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1、实验三、食用菌母种制作分离技术 一、目的要求1、明确食用菌无菌操作技术要点。 2、掌握食用 菌母钟分离技术。 二、基本原理：食用菌母钟分离方法较多，但主要 采用组织和孢子分离，所不同的是前者取子实体 某块组织，后者取子实体的孢子经过培养形成的 纯菌丝体（纯种）。 三、实验准备1.材料：空白斜面培养基(空白培养无菌).食用菌子 实体等2.器具： 酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉 球、大镊子、接种箱、超净工作台、高锰酸钾37甲醛溶液、紫外灯、2%来苏水、标签纸等。 四、实验内容 1、 组织分离 2、 孢子分离 五、方法步骤 1.接种环境的处理（1）接种箱的熏蒸 先用2%来苏清洁接种 箱内外，放
2、入接种所需的物品，用甲醛熏 蒸。每立方米空间一般用甲醛10ml，加入 高锰酸钾（57g）使甲醛氧化挥发。先将 高锰酸钾放入接种箱内的容器中，再注入 甲醛，立即产生强烈刺激的甲醛气体。熏 蒸20-30min。（2）超净工作台的消毒 用消毒液擦拭台面 后放置接种所需物品，开启超净工作台上 的紫外灯，照射20-30min后使用。接入的母种2.组织分离法 此法是生产中最常用的方法， 具有操作简便，菌丝萌发快，分离所得的 菌种在培养基条件适宜的情况下，能保持 原菌种的优良性状。 （1）种菇消毒 在接种箱内，用镊子夹着燃烧的 酒精棉球迅速擦拭菇体。 （2）取接组织将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖 交界处取绿
3、豆粒大组织，放入斜面培养基中央,迅 速塞上棉塞。 3.多孢子分离 （1）钩悬法是一种特别适用于耳类，也适用于伞 菌类的多孢分离法。在接种箱内将一小块消毒的耳片或菇片悬挂于 无菌三角瓶内（装约1cm厚的培养基），在25 左右条件下，约24h现孢子粉时以无菌操作法取 出分离材料。适温培养后挑取健壮尖端菌丝转管 。 （2）孢子印分离法 取成熟子实体经表面 消毒后，切去菌柄，将菌褶向下放置于灭 过菌的有色纸上，在2024静置一天， 大量孢子落下形成孢子印，接种环沾少量 孢子在试管或平板培养基上划线培养。 4.母种的培养 将斜面朝下斜置叠放于瓷盘中，放于培养箱中适 温培养。23天后每天都要检查菌丝生长情况。 及时挑拣污染试管（出现粘膜或杂色）。 5.注意事项：分离的母种一定纯化后再做出菇试 验。（1）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培 养成再生母种。（2）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种， 使其出菇。看产量、质量、形态、长势、抗性如 何，经 鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。（3）控制菌龄菌丝 即将长满斜面（一般710 天）终止培养。分别用于菌种保藏或繁衍原种。 六、作业 1、食用菌菌种分离技术有哪些方法？生产上最常 用的是哪一种？ 2、.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？ 3.试设计一个分离野生平菇菌种的实验方案
