ACCESS免疫化学发光技术介绍

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1、CONFIDENTIALRev. 05/07/02ACCESSACCESS化学发光系统化学发光系统CONFIDENTIALRev. 05/07/02219901997199619951993199419921991199819992000200220012003免疫分析系统免疫分析系统 Access Access家族系列的创新史家族系列的创新史“ “Classic” AccessClassic” AccessLXILXIUniCel DxIUniCel DxI800800AccessAccess 22CONFIDENTIALRev. 05/07/023免疫全系列产品Access 2UniCel

2、 DxI 600UniCel DxI 800UniCel DxC 600i分析项项目UniCel DxC 660i UniCel DxC 880i UniCel DxC 680i UniCel DxC 860i一种技术的延续和相同的试剂盒在不同分析平台的使用，确保病人结果的一致性CONFIDENTIALRev. 05/07/024免疫分析检测的浓度关系临床生化10-1210-910-610-310-0pg/mLng/mLmg/mLmg/mLgm/mL免疫分析治疗药物 甲状腺激素 性激素特殊过敏原肿瘤标志物 感染性疾病 维他命心脏标志物CONFIDENTIALRev. 05/07/025丰富的分

3、析菜单性激素（12） 雌二醇 促卵泡生成激素 泌乳素 促黄体生成激素 游离雌三醇 总人绒毛膜促性腺激素 孕酮 睾酮 硫酸脱氢表雄酮 抑制素A 性激素结合球蛋白 PAPP-A * 唐氏筛查甲状腺（9） 第三代促甲状腺素 三碘甲状腺原氨酸 游离三碘甲状腺素原氨酸 甲状腺素 游离甲状腺素 甲状腺过氧化物酶抗体 抗甲状腺球蛋白抗体 甲状腺球蛋白 甲状腺摄取肿瘤标志物（8） 甲胎蛋白 癌胚抗原 BR(CA15-3) OV(CA12-5) GI(CA19-9) 前列腺特异性抗原 游离前列腺特异性抗原 ISOFORMS PSA *贫血类（7） 维生素B12 铁蛋白 叶酸 红细胞叶酸 内因子抗体 促红细胞生成

4、素 可溶性转铁蛋白受体 心血管（4） 肌酸激酶同功酶-Mass 肌红蛋白 肌钙蛋白 BNP骨代谢类（2） 全段甲状旁腺激 素 骨碱性磷酸酶过敏原 总IgE生长类 人类生长激素糖尿病类 胰岛素肾上腺/垂体 皮质醇炎症指标 白介素-6自身免疫 ANA * 研发中CONFIDENTIALRev. 05/07/026免疫分析的基本概念CONFIDENTIALRev. 05/07/027免疫分析的基本原理免疫分析是根据抗体与特异性的抗 原结合的原理进行定性/定量检测 的技术。抗 原Y抗 体CONFIDENTIALRev. 05/07/028“锁和钥匙”CONFIDENTIALRev. 05/07/029

5、免疫分析检测的发展历程免疫学方法的发展非标记免疫标记免疫CONFIDENTIALRev. 05/07/0210标记免疫技术将Ag或Ab用标记物(如荧光素、酶、放射性 同位素、化学发光物质等)进行标记，在与 标本中的相应Ab或Ag反应后，可以不必测 定Ag-Ab复合物本身，而测定复合物中的标 记物，通过标记物的放大作用，进一步提高 了免疫技术的敏感性。 CONFIDENTIALRev. 05/07/0211标记免疫分析技术三要素通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（ labeling）的物质,常标记在抗体上通常会有一个分离（separation）的过程在 最后读取信号前需要去仔细关注一下分析的模

6、式（format） CONFIDENTIALRev. 05/07/0212免疫分析的经典定义免疫分析 是一种通过特异性的抗体 与分析物的结合来检测或者定量抗体 或抗原的一种分析技术 YAntibodyAntigenCONFIDENTIALRev. 05/07/0213IgG 抗体两条重链和两条轻链分子大小 150,000 道尔顿特异性结合位点非特异性结合位点CONFIDENTIALRev. 05/07/0214免疫分析的工作定义免疫分析 是利用特异性的抗体与底物结合 、但不能用简单的化学方法读数和检测的一 种分析方法需要通过特异性抗体的标记形成测试系统通常需要在分析检测前进行分离（异相免疫技术

7、 ）特别注意分析的形式 CONFIDENTIALRev. 05/07/0215免疫分析的类型均相免疫技术无需分离步骤容易自动化, 但不够灵活，具有局限性比浊法 适合含量较高的大分子物质FPIA, EMIT, CEDIA 主要针对小分子分析物,特别是药物 检测FPIA:荧光偏振免疫分析EMIT:多聚酶免疫分析技术CEDIA:克隆酶供体免疫分析CONFIDENTIALRev. 05/07/0216免疫分析的类型异相免疫分析技术需要分离步骤不容易自动化, 但适合多种分析方法和检测手段 ，较容易灵活控制高度敏感性和特异性反应时间短CONFIDENTIALRev. 05/07/0217免疫分析的类型免疫

8、分析 - “what”检测手段 化学发光 分离技术 磁性微粒子 结合方式 灵活多变（竞争法、夹心法）- “how”CONFIDENTIALRev. 05/07/0218检测技术免疫分析检测技术 方法多样 需要有一种 “标记物” 来生成可供检测的能量标记物可能需要或不需要活化需要有适合由该标记物生成的可检测物的侦测器 （光电倍增管）分离技术 结合方式 CONFIDENTIALRev. 05/07/0219标记免疫分析技术放射免疫分析酶免疫分析荧光免疫分析化学发光免疫分析CONFIDENTIALRev. 05/07/0220标记免疫分析技术放射免疫分析- RIA不稳定的分子衰减过程中释放出射线12

