如何撰写国家自然科学基金申请书

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1、如何撰写国家自然科学如何撰写国家自然科学 基金申请书基金申请书黎 明 涛中山大学蛋白质组学中心 中山大学中山医学院基金申请基金申请l选题l撰写申请书l答辩写好申请书是申请成功的关键写好申请书是申请成功的关键 l基金的评审实质上只是对基金申请书质量的评审 l评审实际上只评申请书本身，不评实际学术水平 l学术水平高不等于申请能批准 l基金评审相对公正 撰写前的准备撰写前的准备l好心情、好身体 想好再写 3h /天l读指南、读通知 注意截止期l熟知申请过程、有关规定 l读标书、读高手、读同行、读自己 l选题 卖点：创新性 工作基础 l沟通 科研科、医科处标标 题题一个好的标题等于成功一半要求 确切、

2、醒目、新颖、主题明了 回答 干什么、用什么方法、解决什么问题 题目大小要适中，防止“大题目、小课题”围绕“科学问题”反复推敲 要求与“研究目标”呼应神经元凋亡时神经元凋亡时SP1SP1对对BH3-onlyBH3-only蛋白蛋白BimBim的转录调控的转录调控细胞凋亡 时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控 神经元凋亡时 BH3-only蛋白Bim的转录调控 神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的 调控SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控SP1对神经元凋亡的调控作用l关键词：SP1/Bim /基因调控/信号转导/神经元凋亡 标题标题摘摘 要要研究内容和意义（限研究内容

3、和意义（限400400字）字）1. 工作基础 继续和深入 发表和未发表 创新2. 科学问题 重要！不能缺！中肯 3. 预实验 针对“问题”的预实验结果4. 工作假设 思想性、创新性5. 主要方法 可靠性第一 先进性第二6. 研究目标 明确、具体7. 研究意义 理论性和应用性神经元凋亡时神经元凋亡时SP1SP1对对BH3-onlyBH3-only蛋白蛋白BimBim的转录调控的转录调控我们已经证明了撤钾诱导神经元凋亡时JNK/c-Jun 和 PI3K/Akt/FKHRL1信号通路不参与BH3only蛋白Bim的上调。 那么，Bim上调的转录机制是什么？启动子5末端序列续减分 析确立了诱导Bim表

4、达的启动子核心区，进而发现一个典型的 转录因子SP1结合序列位于其中。进一步实验显示：神经元凋 亡时SP1被激活；负显性SP1和SP1-DNA结合抑制剂mithramycin A抑制了Bim上调和神经元凋亡。由此，我们首次提出了Bim 上 调的新机制，即：神经元凋亡时转录因子SP1被激活，激活的 SP1直接调控Bim的诱导表达。本项目拟进一步采用腺病毒表达 技术以及启动子定点突变、EMSA和CHIP方法，旨在获得SP1直 接调控Bim基因的可靠证据。本项目将阐明SP1对促凋亡蛋白 Bim的调控作用和机制、为确立SP1作为神经退行性疾病治疗的 新靶点提供更充分的科学依据 .立立 项项 依依 据据

5、1. 1. 关键关键! ! 占占50% 50% 文笔流畅、层次分明、逻辑性强文笔流畅、层次分明、逻辑性强2. 摆事实、讲道理 我（而不是别人）能做的理由 意义 思想性 与摘要呼应 3. 自己的工作为依据 图文并茂 规范 4. 参考文献 时时效性 自己的文章 规范化5. 深入浅出 内行、外行读得懂 6. 人文文化 素质 精神 动人的故事 研究内容、研究目标与研究内容、研究目标与 拟解决的关键问题拟解决的关键问题要求：要求：明确、具体 解决学术问题术问题 ，与题目相呼应：神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控获得SP1直接调控bim基因表达的可靠证据，阐明促 凋亡蛋白Bim由SP

