《生殖支原体检测》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生殖支原体检测（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 自 tully1 等 1981 年首次从非淋菌 性尿道炎男性患者的尿道分泌物中分离培养 出 2 株生殖原体（mycoplasma genitalun,mg）以后，许多学者对 mg 的生 长特性、免疫学特性、分子生物学特性以及 与疾病的关系等进行了大量的研究并建立了 多种 mg 的检测方法，本文就 mg 的检测方 法研究进展进行简要综述。 1 分离培养法 1.1 培养基培养 1,2 mg 对培养基要求 极高且生长缓慢,培养较难,尤其是临床标本 中 mg 的培养更不容易成功.tully1981 年建 立了对医学支原体具有重要意义的 sp-4 培 养基
2、.适合于 mg 生长的 sp-4 培养基,不含醋 酸铊,含 mg 代谢所需的葡萄糖及其它营养 成份,最适 ph 为 7.4-7.5,可通过加入 0.8%noble 琼脂或 0.50.6%琼脂而固体化, 用于克隆菌株,观察菌落,tully 等利用这种培 养基,从 13 份尿道分泌物标本中分离培养获 得 2 株 mg,培养期约为 50 天.1996 年 jensen 等还报道了另一种适合 mg 生长的培 养基，即改良 friis 肉汤培养基，11 份 pcr使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ mg-dna 阳性的尿道分泌物标本中，有 6 份在其中呈阳性生长。 国内学者对 sp-4 培养
3、基进行了改良。 赵季文等 4 利用改良的 sp-4 培基从性病及 性乱人群中分离 mg 获得成功，初代生长时 间在 30 天以上，平均为 37.83 天，最长为 55 天。 1.2 组织细胞培养法 组织细胞培养支 原体，可为支原体提供良好的类似体内的生 长环境。早在 60 年代，chanock 等 5 报道 了肺炎支原体（mp）在组织细胞中的生长。 90 年代，jensen 等 3，6 开始尝试用细胞 培养法来进行 mg 的繁殖，并借此在电镜下 观察到 mg 侵入细胞的过程以及在细胞内的 定位。在 pcr 的监测下，jensec 发现在 11 分 pcr 检测 mgdna 阳性的尿道标本中，有
4、 9 份适应在 vero 细胞磁头中增殖，经过多 次传代培养后转入改良的 friis ff 肉汤培养基 中，有 6 份能继续传代生长，最终在琼脂培 养基中克隆获得 4 株。jensen 认为，在分 离获得新的 mg 菌株方面，细胞培养繁殖过 程起到了三方面的作用，一是使临床标本中使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ mg 逐渐适应在人工培养基中生长，二是 增加了接种于支原体肉汤培养基中的支原体 数量，三是提供持续的接种源。 2 血清学方法 根据 mg 的免疫学特性，人们建立了用 检测 mg 抗体和检测与鉴定 mg 抗原的血清 学方法。 furr 等 7 于 1984 年详细报道了检测
5、 mg 抗体的 mif 技术。moller 等对 31 例未检 测出 ct 和 mh 血清抗体的急性盆腔炎患者， 用 mif 检测 mg 抗体，发现其中大约 40%在 发病后一个月内抗体滴度有 4 倍或 4 倍以 上的改变。taylor-robinson 等 9 报道应用间 接 mif 检测 ngu 患者 mg 抗体，认为间接 mif 试验是一种具有足够敏感性、特异性和 简便易行的检测方法。jensen 等曾用 eia 检 测有尿道炎症与无尿道炎症状的男性 std 患 者急性期血样标本中 mg 抗体，结果发现反 应性较弱，且与 mp 存在广泛的交叉反应。 根据特异性抗体能阻止支原体的生长及 代
6、谢这一特性，可采用已知高价血涉及进行 祖先生长及代谢抑制试验以鉴别支原体使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ mit 鉴定所分离获得的 mg 菌株。 暴露于支原体表面的脂结合膜蛋白 （lipid-associated membrane proteins,lamps 是一种支原体种属特异性抗 原，具有高抗原性，且不同菌株的支原体， 其 lamp 抗体具有高度种属特异性，与其它 种属无交叉反应 12，13。 ）因此提取 mg 的 lamp 建立 elisa 方法检测 mg 抗体，可 消除 mg 与 mp 之间的交叉反应。 3 分子生物学方法 dna 探针和聚合酶链反应（pcr）检测 mg
7、 的方法，克服了前两类检测方法的弊端， 为研究 mg 与疾病的病因学关系提供了有力 的手段。 3.1dna 探针技术 1987 年 hyman14 用 pucb 载体构建成 mg 基因文库，并从中 筛选制备出特异性 dna 探针，通过斑点杂 交，可检测仅含 0.1 ng 的特异性支原体 dna，即 105cfu。 3.2 聚合酶链反应（pcr）技术 pcr 是 一种新的基因诊断技术，灵敏度高，特异性使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 年，pcr 技术开 始在医学支原领域应用。 早期的引物多参照菌体末端特异性粘附 蛋白的 dna 序列而设计。palmer 等体外扩 增 mg 粘附蛋白
