《角蛋白遗传病 - 先天性厚甲综合征2型一家系临床表型及角蛋白17基因突变》由会员分享，可在线阅读，更多相关《角蛋白遗传病 - 先天性厚甲综合征2型一家系临床表型及角蛋白17基因突变（122页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、角蛋白角蛋白结构功能结构功能 与角蛋白遗传病与角蛋白遗传病西安交通大学第二附属医院皮肤科西安交通大学第二附属医院皮肤科 肖生祥肖生祥 冯义国冯义国 任小蓉任小蓉 李建国刘艳李建国刘艳 李小莉李小莉 彭振辉谭升顺彭振辉谭升顺 冯捷冯捷 王俊民王俊民1角蛋白结构与功能角蛋白遗传病基因突变和临床系列研究2角蛋白简介角蛋白是上皮细胞的主要结构蛋白，构成细胞骨架中间丝（微丝、微管、中间丝）3角蛋白目前已知49种,34种细胞角蛋白,15种毛 发角蛋白n型或酸性角蛋白（细胞角蛋白K9-10, K12-20,K23；毛细胞角蛋白Ha）Ha1-8 ,共25种n型或碱性角蛋白（细胞角蛋白K1-K8；毛细胞角蛋白H
2、b）Hb1-6 ,共24种 4研究背景K1，K10 角化上皮的基底上层 BCIE/EH,DNEPPK K2e 角化上皮基底上层的终末分化细胞IBS K2p 硬腭特异性角蛋白 未发现 K3,K12角膜特异性角蛋白 MCD K4,K13非角化的复层鳞状上皮 如食道 WSN K5,K14表皮基底角质形成细胞，复层上皮 EBS K6a,K6c-f,K16掌跖，粘膜，伤口愈合时，表皮附属器 PC-1 K8,K18 单层上皮 如肝,肾 隐匿性肝硬化 K9掌跖表皮 EPPK K15基底角质形成细胞 未发现 K17,K6b表皮附属器，甲床，掌跖 PC-2 K19单层上皮，表皮附属器 未发现 K20胃肠道上皮
3、未发现 hHb6,hHb1皮质毛细胞 念珠状发角蛋白 主要表达组织 疾病6角蛋白的结构 nI型：nII型：nL1、L2、L12 连接区（Linker domains)n1A、1B、2A、2B 螺旋区（Helical domains)nV1、V2 可变区（Variable domains)nH1、H2 同源区（ Homology regions）nISIS ISIS基元 （ISIS motif)nS 反向螺旋序列（Stutter sequence)n HIP/HTP2A2A研究背景角蛋白基因结构nI型：nII型：exonsexons 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8
4、intronsintrons 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 exonsexons 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 2 3 4 5 6 7 8 9intronsintrons 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 研究背景91011角蛋白不同结构区氨基酸数统计角角 蛋蛋 白白V V1 1HH1 11A1AL L1 11B1BL L12122A2AL L2 22B2BHH2 2V V2 2K16441443635111021719812120131K26451483635121011719812120128K362916236351410
5、1171981222095K4534115363511102171981212050K5590132363512101171981212089K105611327351410116198121 108K144721087351110116198121 46K17432777351110116198121 3712n角蛋白序列的保守性1. 不同个体之间的保守性:1A起始部和2B末端 15-20aa2. 不同角蛋白之间的保守性螺旋起始区: I型 1A区第7个aa始 LNDRLASYII型 LNNKFASY螺旋终止区: EIATYRKLLEGE(如K1 2B末 端倒数第5个氨基酸)13角蛋白功能n参
6、与上皮细胞角化、分化；n机械性支持维持细胞形态；n细胞内物质运输、信息传递14角蛋白基因敲除小鼠的表型 角蛋白基因敲除角蛋白基因敲除表 型表 型 K4白色海绵绵状痣 K5表皮基底层细层细 胞溶解 K6a创伤创伤 愈合延迟迟 K6a/K6b舌上皮脆性增加 K8胚胎死亡（C57BL/6小鼠） 大肠肠增生（FVB/N小鼠） K8/K19胎盘盘缺陷，胚胎死亡 K10表型轻轻微异常，无细细胞溶解 K12角膜脆性增加 K14表皮基底层细层细 胞溶解 K17暂时暂时 性脱发发 K18肝脏脏病变变K19无异常表型15角蛋白与疾病角蛋白 疾 病 K1、K10 大疱性鱼鳞病样红皮病 K5、K14 单纯型大疱性表皮