6、1转录调控的新机制，为确立SP1作 为神经退行性疾病治疗的新靶点提供更充分的科学 依据。研究目标研究目标研究内容研究内容 （紧紧围绕研究目标）1. 证明bim启动子核心区的SP1结合序列是否介导了bim基因的 上调 为了证实bim启动子核心区的SP1结合序列是否介导了bim基因的上调，将其 中的SP1结合序列进行点突变，使其不能结合SP1；确定这一突变是否能够消除bim启 动子的撤钾反应。2. 分析SP1 是否能够与bim启动子核心区的SP1结合序列结合 应用EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)技术，证实bim启动子核心区的SP1 结合序列是否

7、能够与SP1结合；进一步采用CHIP(Chromatin immunoprecipitation)方法，获得SP1与bim启动子核心区在细胞内结合的证据。3. 从 bim 的mRNA 和蛋白质水平，观察负显性SP1是否能够抑制撤钾诱导的bim基因的上调 质粒转染CGNs的转染率只能达到0.1-1.0 %，腺病毒的感染率可达7080%1。 因此，构建dnSP1的腺病毒载体Ad-dnSP1，感染CGNs才能达到可靠分析bim的mRNA和蛋白质表达水平改变的目的。4. 分析SP1诱导Bim这一机制对神经元凋亡的调控作用 确立SP1转录激活bim这一机制后，进一步分析这一机制对神经元凋亡的调控作用。

8、拟解决的关键问题拟解决的关键问题获得SP1直接调控bim基因表达的可靠依据。什么是关键问题？什么是关键问题？ 研究过程中对达到预期目标有重要影响的某些 研究内容或因素。 为达到预期目标所必须掌握的关键技术或研究 手段。 撰写要求：撰写要求：找出关键问题，问题清晰，分析透彻，合理的解决方法。研研 究究 方方 案案项目需求为前提； 可靠性第一，先进性第二； 参考文献 突出关键技术的描述 不主张使用流程图，建议开头：“有关方法、技术路线、实验手段、关键技术综述如下”。可行性分析可行性分析从从学学术术术术思想角度提出思想角度提出1. 工作基础 （学术思想）2. 科研梯队 3. 实验条件4. 实验技术5

9、. 交流与合作（国内、国外）创新是灵魂，是评议和能否批准的关键创新学术创新，思想创新包括： 新的理论 新的方法 新的体系 新的规律源头创新：原始性 唯一性源头：有进一步发展的前景创创 新新 性性本项目的特色与创新之处：本项目的特色与创新之处：申请人首次报道了神经元凋亡时促凋亡蛋白Bim上调是不依赖于 JNK/c-Jun通路(Leyu Shi,et al, Neurosci Lett. 2005)一观察之 后，又以可靠的实验结果证明PI3K/Akt/FKHRL1信号通路也不参与 bim的上调（见立项依据）。 bim上调的转录机制是什么？我们率先对bim启动子进行了5末 端序列续减分析，确立了诱导

10、bim表达的启动子核心区， 进而发现 一个典型的转录因子SP1结合序列位于其中。进一步实验显示：神 经元凋亡时SP1被激活；负显性SP1突变体和SP1-DNA结合抑制剂 mithramycin A可抑制bim的上调。根据以上生物信息学分析和实验 观察，我们首次提出了SP1介导bim上调这一新的bim转录机制：神 经元凋亡时转录因子SP1被激活，激活的SP1与bim启动子核心区的 SP1结合序列结合，从而转录激活bim的表达。本项目拟进一步采用负显性SP1突变体的腺病毒表达技术以及 启动子点突变、EMSA和CHIP方法，旨在获得SP1直接调控bim基因的 可靠证据，为阐明SP1对促凋亡蛋白Bim

11、的调控作用和机制并进一步 确立SP1作为神经退行性疾病治疗的新靶点提供更充分的科学依据 。 研究基础与工作条件研究基础与工作条件突出与项目相关的工作积累突出与项目相关的工作积累1.1.研究基础研究基础 已取得的研究工作成绩及与本项目已取得的研究工作成绩及与本项目 有关的研究工作积累有关的研究工作积累(对于自由申请项目，着重 填写申请人近期的主要工作业绩；对于重点项目， 请着重填写本课题组与本项目相关的研究工作积累 和近五年的主要研究业绩)2.2.工作条件工作条件 已具备的实验条件，尚缺少的实验已具备的实验条件，尚缺少的实验 条件和拟解决的途径条件和拟解决的途径(包括利用国家重点实验室 和部门开

