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1、实验一 细菌形态学检查 生物安全n1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。n2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。n3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。n4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在 消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。n5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地 面等处，应立即报告老师及时适当处理。n6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后 ，关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。【实验目的】n1 掌握临床微生物实验室
2、规则，生物安全及其它 注意事项。n2 掌握显微镜油镜的使用和保护。n3 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。n4 不染色和各种染色标本的显微镜观察。n5 细菌特殊结构的染色与观察。【实验内容】n光学显微镜的使用n不染色标本的检查n革兰氏染色和细菌基本形态观察n细菌特殊结构染色和观察形态学检查的意义n细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分 群n是决定采用何种生化反应的重要提示n初步诊断结核涂片淋球菌涂片 显微镜的使用n先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜n粗调 + 微调n香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经 空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光
3、度增强，物 像清晰n镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）形态学检查的方法n不染色标本检查法n染色标本检查法n特殊染色检查法不染色标本检查法1n压片法（压滴法）1. 用接种环分别取细菌23环，置于洁净载玻片中央2. 轻轻覆上盖玻片3. 油镜下观察不染色标本检查法2n悬滴法染色标本检查法n染色基本步骤：涂片：干燥：室温自然干燥固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色染色：革兰染色镜检革兰染色-基本步骤a)初染：结晶紫 1 min；b)媒染：碘液 1 min ；c)脱色：95%乙醇 至无紫色脱落为止 ；d)复染：石碳酸复红 30 s，自然干燥后 镜检革兰染色-结果与注意事项结果判断：
4、紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌注意事项：n涂片不宜过厚n固定不宜过热n脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌脱色过度：革兰阳性菌 革兰阴性菌n1824 h 菌龄最佳n已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照特殊染色（示教）n鞭毛染色n芽胞染色n荚膜染色鞭毛染色-套组内容及规格内容规格主要成分复红酒精溶液(A液)20 ml品红鞣酸水溶液(B液)20 ml鞣酸钾明矾溶液(C液)20 ml钾明矾工作液过滤 瓶鞭毛染色-工作液配制n根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用n工作液28 约可保存23天 鞭毛染色-玻片的处理n鞭毛染色成功与否，与玻片
5、的洁净度有非常密切的关 系n取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后 使用鞭毛染色-涂片的制备n将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37孵育后离心，倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端 ，室温下自然干燥鞭毛染色-操作方法n滴加工作液于玻片上，染色1015 minn将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净n将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检n结果：菌体及鞭毛均为红色芽胞染色-染液规格n石碳酸复红液 20 ml 碱性品红n脱色液 20 ml 乙醇n碱性美蓝液 20 ml 亚甲蓝芽胞染色-染色步骤与方法n将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定n滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒 蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水洗n碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检n结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色实验操作每组一套菌种：n葡萄球菌：革兰阳性球菌n大肠埃希菌：革兰阴性杆菌n真菌：孢子n变形杆菌：鞭毛染色（示教）n枯草杆菌：芽胞染色（示教）革兰染色