8、的部分核苷酸序列，3 株 mg 均出现 37bp 的 dna 片断，并证明 pcr 技术可检测到 10-15g 的 mg-dna，其引物 序列的： mg1:5tgt cta tgacca gta tgt ac3 mg2:5ctg ctt tgg tca aga cat ca3 1991 年 jensen 等 16 根据 mg 的粘附 蛋白基因设计合成了如下组引物： mgpa-1 5aga tga tga aac cct aac ccc ttg g3 mgpa-1 5gac cat caa ggt att tct caa cag c3 mgpa-1 5ccg agg ggt ttt cca tt
9、t ttg c3 用 mgpa-1 和 mgpa-3 成功地扩增出 mg 的 281bpdna 片段，5 个临床分离株扩 增出同样的产生，而其他支原体和细菌均为 阴性，用 mgpa-2 作探针，对扩增产物经 southern ep 印迹杂交，均为阳性，证明引使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 50 个 mg 细胞。1993 年 jensen 等 17 又根据 mg 粘膜蛋白基因设计了另一对引物，即： mg 粘附蛋白基因设计了另一对引物， 即： mgpa-476：5atg gcg agc cta tct ttg atc ctt taa 3 mgpa-903：5ttc acc tcc
10、cca cta ctg tcc taa tgc3 用来证实和补充引物 mgpa-1 和 mgpa- 3 所扩增的结果，其扩增片段为 453bp。研 究发现，这两对 mg 粘附蛋白引物的敏感性 完全一致。用这种方法检测 99 例尿道炎病 人的尿道拭子，结果 17 例 mg 阳性，而用 培养法无一例阳性。 1994 年 jensen18 扩增 mg 粘附蛋白 基因序列并测序表明：该序列在 mg 条件之 间有明显异质性，为此，jensen 等学者根 据原体属性高度保守区域 16srrna 的基因序 列，设计了种特异性 pcr 引物，以期检测临 床标本中所有 mg 的感染：其引物序列为： mg-1，5
11、gaa tga ctc tag cag gca atg 使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ mg-2，5att tgc tgc tca ctt tta caa gtt ggct3 4 种临床标本的实验结果表明，mg 粘 附蛋白的基因序列不相同，但其 165rrn 基 因序列则是 100%同源，将两种引物 pcr 结 合，还可在可疑阳性标本中检测出 10-50 个 mg 基因拷贝以下的 mg 基因，即以 16srrna 基因为靶基因的 pcr 系统在保证长 期特异性基础上更为灵敏。 赵季文等 19 采用 palmer 设计的引物，扩增 mg37bpdna 片段，检测三种人群的 mg，
12、 结果是性乱人群阳性率为 25.26%，性病人 群为 12.33%，而健康人群为 3.85%。孔繁 荣等 20 采用 jensen 设计的 mgpa-1 和 mgpa-3，扩增 mg281bpdna 片段，检测结 果是性乱妇女 mg 检出率为 10.2%，std 患 者为 4.0%。 1998 年，糜祖煌等 2 研究报道了分别 以 mg 粘附蛋白和 16rrna 基因为靶基因建 立的二种套式 pcr 检测技术，前者扩增生 mg 的 374bpdna 片段，后者扩增产生使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 片段。套式 pcr 不仅提高了灵敏 度，而且因采用两对不同的引物，特性也进 一步
13、的得到提高。用这些法检测 40 例女性 std 患者，发现 mg 阳性 12 例，阳性率 30%， 检出阳性率均高于普通 pcr 法。 4 小结 微生物感染诊断的“金标准”是培养法， 然而 mg 培养成功率极低，有待于对培养基 进行进一步的研究和改良，以促进 mg 在其 中的生长；此外，将细胞株引入 mg 的培养 可能是一个较好的方法，有必要加强这方面 的探索和研究。免疫学检测方法因支原体种 属间易出现交叉反应以及对抗原、抗体纯度 要求较高而在实际应用上受到一定限制，若 能研究建立快速、灵敏、特异的检测临床标 本中 mg 抗原的方法，则具有较大的实用价 值。pcr 技术是一个简单而又直接的检测
14、 mg 方法，正被日益广泛地采用，主要用于 mg 感染的早期诊断或急性感染的诊断及各 种人群中 mg 的流行病学研究。但在应用时 应注意：临床标本中 mg 含量低，dna 纯 度不够，抑制物过多，taqdna 聚合酶活性使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ dna 的提取技术；因 pcr 灵敏度极高，在整个 操作过程中均应严格避免 pcr 产物的污染， 以减少假阳性。 5 参考文献 tully jg,d.taylor-robinson,rm,cole,and dl rose,a newly discoveed mycoplasma in the human urogenital tr
15、act.lancet ,1981,1288 tully jg,d tylor-robinson,dl rose,et al.mycoplasma genitalium,a new species from the human urogenital tract.int j.syst .bacteriol,1983,33(2):387 jensen js,hansen ht,lind k,isolation of mycoplasm genitalium strains from the male urethra.j clin microbiol,1996,34(2):286 赵季文，王婉云，范宝剑，等。生殖支原体 分离培养及流行病学意义的研究，南京铁道 医学院学报，1997，1
