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1、 血清尿素氮的测定目的要求 n了解血清尿素氮测定的方法及 临床意义。n复习尿素的生成机理及其意义 。实验原理 n血清(或血浆)中的尿素,在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟(DAM)共沸后,可缩合成一红色化合物,称为fearon反应。其颜色的深浅与血清(或血浆)中尿素的含量成正比,与同样处理的尿素氮标准液比色,即可测算出血清(或血浆)中尿素氮的含量。 实验材料 n1.器材 刻度吸管(0.1ml、 2ml、10ml) 恒温水浴箱 分光光度计n2.试剂 n(1)待测血浆 n(2)尿素氮试剂 n(3)二乙酰-肟试剂 n(4)尿素氮标准液 操作步骤 n取试管三支按下表操作 试管试剂(ml) 测定管 标
2、准管 空白管 1:4稀释血清(或血浆) 0.1 尿素氮标准液( 0.02mg/ml) 0.1 蒸馏水 0.1 二乙酰-肟 0.5 0.5 0.5 尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀,置沸水浴中加热15min,立即用自来水冷却5分钟 。分光光度计选用540nm波长,以空白管调零点,读取 各管吸光度。计算及结果分析n尿素(mg%)= 尿素氮标准液浓度*5(mg/ml;mg/100ml)测定管吸光度标准管吸光度注意事项 n1. 此法灵敏度高,用量极微(一般只需 0.02ml血清即可)。本实验是先将血清用 生理水以1:4加以稀释再取0.1ml,故最 后计算时,应乘以稀释倍数“5”n2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子,可增进显 色强度和色泽稳定性,但仍有轻度褪色现 象(小于5%/h)。n3. 此法操作简单,特异性强,不受其他非 蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响, 但应控制好实验条件。n4. 吸管必须校正,使用时务必注意清洁干 净,加量务必准确。n5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。 由于尿液中尿素氮含量高,标本需用蒸馏 水以1:50稀释。如果呈色后吸光度仍超过 本法的线性范围,还需将尿液再稀释,重 新测定。思考题 n血清尿素氮测定的方法及临床 意义。