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1、实验实验10 10 过氧化氢酶活性测定过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）（高锰酸钾滴定法） 一 实验目的1 掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理和方法；2 了解过氧化氢酶的作用。二 实验原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。反应式5H2O2+2KMnO4+4H2SO45O2+2KHSO4
2、+8H2O+2MnSO4三 实验器材n10%H2SO4；n0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；n0.1mol/L KMnO4标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；n0.1mol/L H2O2：取30%H2O2 （17.6mol/L）溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）标定。1 试剂2 材料:小麦叶片3 主要设备：离心机，恒温箱，酸式滴定管四 方法步骤1、 酶液提取取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液 少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中
3、 ，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至 容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000转离 心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液 。 2 、滴定：取50mL三角瓶3个（2个测定，另1个为对照），测定瓶中加入酶液2.5mL，对照加煮死酶液2.5mL，再加入0.1mol/L H2O2 2.5mL ，同时计时，于30恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5mL。 3、用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30s内不消失）为终点。 5 5 实验结果实验结果酶活性：每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示式中：A对照KMnO4滴定mL数；B酶反应后KMnO4滴定mL数；VT提取酶液总量（mL）；VS反应时所用酶液量（mL）；W样品鲜重（g）；T反应时间（min）；1.71mL0.1mol/L KMnO4相当于1.7mgH2O2。六 思考题 简述测定过氧化氢酶的生理意义？下周实验：实验36谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定
