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1、中华人民共和国卫生部医政司主办输血前相容性检测中华人民共和国卫生部医政司主办教学目的和要求 掌握盐水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、 方法及意义。 熟悉微柱凝胶法原理、方法。 了解酶法、白蛋白介质法、Liss法的原理和方法 。 熟悉ABO/Rh血型鉴定方法及影响因素 熟悉抗体筛选原理和意义 熟悉交叉配血方法及意义 了解抗体鉴定原理和意义中华人民共和国卫生部医政司主办血型鉴定抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术中华人民共和国卫生部医政司主办盐水介质凝集
2、试验l 悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。l 主要检测IgM类抗体（ABO系统、抗E）。l 抗A抗B特异性IgG类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。 中华人民共和国卫生部医政司主办盐水介质凝集试验l 方法：玻片法-便于显微镜观察结果试管法-适用于不同温度、便于洗涤l 反应温度：422l 临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，37无活性者临床意义不大。 中华人民共和国卫生部医政司主办试验记录 4+（+）：一个大凝集块，背景透明，无游离 细胞 3+
3、（+）：数个大凝集块，背景透明，无游离 细胞 2+（+）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离 细胞 1+（+）：细小的凝集块，背景浑浊 W+（）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果 0（-）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态 PH：部分溶血 H：完全溶血中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办Weak reactions often difficult to interpret. Can also be downgraded due to shaking the completed test.Conventional Testing.中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和
4、国卫生部医政司主办 盐水介质凝集试验结果分析：阳性-凝集或溶血阴性-无凝集或溶血 先观察有无溶血、再观察有无凝集 注意事项：细胞浓度25%（严格按说明 书操作）、血清与细胞比例、反应温度、弱 凝集分析 优点：简便、快捷、直观。简便、快捷、直观。 缺点：不能发现不完全抗体。缺点：不能发现不完全抗体。中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术中华人民共和国卫生部医政司主办 抗人球蛋白试验 抗球蛋白试验是1945年由Coombs等人 建立的，又称Coombs试验。抗球蛋白 试验的建立在血型血清学上有着非常 重要的意义。 分为直接抗球
5、蛋白试验（DAT）和间接 抗球蛋白试验（IAT）。中华人民共和国卫生部医政司主办抗人球蛋白试验原理 IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血 型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结 合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝 集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗- IgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。 补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物 激活以后，结合在红细胞表面。在体外含 补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单 特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使 之凝集也称为抗球蛋白试验。中华人民共和国卫生部医政司主办抗人球蛋白试剂 多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗IgG 和抗-C3d。 单特异性抗球蛋
6、白试剂：抗IgG、抗 IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。中华人民共和国卫生部医政司主办直接抗人球蛋白试验 DAT是用来检测体内红细胞致敏情况， 尤其是IgG和C3d包被的红细胞。 用于： HDN和自身免疫溶血性贫血的诊断 红细胞被药物抗体致敏的检查 急性和迟发性溶血性输血反应的检查中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办间接抗人球蛋白试验 用于测定在体外能引起红细胞致敏的 抗体。 用不完全抗体测定红细胞血型，如Rh 血型。 交叉配血。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办结果分析-假阳性用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有种间抗 体。红细胞在用盐水洗涤
7、时已有凝集。 IAT试验中所用红细胞本身DAT阳性。不抗凝标本在冷环境里经过一段时间的保存 后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补 体成分结合在红细胞上，用多特异性抗球 蛋白试剂会发生假阳性。离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散中华人民共和国卫生部医政司主办结果分析-假阴性 致敏后的红细胞洗涤不充分,残留的球蛋白中和了 试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。 操作过程不连续，时间过长，结合在红细胞上的抗 体解离。 红细胞、血清和抗人球蛋白试剂保存不当都可能发 生活性减弱或丧失。 红细胞过多，反应减弱；红细胞过少，看结果不准 确，都影响结果。 试剂中抗人球蛋白浓度过大，有前带现象。 孵育时间和温度不当，
