实验14果蝇饲养与观察

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1、实验14.果蝇饲养与观察1.了解果蝇生活史中各阶段的形态特点；2.识别雌雄果蝇及常见突变类型；3.掌握果蝇饲养与杂交技术。一、实验目的果蝇：野生型、白眼、黑檀体、残翅、白眼小翅焦刚毛用具:解剖镜、放大镜、小镊子、麻醉瓶、白瓷板、瓷缸电子天平、电炉。试剂:乙醚、酒精、玉米粉、酵母二、实验材料、用具及试剂3.1 果蝇的生活史及形态特征黑腹果蝇（Drosophila melanogaster 2n=8）节肢动物门、昆虫纲、双翅目、果蝇科、果蝇属，与家蝇是不同的种。三、实验内容包括卵、幼虫、蛹和成虫4个阶段；为完全变态。最适温度：20-25生活史周期：12-15 day (20-25)10 day (

2、26)57 day (10)交配产卵：羽化8-12h 交配羽化两天后产卵成虫存活：15 day (25)3.1.1 生活简史三、实验内容羽化后的雌蝇12小时后开始交配，两天后产卵。卵长0.5mm，为椭圆形，腹面稍扁平，被绒毛膜，在背 面的前端伸出一对触丝（filament） 卵能附着在食物(或瓶壁)上，不致深陷到食物中去。 3.1.2 卵的形态与特征三、实验内容三龄幼虫4.5mm在培养基上作沟穿孔卵孵化后，经过两次蜕皮发育成三龄幼虫，体长4-5mm。可见头部(前端稍尖部分) 、口器(黑点)和唾液腺(口器 后一对透明长袋) ，躯体后半部上方的两侧，透过体壁可见 一对生殖腺，精巢大而黑、卵巢小而浅

3、，为鉴别依据。幼虫活动力强而贪食，在培养基上爬行时留下很多条沟 ，沟多而且宽时，表明幼虫生长良好。 3.1.3 幼虫形态与特征三、实验内容幼虫生活7-8天准备化蛹，化蛹前从培养基上爬出，附着在瓶壁上，逐渐形成一梭形的蛹。蛹前部有两个呼吸孔，后部有尾芽，起初蛹壳颜色淡黄而柔软，之后逐渐硬化，变为深褐色。深色硬化蛹表明即将羽化。 3.1.4 蛹的形态特征三、实验内容3.1.5 成虫的形态与特征幼虫在蛹壳内完成成虫体型和器官的分化，最后 从蛹壳前端爬出。刚从蛹壳羽化出来的果蝇虫体较长，翅膀尚未展 开，体表尚未完全几丁质化，故呈半透明的乳白色。 透过腹部体壁，可以看到黑色的消化系统。不久，虫体变为短粗

4、圆形，双翅展开，体色加深 。如野生型初为浅灰色，然后呈灰褐色。三、实验内容果蝇生活周期长短与温度关系很密切。30以上能使果蝇不育和死亡，低温使其生活周期延长、生活力下降，果蝇培养最适温度为20-25。10152025卵幼虫8天5天幼虫成虫 57天18天6.3天4.2天从表中可以看出，25时，从卵到成虫约10天；在 25时成虫约活15天。 3.1.6 温度与生活史三、实验内容1、生活史短，20-25下一个世代约12-15天；2、繁殖率高，一对果蝇可产卵400-500只；3、饲养方便；4、突变率高；5、形态容易辨认。3.1.7 果蝇的优点三、实验内容3.1.8 果蝇的寄生虫螨虫三、实验内容头部：有

5、一对复眼，三个单眼和一对触角。 胸部：有三对足，一对翅和一对平衡棒。 腹部：背面有黑色环纹，腹面有腹片，外生殖器在腹部末端，全身有许多体毛和刚毛。三、实验内容 3.2.形态构造3.3成虫雌雄鉴别雌果蝇雄果蝇 体形较大体形较小 腹部椭圆 形，末端稍尖腹部末端钝圆 腹部背面有明显的五条黑色条纹腹部背面有三条黑色花纹，前两条 细，后一条宽且延续至腹面 腹部腹面有明显的6个腹片(刚毛 围成一圈)四个腹片无性梳第一对跗节基部的一节有性梳 外生殖器外观比较简单外生殖器外观较 复杂，刚羽化的幼 蝇用低倍镜可明显观 察到生殖弧、 肛口板及阴茎三、实验内容个体大小腹纹53腹部末端尖圆性梳无有3.3.1 雌雄识别

6、要点三、实验内容个体大、个体小3.3.1 雌雄识别要点三、实验内容有性梳、没有 3.3.1 雌雄识别要点三、实验内容腹纹3条，末端圆； 腹纹5条，末端尖。3.3.1 雌雄识别要点三、实验内容成体果蝇雌雄性别的辨别体生殖孔空；体交配器圆3.3.1 雌雄识别要点三、实验内容3.4 果蝇基因组与性别决定三、实验内容染色体组成 2n=8核内有丝分裂：不涉及细胞核分裂的染色体分裂方式体联会：唾腺细胞染色体经多次复制却不分开，依旧 紧密地排列在一起就象减数分裂中的联会现象一样。染色体组： 2n=2x=8 ,x=4。连 锁 群：4对染色体携带基因；连锁群=4。3.4.1 果蝇基因组为XY型，但Y染色体在性别

