尿液淀粉酶活力测定实验

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1、实验十五 尿液淀粉酶活力测定 (Winslow)氏法原理: n临床上通常用Winslow氏法测定尿或血清 中淀粉酶活性。该法对淀粉酶活性单位的 规定是:在37,30分钟,恰好能将0.1% 淀粉溶液1m1水解(指加入碘液后不再呈 兰色或红色)的酶量定为一个活力单位。试剂与器材: n1.0.9%NaC1;n2.0.1%淀粉;n3.碘化钾一碘溶液(20KI和10g碘溶于 100m1水中,使用前稀释10倍);n4.移液管;n5.试管;n6.恒温水溶锅。操作: n1.取10支试管,按次序记上号码,各加0.9% NaCl 1 m1。n2.用1m1移液管加尿液1m1于第一管,使其与 0.9%;NaC1混合(

2、若尿液中含淀粉酶过多,应 预先将尿液适当稀释)。用移液管吸取,然后任 其流出。反复三次,使全管混匀。n从第一管吸出1m1到第二管中,混匀。吸出1m1 到第三管依次类推。到第九管吸出1m1弃之 。这样即可获得分别含 有尿液1/2、1/4、 1/81/512 m1的不同浓度的尿稀释液,第10 管不加尿液作为对照管。n3.将10支试管置冰水溶中,然后从第10管起 依次迅速准确加入0.1%淀粉液1m1。迅速摇 匀。立即从冰水浴中取出,置37,并记录 时间。注意保持水浴的温度。n4.保温30分钟后,取出各管。迅速浸入冰水 浴中冷却。然后向各管中加稀碘液2滴摇匀。 观察各管的颜色。各试管中出现黄到兰的色 序。黄色表明无淀粉存在,浅红色到紫色表 明有淀粉的水解中间产物。兰色表明有淀粉 或其初期水解产物存在。n计算:选择黄色管中尿液稀释倍数最大的 一管来计算。假设第5管为黄色(从第6管 起仍有红色或兰色)。已知第5管内含尿液 为1/32m1。即1/32m1尿液能在37,30分 钟水解0.1%淀粉1 m1。所以,1 m1尿液在 同样条件下可水解0.1%淀粉32 m1。即每1 m1尿液中所含淀粉酶的活性为32个活力单 位。

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