《中国药科大学 药物分析课件(第六版) 第十一章 抗生素类药物分析》由会员分享,可在线阅读,更多相关《中国药科大学 药物分析课件(第六版) 第十一章 抗生素类药物分析(40页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、第十一章 抗生素类药类药 物的分析中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室Your company sloganYour company slogan在低微浓度下即可对某些生物(病原微生物)的生命活动有特异 抑制作用的化学物质的总称内酰胺类 氨基糖苷类 四环素类 大环内酯类 多烯大环类 多肽类1. 抗生素(antibiotics)2. 分 类中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室一、概 述Your company sloganYour company slogan化学纯度较低 活性组分易发生变异 稳定性差3.
2、来 源4. 抗生素的特点化学合成半合成生物合成(发酵)生产工艺复杂发酵过程不易控制, 易受污染原因中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室一、概 述Your company sloganYour company slogan采用生物学法与物理化学法鉴别:理化方法、微生物法检查:水分、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等含量/效价测定:微生物法 :与临床疗效吻合,灵敏度高,但操作复杂费时;理化方法:准确度与专属性较高,且操作简便,但与临床疗效有偏差5. 抗生素质量分析一、概 述中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室Your company sloganYour c
3、ompany slogan1. 化学结构包括青霉素类和头孢菌素类青霉素类:6-APA为母核 头孢菌素类:7-ACA为母核中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室二、内酰胺类Your company sloganYour company slogan酸性较强(pKa 2.5-2.8)临床常用其碱金属盐 (水溶性好)酸性(羧基)有多个手性碳旋光性青霉素类:苯环取代基头孢菌素类:母核有共轭结构UV(共轭)干燥条件较稳定,溶液不稳定稳定性(内酰胺)2、主要 理化性质降解 失效氧化剂、酸、碱 酶、金属离子、青霉素中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室二、内酰胺类Your c
4、ompany sloganYour company slogan2、主要理化性质中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室二、内酰胺类Your company sloganYour company slogan1)羟肟酸铁反应:内酰胺类 羟肟酸 显色2)茚三酮反应-氨基 蓝紫色3)双缩脲反应内酰胺类 紫色4)光谱法(UV、NMR)5)色谱法(HPLC、TLC)NH2OHHCl NaOHFe3+ H+茚三酮 碱性酒石酸铜呈 色 反 应3、鉴 别中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室二、内酰胺类Your company sloganYour company slogan
5、3、鉴 别-头孢利定的头孢利定的NMRNMR鉴别法鉴别法 ( (JP14)JP14)NMR鉴别法单峰信号取本品50mg溶于0.5ml重水中,测定NMR光谱时,应显示多重峰信号多重峰信号= 3.8 附近 = 6.97.5= 7.99.0235强度比中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室二、内酰胺类Your company sloganYour company slogan3、鉴 别-头孢氨苄鉴别的TLC条件CHP(2000)5mg/ml 2l 硅胶G 0.1mol/L枸橼酸液-0.2mol/LNa2HPO4-丙酮 (120:80:3) 0.1% 茚三酮溶液显色USP(24 )25
6、mg/ml 5l 硅胶 醋酸乙酯-水-乙腈-冰HAc (48:18:14:14) 短波长UV光检出 BP(1999)0.4%(W/V) 1l 硅烷化硅胶HF254 15.4% NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15) 254nm 检出中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室二、内酰胺类Your company sloganYour company slogan4、特殊杂质检查-聚合物、有关物质、异构体等色谱条件与系统适用性试验测定法头孢他啶中聚合物测定头孢呋辛酯中 有关物质和异构体的检查色谱条件与系统适用性试验异构体和有关物质举 例:中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分
7、 教 研 室二、内酰胺类Your company sloganYour company slogan头孢他啶中聚合物测定-色谱条件与系统适用性试验葡聚糖凝胶G-10理论板数应不低于900, 拖尾因子在0.751.5254nm 检 测流动相A: 含3.5%硫酸铵 的0.01mol/L 磷酸盐缓冲液蓝色葡聚糖 2000中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室Your company sloganYour company slogan头孢他啶中聚合物测定-色谱条件与系统适用性试验葡聚糖凝胶G-10峰面积的RSD应小于5.0%254nm 检 测流动相B: 0.01%十二烷基 硫酸钠溶液头