7、上不起决定作用，只与育性 有关。含有Y染色体可产生正常配子，不含Y染色体则配子 不育；性别受性指数决定。X/A=1为雌性；X/A=0.5为雄性；X/A1为超雌；X/A 0.5为超雄；0.5X/A1则为中间性。雌雄基因平衡理论：X染色体上有很多雌性基因，常 染色体上有很多雄性基因，Y染色体上很少或没有与性别 决定有关的基因，因此性别决定于基因的平衡。3.4 果蝇基因组与性别决定三、实验内容3.4.2 果蝇性别决定X染色体上有141个基因；第2染色体上有228个基因；第3染色体上有156个基因；第4染色体上有12个基因。3.4 果蝇基因组与性别决定三、实验内容3.4.2 果蝇的连锁群突变性 状基因

8、符号形 状 特 征染色体白眼White w复眼白色X 1.5 cM檀黑体Ebony e体呈乌木色，黑亮IIIR 70.7cM 黑体Black b体呈深色IIL 48.5cM 残翅Vestigical vg 翅退化，部分残留IIR 60.7cM焦刚毛Singed sn刚毛卷曲x 21.0cM 小翅Miniatare m翅较短X 36.1cM3.4 常见的果蝇突变类型三、实验内容4.1.1培养基的配制 果蝇以酵母菌为食，常采用发酵的培养基繁殖 酵母菌来饲养果蝇。培养基常用玉米粉、米粉或香 蕉配制，本实验采用玉米培养基，其配方如下：四、实验步骤4.1 果蝇的饲养水80ml玉米粉8.25g糖6.2g琼

9、脂0.62g丙酸0.5ml酵母少许4.1.2 配制方法四、实验步骤4.1 果蝇的饲养将80ml水分成两份：一份用于溶解琼脂和糖，另 一份煮玉米粉，待两份分别溶解煮好后再合到一起煮 沸，很粘稠为度。关掉火后再加入丙酸，充分搅拌后再分装培养瓶；待培养基冷却后，在培养基表面洒上一层酵母粉。四、实验步骤4.1 果蝇的饲养4.1.3 注意事项分装前将饲养瓶、棉塞、吸水纸及其它用具和器皿高压 灭菌（15磅，15min）。 分装时，勿使饲料粘附瓶壁。 待饲料冷却后，洒上一层酵母粉或滴几滴酵母液于饲料 表面。用吸水纸擦净瓶壁上水汽，塞上棉塞。 准备灭菌的棉塞准备灭菌滤纸包好的棉塞121灭菌20min将果蝇转移

10、到新配制的培养基中繁殖。注意转 移手法，防止果蝇从两瓶接口飞走。可用黑纸包住亲 本果蝇瓶，让其飞入新培养基瓶。转移的亲本及新培养基果蝇的转移四、实验步骤4.1 果蝇的饲养4.1.4 果蝇继代转移培养四、实验步骤4.1 果蝇的饲养4.1.5 果蝇继代培养25培养7-10天，能见幼虫爬到瓶璧或滤纸上化蛹时，处死亲代果蝇。四、实验步骤4.2 果蝇性状观察4.2.1 果蝇麻醉果蝇性状观察、性别鉴定以及杂交亲本接种等操作宜 先将果蝇麻醉，使其保持安静状态。 （1）准备一只麻醉瓶，并配脱脂棉塞； （2）去掉培养瓶塞，立即与麻醉瓶口相对，培养瓶在上 一手稳住两瓶，另一手轻拍培养瓶使果蝇落入麻醉瓶中。麻 醉

11、转 移 果 蝇 手 法四、实验步骤4.2 果蝇性状观察4.2.1 果蝇麻醉（3）滴数滴乙醚于麻醉瓶棉塞内塞住，约30s，果蝇处于 麻醉状态。不能麻醉过度；蝇翅与蝇体呈45角翘起时表明 麻醉过度死亡。 （4）麻醉后的果蝇放在白瓷板或白纸板上，用毛笔刷移动 检查，肉眼或放大镜观察。不再用的果蝇务必处死防杂。滴 加 乙 醚 数 滴果 蝇 的 麻 醉 剂死亡果蝇的标志四、实验步骤4.2 果蝇性状观察4.2.1 果蝇麻醉蝇翅与蝇体呈45角翘起麻 醉 过 度 的 果 蝇四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.1野生型 +野生型红眼睛灰身体长翅型直刚毛四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.2突变性状焦

12、刚毛白眼小翅 sn w m白 眼 雌 雄 小 翅 与 尾 部 约 等 长w sn m分别在X染色体 1.5 21.0 36.1cM处焦刚毛：刚毛似火烫焦四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.3突变性状残翅Vestigical vg四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.4突变性状黑檀体(e)和黑体(b)黑檀体Ebony(e) 3号染色体70.7cM处黑体(b)在2号染色体48.5cM处四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.5 焦刚毛(sn)突变性状种类3、眼睛的颜色2、翅的大小1、身体的颜色四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.6 突变性状小结观察后的结果填入下表类类型特征 黑身

13、白眼小翅白眼残翅红红眼黑檀体野生型体色黑色(b)正常(+)正常(+)黑色(e)正常(+)眼色白色(w)白色(w)红色(+)红色(+)红色(+)翅形正常(+)小翅(m)小翅(vg)正常(+)正常(+)刚刚毛形态态正常(+)正常(+)正常(+)正常(+)正常(+)观观察数目四、实验步骤 4.3 突变性状观察4.3.6 性状观察记录注意事项1、配制培养基时要将玉米粉及琼脂和白糖要分开煮。2、转移果蝇时要防止果蝇飞走。3、麻醉果蝇时要掌握麻醉尺度，需要用活体时，不可以麻醉过度使果蝇致死。实验后不用的果蝇要及时处死，不可放飞。思考题1、绘制雄性果蝇性梳图。2、如何区分果蝇的性别？3、简述果蝇被麻醉死亡后的状态。