9、5I产生 射线发射器通过记数仪进行检测3H产生射线通过液体闪烁记数仪进行检测CONFIDENTIALRev. 05/07/0221放射免疫分析技术优点敏感性高动力学范围宽干扰因素少局限性有害的底物不易自动化射线半衰期短射线存在废物处理问题CONFIDENTIALRev. 05/07/0222标记免疫技术荧光免疫分析技术 - FIA原理荧光底物, 通常使用 4-MUP(4-甲基伞酮)吸收并储存能量，进入激发态，并回复到基态的过程中，多余 的能量以电磁辐射的形式（发光）释放通过荧光计检测优点跟RIA具有相同的敏感性和动力学检测范围避免了RIA的半衰期短、有害物质的环境污染问题局限性容易受自动荧光素

10、或者样本中含有的能使荧光淬灭的物质干扰应用举例Abbott - Large molecule (MEIA) assays on IMx, AxSYMCONFIDENTIALRev. 05/07/0223标记免疫技术荧光偏振免疫技术 - FPIA原理单束偏振光通过反应物通过检测偏振荧光的强度来测量所检测的物质，多采用竞争抑 制法 优点属于均相免疫分析技术，无需分离步骤局限性只用于小分子分析物，采取竞争法应用举例Abbott - Small molecule assays on TDx, IMx, AxSYMCONFIDENTIALRev. 05/07/0224标记免疫技术酶免疫技术 - EIA原

11、理在基本的免疫学反应完成后，加入底物催化反应通常这种反应包含有颜色变化，并且可以通过分光光度计检测 优点技术容易应用，经常用来做定性检测局限性做定量检测的时候，灵敏度差、检测范围不够宽CONFIDENTIALRev. 05/07/0225标记免疫技术化学发光免疫分析技术 - CLEIA原理是一种不稳定的中间体利用化学反应释放的自由能激发中间体（底物AMPPD）当其从激发态回到基态，同时释放出等能级的光子，即引起发光具有荧光一样的特异性，但又无需激发光优点 具有放射免疫的所有优点（如灵敏度高：ACCESS达10- 21 mol/L 、动力学范围宽等），同时又避免了放射免疫的缺点通过简单的光度计就

12、可以进行读数同时由于无需激发光，可以避免杂散光的干扰，本底特别低类型 闪烁，发光 (包括 “增强”)CONFIDENTIALRev. 05/07/0226标记免疫技术的发展历程荧光素(Fluorophores) FIA放射性同位素(Radioisotopes) RIA酶(Enzymes) EIA化学发光物质 - CLIACONFIDENTIALRev. 05/07/0227化学发光免疫技术化学发光物质 - CLIA原理某些 化合物（发发光底物）可以利用一个化学反应产应产 生的能量使 其产产物分子或反应应中间态间态 分子升至电电子激发态发态 。当此产产物分子 或中间态间态 分子衰退回基态时态时

13、，以发发射光子的形式释释放能量。）优势 - 具备RIA所拥有的优势(灵敏度和宽线性),但排除其缺点用一个简单的光度计读数非常低的背景干扰类型 - 闪烁(flash), 连续(glow) 发光(包含 “增强发光”)CONFIDENTIALRev. 05/07/0228化学发光物质AMPPD, Dioxetane (Lumi-Phos 530TM)代表性分析系统BCI - Access/Access 2 /DxI800DPC - Immulite/Immulite 2000Fujirebio - Lumipulse 1200CONFIDENTIALRev. 05/07/0229ACCESS使用的发

14、光底物AMPPD目前性能最好的化学发光底物4-甲氧基-4-（3-苯磷酸盐）螺-（1，2-二螺4，4 二氧己烷-3，2-金刚烷4-methoxy-4-(3-phosphatephenyl)-spiro-(1,2 -dioxetane)-3,2adamantaneAMPPD是一种金刚基二螺4，4二氧己烷的磷酸酯 。经ALP水解生成一种不稳定的阴离子，该阴离子分 解时持续发光。发光强度稳定，与ALP成正比。CONFIDENTIALRev. 05/07/0230ACCESS Dioxetane 化学发光物质O-OOOCH3O-OOCH3*LIGHTAlkaline Phosphatase OOOCH3

15、OPO3Na2发光底物在碱性磷酸酶作用下磷酸酯基发生水解 ，脱去一个磷酸基而得到一个中等稳定的中间体 AMPD-，(半衰期230分钟)。此中间体分子内电 子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激 发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当其回到基态时 产生470nm的光，并可持续几十分钟。CONFIDENTIALRev. 05/07/0231ACCESS Dioxetane化学发光物质稳定持续的发光R L U00 5 10 Time (minutes)55 60 CONFIDENTIALRev. 05/07/0232分离技术标记免疫分析检测技术分离技术(Separation) 有很多方式典型的是,特异性结合的分析物被保留而未结合物 质和无用的反应物被清除 分析模式 CONFIDENTIALRev. 05/07/0233ACCESS磁颗粒分离技术磁性微粒子技术的优点：快速分离结合相与游离相提高与Ag或Ab包被亲和力提高接触表面积/反应容量比例，实现微量分析不需要抗体分离步骤，杜绝干扰与交叉反应允许共价耦合反应，因此可以检测大/小分子的各种 物质成分能应用各种分析设计与反应模式，扩大应用范围如：夹心法，竟争法，抗体检测法等利于检测自动化与微量分析CONFIDENTI