7、松解症 K6、K16、K17 先天性厚甲 K8、K18 隐匿性肝硬化 K9 表皮松解性掌跖角化症 hHb6、 hHb1 念珠状发 K7、K15、K19、K20 不清楚16讨论角蛋白中间丝的装配讨论角蛋白遗传病基因突变和临床系列研究19技术路线和实验方案n患者家系基因突变分析收集患者家系临床资料、病理标本、采集外周血 提取外周血基因组DNA PCR扩增外显子 DNA序列分析 患者正常人同源性分析 确定基因突变位点 排除多态性 20n先天性厚甲症（Pachyonychia congenita，PC）是一组常染色体显性遗传病，特点是甲营养不良和不同程度的外胚叶发育不良。21根据临床表现主要分为两型根
8、据临床表现主要分为两型nPC-1表现为厚甲伴有局灶性掌跖角化、口腔粘膜白斑等。nPC-2除具有PC-1的特征外还伴有胎生牙和多发性脂囊瘤。多发性脂囊瘤是PC-2最好的鉴别特征。22nPC患者的厚甲通常是在出生后头几个月出现 。一些PC患者甲改变发生较晚，称为迟发性先天性厚甲。 n多发性脂囊瘤通常在青春期发生。n研究发现，PC-1由于角蛋白K16、K6a基因突变所致，PC-2由于角蛋白K17、K6b基因突变所致。23先证者及其子的厚甲24先证者头部多发性脂囊瘤 25先证者及其子的多发性脂囊瘤26先证者及其子的局灶性掌跖角化 272829研研 究究 方方 法法301. 血样采集采集家系成员（包括9
9、例患者、1例正常人）外周血35ml，2EDTA抗凝，-70冷冻保存。另外抽取正常对照50人份外周血做同样处理。312. 外周血基因组DNA提取用全血基因组DNA纯化试剂盒提取基因组DNA。 323. 聚合酶链反应（PCR） n选择并合成引物：引物合成参照Mclean WH等 在Nature Genetics 上的文献。上游引物K17p8和 下游引物K17p10。n这对引物可使角蛋白K17基因外显子1及其侧翼 序列得到选择性扩增，扩增出978bp的DNA片段 ，并且避免了扩增两个假基因K17B和K17C。 33K17P8和K17P10扩增的DNA片段稀释1:10000倍作为巢式PCR模板。巢式P
10、CR的上游引物序列为： 5-GCTGCTACAGCTTTGGCTCT- 3；下游引物序列为5-CACGACGTTGTAAA ACGACCAGTCACGGATCTTCACC- 3。 34nPCR反应：总体积为50l,反应液成分包括5l 缓冲液，10mmol/L dNTP 1l，25mol/L上、 下游引物各1l， Taq酶0.5l（2.5U），25 mmol/L MgCl2 5l,模板10l。n反应条件：354.基因测序PCR产物采用全自动DNA测序仪进行序列测定，测序结果进行同源性分析。 36结结 果果371. DNA提取结果外周血全基因组DNA提取后电泳，可见其大 小约为23kb（Marke
11、r为DNA Hind ) 。382. PCR反应结果nPCR反应产物电泳，扩增出大小为978 bp的DNA片段（Marker 为DGL2000) 。39patientnormal403 DNA测序结果患者患者正常人正常人41讨讨 论论42体外实验表明，1A区起始部的突变对角蛋白装配影响较大，而1A区后半部的突变对角蛋白装配影响较小。临床上发现的角蛋白突变位于1A区后半部的较少。43角蛋白17模式图及我们发现的突变位置44n我们发现的突变为角蛋白K17的N109D突变, 为一新的错义突变。因此，在进行中国人PC- 型基因诊断或产前诊断时，除了参考国际上已报道的突变位点外，应注意这一新的突变位点的
12、可能性。45n 我们报道的这一PC- 家系，厚甲均为迟发（10至20岁发生），基因突变位于K17 1A区的后半部，为一新的突变N109D。46n结合Connors等和我们的研究结果，K16 2B区中间部和K17 1A 区后半部的基因突变可以呈现为迟发型厚甲。n我们的研究结果表明角蛋白的突变位置与疾病的发生年龄有关。发生在角蛋白非关键部位的突变引起疾病迟发。47n通过2个家系初步的研究表明，中国PC-2型患者基因突变与其他种族相比，有相同之处，又有不同之处。本研究为进行中国人PC-2型基因诊断及产前诊断奠定了基础。48单纯型大疱性表皮松解症的 基因突变及临床研究Investigation on Gene Mutations and Clinical Phenotypes of Epidermolysis Bullosa Simplex 491. 临床资料n家系一 n先证