8、孢他啶 对照品溶液中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室Your company sloganYour company slogan头孢他啶中聚合物测定-测定法葡聚糖凝胶G-10254nm 检 测流动相A: 含3.5%硫酸铵 的0.01mol/L 磷酸盐缓冲液头孢他啶样品 (20mg/ml)外标法计算,本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%AS中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室Your company sloganYour company slogan头孢他啶中聚合物测定-测定法葡聚糖凝胶G-10254nm 检 测流动相B: 0.01%十二烷基 硫
9、酸钠溶液头孢他啶 对照品溶液AR外标法计算,本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室Your company sloganYour company slogan头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查头孢呋辛酯A,B异构体之间、头孢呋辛酯A异构体与头 孢呋辛酯2-异构体之间的分离度应大于1.5;色谱条件: ODS分析柱; 0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇(62:38)为流动相; 流速1ml/min; 检测波长278 nm。系统适用性试验:理论板数按头孢呋辛酯A异构体峰计算,应不低于1500。中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教
10、研 室Your company sloganYour company slogan40020600302010时间(min)峰高(mAU)654A异构体B 异 构 体113.95411.9192.401B异构体峰的相对保 留时间约为0.85, A异构体峰的相对保 留时间为1.0。供试品色谱图中, A异构体峰的面积与 A、B异构体峰的面 积和之比应为0.48 0.55。头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室异构体Your company sloganYour company sloganv 供试品溶液:0.2mg/ml(流动相溶) v 对照溶液:
11、供试品溶液,加流动相稀释成6g/ml v 对照溶液进样20l ,调节仪器灵敏度,使主成分峰高 约为记录仪满量程的10% v 取供试品溶液和对照品溶液各20l,分别注入液相色谱 仪,记录色谱图至主峰保留时间的2.5倍 v 供试品溶液如显杂质峰,量取各杂质峰面积的和,不得 大于对照溶液主峰的面积中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查有关物质Your company sloganYour company slogan5、含量测定-碘量法(ChP2000)二、 内酰胺类内酰胺类中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室原理:青霉素与头孢菌素
12、本身不与碘反应,但其碱性降解产物可消耗碘青霉素族 头孢菌素族NaOH 水解4I2 H +8I-I2+2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6定量过量剩 余Your company sloganYour company slogan5、含量测定-碘量法(ChP2000)中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室反应分两步进行:水解反应 (按化学计算量进行)氧化-还原反应 (无定量关系,受温度、pH值和时间等因素影响,应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)Your company sloganYour company slogan5、含量测定-碘量法(ChP2000)中 国
13、 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室因样品中杂质会消耗碘,故应作空 白试验。加入样品,不加碱;其余试剂(醋酸盐缓冲液,碘液,硫代硫酸钠)都 要加碱。空白试验:空白试验与经典空白试验不同:Your company sloganYour company slogan5、含量测定-碘量法(ChP2000)中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室试验条件:(I2氧化)弱酸性(pH4.5) 20分钟后,耗碘量随时间的变化较 小碱 I2 IO3- + I- 酸 某些药物与碘生成复盐沉淀温度(2426)温度38 时未水解的供试品亦消耗碘反应时间:( 20分钟)Your compan
14、y sloganYour company slogan5、含量测定-碘量法(ChP2000)中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室含量 对照品V样空 - V样 W对 V对空 - V对 W样灵敏度高:样品 : 碘 = 1 : 8 反应条件、实验操作要求高1份含量V对、V对空V样、V样空加试剂次序、反应时间、滴定速度相同特 点:Your company sloganYour company slogan5、含量测定-电位配位滴定法(汞量法)中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室原理:青霉素不与汞盐反应,其碱性降解产物可与Hg2+络和。Hg+ + 2R-SH (RS)
15、2Hg + 2H+方法说明:a、空白试验与碘量法类似,加样品,不加NaOHb、与碘量法相比,汞量法不需对照试验Your company sloganYour company slogan5、含量测定-其他常用方法中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室酸碱滴定法:应用广泛 硫醇汞盐法羟肟酸比色法HPLC法:应用广泛咪唑 HgCl2(max 324345nm)青霉素 青霉烯酸硫醇汞盐NH2OHH+ Fe3+内酰胺类 红色Your company sloganYour company slogan5、含量测定(例)-阿莫西林克拉维酸钾片中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室填充剂流动相检测波长峰形阿莫西林峰 与克拉维酸 峰的分离度 应大于3.5色谱条件与系