生药的有效性评价

《生药的有效性评价》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生药的有效性评价（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、生药的有效性评价 (Efficacy valuation of crude drug) Which methods could be used for efficacy evaluation? Why and how?生药的有效性评价 (Efficacy evaluation ) 生物检定法（Bioassay） 与疗效相关联的化学成分分析法 (Analysis of bioactive components)生药的生物效应评价法 定义：它以药物的药理作用为基础、生物统计为工具，运用特定的实验设计，在严格控制的试验条件下，通过比较标准品和供试品对生物体或离体器官 与组织的特定生物效应，计算供试品

2、的效价（Potency）或者毒性（Toxicity ） ，从而控制和评价供试品质量或活性。生药的有效性评价方法之一： 对一些采用理化方法不能测定含量或理化测定不能反映临床生物活性的药物。如胰岛素、肝素、缩宫素及各种抗生素等。 微量生理活性物质。如Ach、5-HT 某些有害杂质的限度检查如农药残留量、内毒素等致热物质、抗生素及生化制剂中降压物质的限度检查等。应用范围： 中药及复方:中药成分复杂，大部分中药的有效成分尚未搞清，难以用理化方法加以控制，但可用一些以其疗效为基础的生物测定方法来控制其质量。应用范围：Example 1 洋地黄生物检定法比较洋地黄标准品(S)与供试品(T)对鸽的最小公 斤

3、致死量，从而测定供试品的效价。 死亡前有强烈颤抖、恶心呕吐 、排便等反应。最后至瞳孔放 大、呼吸停止为注射终点。抗凝血酶活性测定法：水蛭提取物牛纤维蛋白原+凝血酶(滴定)至有凝固物出现Example 2 水蛭抗凝血酶活性测定淀粉酶活力测定法：麦芽提取物淀 粉+反应， 反应终止麦芽糖Example 3 麦芽中淀粉酶活力测定a,b淀粉酶（底物）3，5-二硝基水杨酸 棕红色 （540nm）生药化学成分分析法生药的有效性评价方法之二： 定义： 应用范围：两种评价方法的比较生物 检定法理化 分析法测定结果能直接反 映药物的效价；是 理化分析法的有力 补充测定结果误差较大，重现 性较差；加上测定费时， 计

4、算繁琐；难以构建合适 的药理模型以反映中药整 体作用的特点测定结果重现性好 ，易于控制与推广测定结果与活性之间的相 关性差MethodsAdvantagesDisadvantages一、紫外-可见分光光度法(Ultraviolet-visible spectrometry) 朗伯-比尔定律: A = ECL 1、原理：单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比。 l双光束扫描 l扫描范围： 190nm800nm l常量池（3ml）和微量池 （50120ul）配置 lUV Probo软件操作系统 在操作系统控制下，可 完成紫外可见光谱扫描、 动力学测定、单波长

5、和多 波长的定量分析、数据图 形处理以及规范化报告生 成。 岛津2450型紫外可见分光光度计2、仪器3、紫外-可见分光光度法定量方法 对照品比较法 吸收系数法 标准曲线法 适用对象: 生药中大类成分的含量测 定，如总黄酮、总蒽醌、总生物碱等。 4、应用 槐花（米）中总黄酮的比色法测定：药材提取物亚硝酸钠硝酸铝氢氧化钠500 nm处测定平贝母中总生物碱的含量测定酸性染料比色法药材总生物碱pH5溴百里香酚蓝 比色法测定412 nm二、色谱法 (Chromatography) 薄层色谱法(thin layer chromatography, TLC) 气相色谱法(gas chromatography

6、, GC) 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）（一）薄层色谱法(thin layer chromatography, TLC) 薄层板 (plate) 点样 (loading) 展开 (developing) 显色与检视(visualization & detection) 记录 (recording)1、TLC一般操作程序在计算机控制下，可自动完成点样展开显色扫描照像彩色图片输出等一整套工作程序。瑞士CAMAG薄层色谱扫描仪2、TLC仪器中国药典(2010年版)一部 薄层色谱法用于定性鉴别的达 2000多项。 多用于鉴别

7、、限量检查: 3、TLC的应用斑点颜色、Rf值 依据 简便、快速、适应性广、 可操作性强 优势 薄层扫描法定量（TLCS）3、TLC的应用（定量分析）酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B的TLCS法测定3、TLC的应用（定量分析） 薄层色谱紫外可见分光光度法定量（TLC-UV）点样展开定位刮板洗脱UV测定（二）高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）1、HPLC仪Agilent 1100 Series HPLC Systems l 硅胶-正相色谱 l 化学键合硅胶 -反相色谱 l 离子交换填充剂 -离子交换色谱 l 凝胶-分子排阻色谱 l

