《【生物课件】实验七 环境样品中中细菌总数的测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【生物课件】实验七 环境样品中中细菌总数的测定（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、模块一 实验三 环境样品中细菌总数的测定 一 实验目的了解稀释平板计数的原理，掌握涂布平 板培养法和混合平板培养法的操作技术 。通过土壤中细菌总数的测定，了解微 生物数量的测定方法，掌握平板菌落计 数的原理和方法.l实验原理稀释平板计数是根据微生物在高度稀释条件下固 体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖 而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代 表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀 的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开 ，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表 一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接 种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。 经培养后，
2、由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌 落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算 的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计 数。一般用于某些产品检定（如根瘤菌剂等）、生 物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染 程度的检验。三 实验器材l1 菌种：大肠杆菌、葡萄球菌、产气杆 菌混合样品。l2 培养基：牛肉膏蛋白陈琼脂培养基。l3 器材： 90mL无菌水、 gmL无菌水、 无菌平皿、 lmL无菌吸管、天平、称样 瓶、记号笔、玻璃涂布棒。四 实验方法l 1 样品稀释液的制备l准确称取待测样品10g，放入装有90mL无菌水并放 有小玻璃珠的250mL三角瓶中，置摇床上振荡20min ，使微生
3、物细胞分散，静置2030s，即成10-1稀释 液；再用 lmL无菌吸管，吸取10-1稀释液lmL。移入 装有9mL无菌水的试管中。振荡，让菌液混合均匀 ，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀 释液lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，即 成10-3稀释液；以此类推，连续稀释、制成 10-4、 10-5、 10-6、10-7、 10-8、10-9等一系列稀释菌液 。l用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样 品确定，样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应 高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用 10-7、10-8、10-9烯释度，测定土壤细菌数量时，采 用10-4、1
4、0-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采 用10-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用 10-2、 10-3、 10-4稀释度。l2 平板接种培养l平板接神培养有混合平板培养法和涂抹平板 培养法两种方法。 ll）混合平板培养法l将无菌平板编上 10-7、 10-8、 10-9号码，每 一梯度设置三个重复，用无菌吸管按无菌操 作要求吸取110-9稀释液各1ml放入编号10-9 的3个平板中，同法吸取 10-8稀释液各1mL 放入编号110-8的3个平板中，再吸取 110- 7稀释液各 lmL放入编号110-7的 3个平板中 （由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换） 。然后在 9个
5、平板中分别倒入已熔化并冷却 至45-50的细菌培养基，轻轻转动平板，使 菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置。在 30下培养。至菌落长出后即可计数。 l2）涂布平板计数法l涂布平板计数法与混合法基本相同，所不同 的是先将培养基溶化后趁热倒入无菌平板中 ，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0 lmL菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂 平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌 涂布棒将菌液在平板上涂布均匀，每个稀释 度用一个灭菌涂布棒；更换稀释度时需将涂 布棒灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂布时 ，也可以不更换涂布棒。将涂布好的平板平 放于桌上2030min，使菌液渗透入培养基 内，然后将平板倒转。恒温培养，至菌落长 出后即可计数。五 注意事项l倒平板时要注意控制培养基的温度。l稀释操作时，要尽量减少样品稀释误差，而 且每个稀释度的菌液应各用一支无菌吸管。l为使菌落能在平板上均匀分布，样品液加入 平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀。 六 思考题l要测定某种液体饮料中的活细菌总数，除了 采用平板菌落计数法外，还可采用哪些方法 ？
