《分子荧光法测定奎宁的含量》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子荧光法测定奎宁的含量（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验十分子荧光法测定奎宁的含量实验目的1了解仪器的性能与结构；熟悉仪器的操作步骤；2学会绘制激发光谱和荧光谱图：（即确定最大的EX和Em）3定量测定奎宁的含量（标准曲线法）实验原理奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有两个激发波长250 nm和350 nm，荧光发射峰在450 nm。在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：If=kC仪器与试剂仪器：日本岛津公司（SHIMADZU）RF-5301 PC型荧光分光光度 计。试剂：（1）100.0gmL-1奎宁储备液；（2）0.05 molL-1H2SO4溶液实验步骤1系列标准溶液的配制取6只25mL的容量瓶，分别加入10.0gmL-1奎宁标准溶液0
2、.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，用0.05 molL-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。2绘制激发光谱和荧光发射光谱：（以1.2g/mL的标样找最大Em和EX）将EX固定在350 nm,选择合适的实验条件,在400600 nm范围内扫描即得荧光发射光谱(可排除EX的干扰)，从谱图找出最大Em值；将EM固定在450 nm,选择合适的实验条件,在200400 nm范围内扫描即得荧光激发光谱(可排除EM的干扰)，从谱图找出最大EX值.3绘制标准曲线将激发波长EX固定在350 nm（或250 nm）左右处，荧光发射波长EM固定在450 nm左右处，在选定条件下，测量系列
3、标准溶液的荧光强度。4未知试样的测定取4-5片奎宁药片，在研钵中研细，准确称取约0.1 g，用0.05 molL-1H2SO4溶解，全部转移至l000 ml容量瓶中，以0.05 molL-1H2SO4稀释至刻度，摇匀。取此溶液2.0mL于100 mL容量瓶中，用0.05 molL-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀，在标准系列溶液同样条件下，测量试样的荧光发射强度。5绘制荧光强度If对奎宁溶液浓度C的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度Conc (g/mL)，计算药片中奎宁的质量分数。奎宁 = Conc (g/mL) 1000mL 50 / 0.1g注意事项奎宁溶液必须当天配制、避光保存。思考题1能用0.05 molL-1 HCl来代替0.05 molL-1 H2SO4稀释溶液吗？为什么？2如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？3哪些因素可能会对奎宁荧光产生影响？