8、会使反应结果减弱或变为假 阴性。观察结果时过度摇动试管，摇散细小凝块。中华人民共和国卫生部医政司主办注意事项 每次试验要设有阴性和阳性对照。 阴性结果要加入一滴IgG致敏红细胞 实验器材清洁。 注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条 件。 严格按照实验方法操作。 排除自身抗体干扰。中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶试验原理：微柱凝胶技术是用特定的化学 物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样 反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过 筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙
9、而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝 胶的间隙，沉积到底部。中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶反应本质：凝集反应 红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根 据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。中华人民共和国卫生部医政司主办 结果判断标准结果判定标准中华人民共和国卫生部医政司主办 微柱凝胶试验注意事项严格按照试剂说明书操作。献血者DAT阳性，干扰结果判读。患者自身抗体干扰。注意加样顺序。配制细胞浓度准确。中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验盐水介质凝集试验中华人民共和国卫生部医政司主办聚凝胺试验 原理：聚凝胺是一种多价阳离
10、子聚合物，在溶液中 有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷， 并籍助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝 集。当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG 抗体与红细胞上相应的抗原结合，在聚凝胺的作用 下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加 入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上 的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的 凝集不会消失。中华人民共和国卫生部医政司主办+ + +聚凝胺+无凝集+有凝集反应- - - - - 枸橼酸纳- - - - -中华人民共和国卫生部医政司主办聚凝胺试验 优点：简便快捷，可用于某些不完全抗体 检测。 缺点：对无唾液酸的红细胞无作用， 例如多凝
11、集红细胞。可增强自身抗体或冷凝集素干扰。 注意事项：抗原抗体比例适当聚凝胺（1液）去除干净。 中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验中华人民共和国卫生部医政司主办酶介质凝集试验原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有 负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能 消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负 电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细 胞之间的距离，使IgG分子能与有相应抗原 的红细胞产生凝集。中华人民共和国卫生部医政司主办酶介质凝集试验常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花 果酶。 方法：期法-酶液直接加入血清和
12、细胞 的混合物中。 期法-用酶处理细胞再与血清 进 行反应。 两种方法比较：期法 操作方便期法 敏感中华人民共和国卫生部医政司主办酶介质凝集试验优点：可以增强一些抗原抗体系统的反应活性 Rh和Kidd系统最明显缺点：会破坏一些抗原的结构(M、N、Fya、Fyb)酶液批次不同，都需标化最适孵育时间。操作繁复，少数人对酶液过敏。 中华人民共和国卫生部医政司主办微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验中华人民共和国卫生部医政司主办增强技术白蛋白增强凝集法 原理：白蛋白能提高红细胞悬浮液中的介 电常数，从而降低zete电位，缩小了细胞 间距离，增加
13、细胞与细胞的接触面。 应用：血型鉴定和交叉配血 结果判定：出现凝集和溶血现象为阳性结 果。中华人民共和国卫生部医政司主办增强技术低离子强度盐溶液（Liss）法原理：在凝集反应第一阶段，若降低介质 的离子强度，就会减少红细胞周围的阳离 子云，促进带正电荷的IgG与带负电荷的红 细胞发生反应。 注意事项：不能增加额外血清量延 长孵育时间会使某些抗原变质，如 Fya。中华人民共和国卫生部医政司主办抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术血型鉴定中华人民共和国卫生部医政司主办 ABO血型鉴定 方法：方法：常用室温盐水技术检测红细胞上常用室温盐水技术检
14、测红细胞上 的血的血 型抗原，以及血清中存在的血型型抗原，以及血清中存在的血型抗体。结果抗体。结果 判定参见凝集试验。判定参见凝集试验。 ABOABO血型鉴定的常规试验：血型鉴定的常规试验：1 1、正定型正定型：用已知抗体的标准血清检查红：用已知抗体的标准血清检查红 细胞上未知的抗原。常规用抗细胞上未知的抗原。常规用抗A A抗抗B B2 2、反定型反定型：用已知血型的标准红细胞检查：用已知血型的标准红细胞检查 血清中未知的抗体。血清中未知的抗体。常规用常规用A A、B B和和O O三种三种红细胞红细胞 。中华人民共和国卫生部医政司主办正反定型的意义准确的血型判定利于指导临床用血 发现亚型 抗原
15、强度的改变与疾病相关 新抗原出现与疾病相关 排除假阴性或假阳性结果干扰中华人民共和国卫生部医政司主办ABO血型反应格局血型 正定型 反定型抗A 抗B Ac Bc OcA + - - + -B - + + - -O - - + + - AB + + - - -中华人民共和国卫生部医政司主办Cells v SerumSerum v Cells中华人民共和国卫生部医政司主办ABO亚型鉴定亚型通常表现为凝集反应强度弱，或正、反定 型不符 增加试剂：抗A1-区分A1和A2抗H-有较强的H抗原性抗A,B-与Ax的反应强度增强 增加方法：吸收放散试验唾液中血型物质鉴定 PCR方法中华人民共和国卫生部医政司主办 Rh血型鉴定红细胞Rh表型可用 特殊的具有抗D、C、 c、E、和e抗血清检 测来鉴定。但常规只 用抗D血清检查有无D 抗原D抗原阳性者为Rh阳 性，否则为阴性 中华人民共和国卫生部医政司主办Rh血型鉴定方法 Rh抗体属IgG类，一般不能在盐水介质 中与红细胞发生凝集，因此须采用以下 鉴定方法（其中一种）： 1、酶介质法 2、抗人