12、放实验室的计划与落实情况)研究研究 基基 础础在国家自然科学基金(已结题三项、正进行一项)的资助下， 近五年有如下工作积累和成绩：1. SCI论文 近五年发表了14篇SCI论文；其中与神经元凋亡的信号转导和基因调控有关的论文，作为第一作者的有2篇，作为通讯作者的有4篇(见后)，作为共同作者的有8篇。2. Bim转录机制的前期工作 我们首次报道了神经元凋亡时JNK/c-Jun不参与bim的上调1，随后，我们又以可靠的证据揭示了PI3K/Akt/ FKHRL1也不介导bim的上调(未发表资料)。这些研究工作改变了以往的观点,也是本项目重要的立项依据之一。 3. Bim启动子核心区确立 启动子5末端

13、序列续减分析确立了诱导Bim表达的启动子核 心区，并发现一个典型的转录因子SP1结合序列位于其中。进一步实验显示：神经元凋亡时SP1被激活；负显性SP1突变体和SP1-DNA结合抑制剂均可抑制Bim的上调。这些实验资料揭示了SP1介导 bim转录调控的新机制，也为本项目申请提供了最根本的实验依据。4. 转录因子调控神经元凋亡的工作基础 另一项转录因子MEF2抗神经元凋亡的工作也显示了申请人与本项目相关的较扎实的研究工作积累。 本人首次报道(Mingtao Li, et al, J of Neurosci. 2001, 21:6544-6552 )、随后被他人证实(Shu-ichi Okamot

14、o, et al, PNAS 2002, 99:3974-3979)，神经元凋亡时转录因子MEF2A和MEF2D不仅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡杀手caspase 剪切，其N-末端产物反而具有促凋亡活性。这一MEF2调控凋亡机制的发现，不仅对于我们理解神经元存活或凋亡具有重要的意义，而且也为神经系统的发育和分化的研究开拓了一条崭新的思路，具有创新性。5. 信号转导的工作基础 较早的一项对cAMP / PKA 抗神经元凋亡机制的研究也反映了本人在神经元凋亡信号转导的研究方面有较厚实的工作积累 。申请者首次发现促凋亡激酶 GSK-3 和GSK- 3是PKA的天然底物；阐明cAMP/PKA

15、通过磷酸化并抑制GSK-3发挥其促神经元存活的作用，此内容发表在分子细胞生物学( Mingtao Li, et al, Mol Cell Biol. 2000, 20: 9356-9363)。6. JNK/c-Jun通路的工作基础 我们首次以JNK/c-Jun为直接靶点、用小分子JNK抑制剂(SP600125)治疗帕金森病动物，证实JNK是有效的治疗靶点。此工作发表后 (Neuroscience Research, 2004; 48:195-202)，得到了国际同行的认可。SCI期刊Drug News Perspectives邀请本人撰写了有关“以JNK为靶点治疗帕金森病”的专题综述“JNK

16、Inhibition as a Potential Strategy in Treating Parkinsons Disease”(Drug News Perspect. 2004; 17:646-54)。 工工 作作 条条 件件2001年回国，获得211基金180万元，组建了一流的分子、细 胞生物学实验室。2002年，作为负责人获得一期985学科建设经 费700万元，筹建了一流的蛋白质组学实验室并正在主持开展蛋 白质科学的前沿性工作。近三年，培养和汇聚了一支从事分子 神经生物学和蛋白质组学研究的科研队伍。 这些建设性工作为 解决细胞信号转导、基因调控以及本项目的核心问题奠定了扎 实的基础。项目负责人黎明涛所在单位中山大学中山医学院药理 教研室是211项目资助学科和国家重点学科。人才济济，科研