鸡卵类粘蛋白的制备及活力测定

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鸡卵类粘蛋白的制备及活力测定一、实验目的掌握从鸡蛋清中提取卵类粘蛋白的方法了解凝胶层析法的工作原理，掌握其基 本操作技术掌握离子交换纤维素柱层析的基本操作 技术掌握测定鸡卵类粘蛋白活力的方法二、实验原理（一）鸡卵类粘蛋白的特性 1.糖蛋白 2.在中性及偏酸性溶液中对热及高浓度的 脲、有机溶剂都有较高耐受性；碱性溶液 不稳定 3.在50%丙酮或10%三氯乙酸溶液中仍有较 好的溶解度（二）凝胶过滤（分子筛层析）的基本原理（三）离子交换层析的基本原理（四）活力测定原理鸡卵类粘蛋白具有强烈的抑制胰蛋白酶的作用；胰蛋白酶能水解酯键、酰胺键 和肽键，利用这一性质用人工合成的底 物或天然的蛋白质可以测定胰蛋白酶的 活力，由此可计算卵类粘蛋白的活力。三、实验流程卵类粘蛋白的抽提（活力测定）分子筛层析（凝胶预处理装柱平衡上样 洗脱收集蛋白峰活力测定）离子交 换层析（活力测定）透析丙酮沉淀 离心(活力测定) 四、操作方法参见实验讲义五、思考题1.利用凝胶层析法分离混合样品时，怎 样才能得到较好的分离效果？2.通过本实验，指出酶活力测定对于酶 的分离提纯有何意义？