8、手性键合填充剂-对映异构体拆分 色谱柱2、HPLC仪组成l 紫外检测器(ultraviolet detector, UVD)l 二极管阵列检测器(diode array detector, DAD)l 荧光检测器(fluorescence detector, FLD)l 电化学检测器(electrochemical detector, ECD) 选择性检测器检测器2、HPLC仪组成l示差折光检测器(refractive index detector, RID)l蒸发光散射检测器(evaporative light-scattering detector, ELSD)l质谱检测器(mass sp

9、ectrometrical detector, MSD) 通用型检测器 检测器2、HPLC仪组成Alltech 2000 蒸发光散射检测器Agilent 液质联用仪3、HPLC定性方法min01020304050mAU010203040506070三个定性参数:tR值、UV、MSnm200225250275300325350375mAU0255075100125150UVm/z100200300400020406080100211.1189.1399.2227.1M+Na+M+K+2M+Na+M+H+MS 内标校正因子法： 外标法： 面积归一化法：纯度检测u中国药典(2010年版）一部应用HP

10、LC法测定含量的中药品种达1700余项。 u HPLC优势：4、HPLC定量方法5、HPLC的应用7-epi-loganin (1)sweroside (2)loganin (3)7-epi-vogeloside (4)secoxyloganin (5)1. 金丝桃苷；2. 异槲皮苷 1. 金丝桃苷；2. 异槲皮苷1. 金丝桃苷；2. 异槲皮苷Agilent 6890N型气相色谱仪（三）气相色谱法 （Gas chromatography, GC）1、GC仪 载气：H2、N2、 He 进样系统：溶液直接进样或顶空进样 色谱柱：弹性石英毛细管柱 柱温箱 ：恒温和程序升温 检测器 ：2、GC仪组成l

11、弹性石英毛细管柱l不锈钢填充柱涂壁毛细管柱载体涂层毛细管柱2、GC仪组成色谱柱检测器u火焰离子化检测器(flame ionization detector , FID) u热导检测器(thermal conductivity detector, TCD)u氮磷检测器(nitrogen-phosphorus detector, NPD)u火焰光度检测器(flame photometric detector , FPD)u电子捕获检测器(electron capture detector , ECD)u质谱检测器(mass spectrometric detector, MSD) 2、GC仪组成3

12、、GC定性方法两个定性参数:tR值、MS4、GC定量方法内标校正因子法 外标法 面积归一化法 标准溶液加入法 中国药典(2010年版)气相色谱 法用于中药分析的品种有50余种。 5、GC法的应用Pogostemon cablin中patchouli alcohol、pogostone的测定l高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis, HPCE) l毛细管电色谱(capillary electrochromatography，CEC） l液相色谱与核磁共振联用 (LC-NMR)l LC/NMR/MS （四）其他色谱法 （Miscella

13、neous chromatography）HPCEHPLC-MS三、定量分析方法的方法学验证 (Validation of the analytical method) l目的：证明采用的分析方法适合于相应检 测要求。 l方法验证用于： 建立新的分析方法时 原分析方法进行修订时 (一)验证内容 线性及范围（linearity and range ） 准确度(accuracy) 专属性（specificity） 精密度（precision） 重复性（repeatability）重现性（reproducibility） 检测限及定量限（limit of detection and quantifi

14、cation） 耐用性 (robustness) 1、线性（linearity）和范围（range ） 线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 (二)实验设计线性（linearity）和范围（range ）Verticine 8.1 Y=0.0945X-0.0437 0.998 1.0-27.4Analytes tR Calibration curve r2 test rangemg/mlVerticinone 9.1 Y=0.1006X-0.1036 0.998 0.9-23.7

15、线性（linearity）和范围（range ）2、准确度(accuracy) 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回 收率()表示 ；回收率% =（实测值-供试品所含被测成分量）/加入对照品量 对 照 品药材量 （g）药材中对照 品含量(mg)加入量 (mg)测得总 量(mg)回收率 (%)平均 回收 率(%)RSD (%)贝 母 素 乙 1.00550.67870.66401.325397.4100.42.941.00040.67530.66401.34391.00020.67510.66401.35741.00050.67530.66401.33891.00060.67540.66401.320497.11.00020.67510.66401.3698104.6准确度(accuracy)-加样回收率100.7102.899.9对对 照 品药药材量 （g）药药材中对对照 品含量(mg)加入量 (mg)测测得总总 量(mg)回收率 (%)平均 回收 率 (%)RSD (%)丹 酚 酸 B0.15018.7252高9.9718.88101.8100.9 2.62.60.15008.719410.0118.98102.50.15028.731010.0518.92101.40.14998.7136中17.53101.80.15018.725217.601