《小鼠输精管结扎和简单精子操作》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠输精管结扎和简单精子操作（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、小鼠输精管结扎和简单精子操 作实验目的 掌握小鼠手术的基本技巧 学习雄性小鼠生殖系统特点 练习显微操作技术实验内容 雄性小鼠生殖系统观察 小鼠输精管结扎 使用移卵装置操作精子设备、耗材雄性小鼠手术器械（外科镊、眼科镊、手术剪、手术弯针、解剖针、止血钳、1 ml注射器各一把） 酒精灯 酒精棉球 消毒酒精 苯扎溴胺 盆（配消毒水洗手术器械） 戊巴比妥钠以 6.7mg/ml （生理盐水配制） 乙醚 无菌生理盐水 1L或2L玻璃烧杯或搪瓷杯（麻醉用） 缝合线 蜡盘 细绳 脱脂棉 纱布 显微镜、解剖镜 凹玻片 载玻片 麻醉麻醉方法1： 拇指和食指捏住小鼠头部皮肤，小鼠背靠手掌，将尾 巴固定在小指和无名指
2、缝中，此时小鼠牢固被固定 在左手中。使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手 持注射器将针头在下腹部沿髂骨上缘水平、靠近腹 白线的两恻进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左 右，接着使注射针头与皮肤呈45角刺入腹肌，穿过 腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵 抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓， 如无回血、肠液和尿液后即 可缓缓注射药液。注射 量为0.1-0.2ml/10g体重。输精管结扎麻醉方法2： 用浸润乙醚的棉球或纱布放在密闭的容器内， 再将动物放入，并注意动物的行为。开始时动 物出现兴奋，进 而出现抑制，自行倒下，当 动物角膜反射迟钝、肌紧张降低，即可取出动 物。若动物逐渐开始
3、恢复肌紧张（重新挣扎） 则重复麻醉一次，待平静后即可进行实验。若 实验时间长，可先保定动物在实验台上，将乙 醚棉球或纱布靠近其鼻部，即可开始实验。实 验过程中，应注意动物的反应，适时追加乙醚 吸入量，维持其麻醉深度和 时间。输精管结扎消毒输精管结扎 将小鼠腹面向上放在手术蜡盘上 用细绳将小鼠四肢固定在蜡盘上 用70%酒精擦拭小鼠腹部 用棉花擦干 剪去腹部被毛（可不做）腹部横切法输精管结扎 在下肢上端水平线正中用剪刀横向剪开1.5 cm，同样剪开腹壁。用缝皮针缝住腹壁切 口边缘 用眼科镊斜向下 方夹住一侧的脂 肪垫将睾丸、附 睾和输精管拉出 切口腹部横切法 钝性分离输精管约1 cm 用眼科剪在两
4、侧剪断 夹住脂肪垫将睾丸放回 腹腔 同上处理另一侧 缝合腹壁 缝合皮肤输精管结扎阴囊纵切法输精管结扎 轻压腹腔，将睾丸 推回阴囊 沿阴囊正中线开口 1 cm 确定白色的阴囊壁 中线阴囊纵切法 在中线左侧的阴囊包膜上 切开5 mm 向左推睾丸，找到输 精管，夹出切口 剪断1 cm 处理右侧睾丸 缝合切口输精管结扎术后处理 术后小鼠放回鼠笼 用50 W白炽灯加热，以维持体温。 小鼠苏醒后放回饲养间输精管结扎取精 断颈处死小鼠 开腹，取出睾丸、附睾和输卵管，放在载 玻片上 在解剖镜下观察结构 用注射器吸取0.1 ml生理盐水 用注射器针尖挑开附睾尾，用解剖针或镊 子轻压附睾尾 用注射器吸取精液，注入凹玻片精子操作挑单精子 用10倍镜观察精子活力 注意镜头不要沾水，用40倍镜时应加盖片 或取一滴在载片上，盖上盖片观察 组装口吸管 用口吸管吸取单个精子，放入另一个凹处 （先加一点生理盐水） 能否连续取出10个精子？分别放入凹片？精子操作整理器材 手术器材和凹片洗净，放在来苏儿水盆中 消毒，放回原处 清理杂物，收拾台面作业 雄性小鼠外观特点 你选用的结扎方法、效果 附睾和输精管的形态 口吸管使用效果注意写明你在小组实验中亲手操作了那些 步骤
