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1、血液清蛋白测定 与 重复性实验血液清蛋白测定与重复性实验一、BCG法测定血液清蛋白试验二、商品BCG试剂重复性能评价试验一、BCG法测定血液清蛋白试验1.血液清蛋白测定的临床意义 2.BCG法测定血液Alb的实验原理 3.实验材料 4.实验方法 5.实验结果 6.结果处理、分析（讨论）1.血液清蛋白测定的临床意义2.BCG法测定Alb实验原理3.实验材料n试剂：商品试剂盒n器材：试管、加样枪、722分光光度计4.实验方法5.实验结果5.1 自配BCG组检测结果5.2 商品BCG组检测结果6.结果处理、分析与讨论6.1 以XS表示所测得实验结 果6.2计算样本清蛋白含量。n 血清白蛋白在pH4.
2、2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂Brij-35存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有强的吸收峰，其颜色的深浅与待测白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清白蛋白含量。【溴甲酚绿法测定原理】【注意事项】n1、实验证明：BCG不但与白蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白结合呈色，其中以球蛋白、转铁蛋白、触球蛋白更为显著，其反应速度较白蛋白 稍慢，但实际上，血清与BCG混合即时“慢反应” 已经发生，同时也有实验证明“慢反应”持续1小时才完成。故有人主张用定值参考血清作标准比 较理想，并主张读取一分钟吸光度计算结果。n2、当60g/
3、L白蛋白标准与BCG结合后，溶液光径为 1cm，在630nm测定的吸光度应为0.8110.035， 如达不到此值，表示灵敏度较差。【临床意义】n1、血清白蛋白参考值：35-55g/L；n2、血清白蛋白浓度降低：在临床上比较重 要和常见，通常与总蛋白降低的原因（疾病 ）大致相同。急性降低主要见于大出血和严 重的烧伤；慢性降低见于主要由于肝脏合成 白蛋白功能障碍、腹水形成时白蛋白的丢失 和肾病时尿液中的丢失等，严重时白蛋浓度 可低于10g/L；白蛋白浓度低于20g/L时，由 于胶性渗透压的下降，常见到水肿等现象。 【临床意义】n3、血清白蛋白浓度增高：常见于严重脱水 所致的血浆浓缩；n4、A/G
4、某些病人可同时出现白蛋白减少和 球蛋白升高的现象，严重者比值可1。这 种情况称为A/G比值倒置。n5、文献报道还有极少见的因白蛋白合成障 碍，血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白 缺乏症。二、商品BCG试剂重复性能评价试验1.重复性能评价试验的意义 2. 重复性试验的原理 3.实验材料 4.实验方法 5.实验结果 6. 结果处理、分析（讨论）1.重复性能评价试验的意义重复性试验的目的是评估实验方法出现偶然误差 的概率由于导致偶然误差的因素非常多，包括仪器稳定 性、分析环境温度、试剂质量、标准品的稳定 性、吸量准确性、混匀的充分性以及反应时间 的把握度等，因此，做好重复性试验的前提是 ：排除上述干
5、扰因素！2. 重复性试验的原理在相同条件下（同方法、同试剂、同标准品、同仪器、同实验室、同操作者），对同 一标本在一定时间内，进行m轮，每轮n次重复测定，从而获得试验方法的批内精密度数据重复性试验根据一定时间间隔可分为：批内、天内、天间三种重复性试验2. 重复性试验的原理批内：根据临床标本特点（正常、异常）， 分别对低、中和高浓度在短时间内进行m 轮，每轮n次重复测定，分别求取三种浓 度的精密度数据 天内：对低、中和高浓度，分别在上午、中 午、下午、晚上，进行m轮，每轮n次重 复测定，分别求取三种浓度的精密度数据 天间：对低、中和高浓度，每天测定1次， 连续监测20天以上，分别求取三种浓度的
6、精密度数据3.实验材料n试剂：商品试剂盒n器材：试管、加样枪、722分光光度计4.实验方法5.实验结果【计算】n 1、检验20次测定数据的离群值；如存在异常值 时应剔除。对小样标本来讲，Grubbs检验方法概 率意义明确，能给出严格的结果，是最合理的检 验方法。n用Grubbs检验准则，检验离群值的统计学工式是 ：n 式中Xd为离群值；X 为包括离群值在内的测定值 的均数；S为包括离群值在内的测定值的标准差。n计算时将20个测定值进行按小到大排列，离群值 Xd先取最小和最大值进行检验；如果离群继续往 里取。【计算】n如果计算的G值大于系数表5-5中相应显著水平的a和测定 次数n时的临界值Ga.
7、n，则将Xd作为异常值弃舍，可按下 述三种情况来处理：n (1) 只有一个离群值的情况：设有n个测定数 (X1X2X3X4Xn)，其中X1为离群值,即可利用上述 公式，直接对X1进行检验。n (2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃， X1自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，但在检 验X1时，测定次数不应该做为少了一次。n (3) 如果离群值有两个或两个以上，而且又分布于均数 两侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn， 是否应该舍弃。如果有一个数据决定舍去，那么在检验另 一个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此 时应该选择的99%置信水平。循环次数 显著性水平0.05 0.01n 2.504 2.821n 2.531 2.853n 2.557 2.8846. 结果处理、分析（讨论）n采用EXCEL软件计算X、S和CV%或且n采用SPSS13.0统计学软件计算X、S和 CV%分别计算低、中、高三种浓度的精密度，讨 论BCG法在这三种浓度间有何差别【思考题】何为重复性试验以及其在方法学评价中有何意义？
