleM nM 1+ M 2+DETAIL15by Li Ping碰撞
6、电压值对质谱图的影响3504004505005506006507002000400060008000m/zAbundan ce439467502684.653504004505005506006507002000400060008000m/zAbundan ce411439467495684.65碰撞电压= 175 volts碰撞电压= 100 voltsloss of C14 fatty acidloss of C12 fatty acidloss of C16 fatty acid16by Li Ping安捷伦液-质联用仪介绍17by Li Ping液质(LC/MS)联用系统的示意图离子源
7、离子束 聚焦M/Z 分析器检测器数据 处理HPLCLC 接口质谱图18by Li Ping安捷伦LC/MS 产品家族液相/离子井质谱 (VL和SL)液相/单四极杆质谱 LC/MSD VL液相/单四极杆质谱 LC/MSD SL19by Li Ping四极杆质谱+ + + +Main RFLow Amplitude Dipole Field (1/3 Frequency of the Main RF)Conversion DynodeElectron MultiplierShutterOptimized Asymptote AngleOctapoleRing多极离子阱质谱20by Li Ping安
8、捷伦的专利技术 直角喷雾接口+P 提高灵敏度P 减少污染P 降低毛细管被堵塞P 对非挥发性缓冲液的忍耐能力 强21by Li Ping独一无二的交叉喷雾器交叉喷雾器不需 X,Y, Z 位置调整, 而且避免了离 子光学透镜的污染倾斜排水口可以快速 去除冷凝液22by Li Ping完成整个分析后, 毛细管的入口处还是干静的!在非常复杂的基质的条件下 - 汉克盐溶液(Hanks)Componentg/LSodium chloride8 Calcium chloride0.1 Potassium chloride0.4 Potassium phosphate monobasic0.06 Magnes
9、ium Sulfate0.1 Sodium bicarbonate0.35 Sodium phosphate dibasic0.048 Glucose1 Phenol red0.01123by Li Ping清洁喷雾室在APCI的条件下,流动相为HBSS,连续进样635次以后完成整个分析后, 毛细管的入口处还是干静的!24by Li Ping内置式较正溶液 用于全自动调谐和质量较正25by Li Ping安捷伦1100 系列 LC/MSD: 易懂,易用的图型化 的液相和质谱控制及分析软件26by Li Ping哪一种离子化模式最好?o不知道要分析的化合物的性质是酸性或碱性o要分析的化合物中同时
10、包含酸性和碱性化合物o酸性和碱性化合物的浓度不同27by Li Ping可同时采集多种质谱信号: 正离子和负离子模式采集50组，30个离 子/组离子同时采集正负离子28by Li Ping我经常筛选未知物. 最好是同时获得分子 量和一些碎片信息我正在筛选未知物,但我 不知道最优的碰撞电压 我希望一次能获得在不 同碰撞电压条件下的谱 图可同时采集多种质谱信号: 高和低CID能量29by Li Ping低CID能量高CID能量可同时采集多种质谱信号: 高和低CID能量30by Li Ping0200000400000600000800000min12345670100000200000300000
11、400000500000600000700000800000 High fragmentor: 130 V Low fragmentor: 65 Vm/z100200300311.1 312.1156.1311.1108.1245.1218.1可同时采集多种质谱信号: 高和低CID能量磺胺药物演示混合样31by Li Ping可同时采集多种质谱信号: SIM/ScanSIM 来定量所选的目 标化合物离子对未知的化合物 SCAN32by Li PingScanSIM0100000200000300000400000500000600000min12345200004000060000800001
12、00000120000140000160000180000200000279.0m/z100200300279.0 280.0301.0磺胺药物演示混合样可同时采集多种质谱信号: SIM/Scan33by Li Ping可同时采集多种质谱信号: 时间编程信号1) 开始五分钟不采集信号2)5分钟开始采集信号3) 信号关闭采集Improve data quality and manage data file size:34by Li Ping从每一项分析中获得最大的信息一针注射样品可获得任意以下分析模式最多达四种1. 高/低 CID能量可获得分子量及碎片信息用于确认化 合物的结构2. 正/负 离子
13、化模式3. SIM/Full Scan 模式35by Li Ping如何建立自己的 HPLC/ESI和HPLC/APCI谱库36by Li Ping质谱库检索特点o 检索用户自建谱库 v使用 NIST 程序和检索规则 v没有应用独特的筛选,如PBMo 谱库可以包含结构式o 交互式或自动检索o DAD/MSD 组合检索报告 37by Li Ping自动生成谱库检索报告 Library search mode: Automatic library searchLibrary file No. : 1 Library file name : S:SPYDERMSLIBR1DOUGLIB.UVL Ma
14、tch threshold : 950 Purity threshold: Calculated Time window left % : None Case sensitive : No Time window right % : None Whole word : No Wavelength shift : 0.0 Compare spectrum : Yes Absorbance threshold : 0.0 Search logic : OR Search range : AllSignal 1: DAD1 A, Sig=254,8 Ref=450,80 Signal 2: MSD1
15、 TIC, MS FileNIST MS library search mode: Automatic library searchNIST MS library file No. : 1 NIST MS library file name : douglibRetTime Sig MW Library Match Formula Name min # Id -|-|-|-|-|-|-|-2.746 2 270 1 4 720 C9H10N4O2S2 Sulfamethizole 2.987 2 278 1 5 748 C12H14N4O2S Sulfamethazine 3.571 2 284 1
