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1、血清碱性磷酸酶活力测定(磷酸苯二钠法)n酶活力：也称酶活性，是表示催化某一特定反应 的能力。可以用在一定条件下所催化的某一特定 化学速度表示。酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈 低。底物减少量或生成物增加量n酶促反应速度=单位时间n酶的活力单位 国际单位：Katal，1s转化1mol底物的酶量 临床表示：Kings，如血清谷丙转氨酶活力单位，每100ml 血清在37。pH=7.4的条件下与底物作用60min，生成 1mol丙酮酸所需的酶量为1个活力单位n酶的比活力：单位质量酶蛋白或单位体积酶制剂所含有 酶活力单位数，即酶活力浓度。n酶活力的测定方法1.终止测定法（定时法或终点法）2.动
2、力学分析法（连续监测法或速率法）实验目的n熟悉酶活性测定方法的一般原理n掌握血清ALP测定原理与临床意义实验原理n碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠， 使之水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨 基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌 类化合物，其颜色深浅与ALP活性成正比。n磷酸苯二钠+H2O 苯酚+磷酸氢二钠n苯酚+4-氨基安替比林 红色醌亚胺衍生物ALP pH=10铁氰化钾实验器材和试剂：n（一）器材： 5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液器 ，721E分光光度计，1cm比色皿，37 恒温水浴n（二）试剂：n 10.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0)
3、 称取无水碳酸 钠6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于 800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。n 220mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮 沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2分子 结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml防腐，在 4冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中）n 3铁氰化钾的硼酸溶液 称取铁氰化钾2.5g，硼酸 17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混合后，加蒸馏水 至1L，置棕色瓶中避光保存(如出现蓝绿色即弃去)。n 4酚标准工作液（0. 05mg/ml）：购买合格的二 级标准品。实验操作 1.取试管4
4、支，按下表操作测定管标准管空白管对照管血清（ml）0.100酚标准液0.100蒸馏水0.100pH10碳酸盐缓冲液1.001.001.001.00混匀，37水浴保温5min，同时将底物预热底物液1.001.001.001.00混匀，37水浴保护15min铁氰化钾溶液3.003.003.003.00血清0.1002.立即混匀。在510nm波长处比色，以蒸馏水调零点，读取各 管吸光度。n计算ALP活性=（A测定A对照）/（A标准A空白 ）*0.05*100(金氏单位）临床意义：血清中ALP活力测定在临床常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临 床辅助诊断指标。 1血清ALP活性升高可能原因如下 ：肝胆疾病：阻
5、塞性 黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾病： 由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的ALP释放 进入血液中，引起血清ALP活性增高，如纤维性骨炎、成 骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈 合期等。 2血清ALP活性降低比较少见： 主要见于呆小病、重症 慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质等。注意事项目前市售的酚标准液多数为安瓿瓶，开后不能 久置底物液中不应含有酚，如空白管显红色，说明 磷酸苯二钠已分解，不宜使用。加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则对实验结 果会有影响。标准曲线法n制备如下： 取试管6支，分别加酚标准液 (1ml=01mg)，0、0.05、0.1、0.2、0.3、 0.4ml，各管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0 、2.9、2.8、2.7ml。混匀后37水浴保温5分钟 ，各管加入1.0ml碱性溶液，再加0.5铁氰化钾 2.0ml，立即混匀。静置10分钟，510nm波长下 比色。将以上各管所得读数与其相应的碱性磷 酸酶单位(依次为0.5、10、20、30、40单位)在 坐标纸上作图，绘制成标准曲线。
