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1、全国基层医疗机构 抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌李若瑜 北京大学第一医院 北京大学真菌和真菌病研究中心真菌感染的分类根据真菌侵犯人体的部位分为四类： 浅表真菌病 皮肤真菌病 皮下组织真菌病 系统性真菌病浅部真菌病深部真菌病临床常见的真菌病浅表真菌病： 花斑癣 掌黑癣 毛结节菌病皮肤真菌病： 皮肤癣菌病手足、体股、头、甲 皮肤念珠菌病皮下真菌病： 孢子丝菌病 着色芽生菌病 暗色丝孢霉病 足菌肿系统性真菌病： 念珠菌病 曲霉病 隐球菌病 接合菌病 双相真菌感染浅部真菌病 限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜 的感染。 主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠 菌病。 大多轻微，容易诊断，对治疗反应良 好
2、。手、足、甲癣最常见的真菌病各种头癣：传染、危害健康皮下真菌病往往经过外伤发病孢子丝菌病孢子丝菌病着色芽生菌病着色芽生菌病系统性真菌病 常起源于肺，可以播散到全身许多器官 。 常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病 菌腐生于土壤或腐败有机物中，或作为 植物致病菌。 病原体可分为两组：真正的致病菌和条 件致病菌。系统性真菌病危及生命系统性真菌病主要的致病真菌 荚膜组织胞浆菌 粗球孢子菌 皮炎芽生菌 巴西副球孢子菌临床常见的条件性真菌感染 念珠菌病: 最常见，血源感染的第4位。 曲霉菌病: 常见于干细胞移植、实体器官 移植、大剂量化疗患者。 隐球菌病: 艾滋病人患病率为10-20%。 接合菌病（毛霉病
3、）:多见于重症糖尿病 、烧伤病及器官移植病人。临床有增多趋势的条件性真菌 非白念念珠菌感染 毛孢子菌感染 地霉感染 镰刀菌感染 枝顶孢霉感染 暗色真菌感染 马尔尼菲青霉真菌感染的诊断方法 真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学真菌感染的实验诊断方法及问题真菌感染的实验诊断方法及问题 显微镜检查-阳性率？ 培养-时间？敏感性？意 义？ 血清学-敏感性？特异性 ？ 分子生物学-标准化？组织病理学阿申蓝染色阿申蓝染色H39:199-205侵袭性真菌感染中葡聚糖检测AML, MDSReceiving antifungal prophylaxisCut off60 pg/mlCl
4、in Infect Dis 2004;39:199-205.3030 with candidemiacontrol subjects侵袭性真菌感染的葡聚糖检测FungitellFungitell assay assay检测曲霉半乳甘露聚糖抗原的 EIA 方 法（Platelia）检测位于曲霉细胞壁上的 galactomannan,（GM）3. Detection avidin-enzyme + substrate2. Detecting Ab anti-galactomannanbiotin conjugatedAg blood, urine, BAL1. Capture antibody m
5、onoclonal anti - galactomannanSpecificity = 90% sensitivity = 75%Platelia Aspergillus EIA 结果判断曲霉的GM 抗原检测乳胶凝集试验（Pastorex） (15ng/ml) 酶连免疫吸附试验（Platelia） (1ng/ml)灵敏度（%） 特异度（%） LA25-7090-100ELISA50-9080-90Sabetta et al. JID 1985; 152: 946 Ansorg et al. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1994; 13: 582 Verwei
6、j et al. JCM 1995; 33: 3150 Maertens et al. Blood 2001; 97: 1604 Herbrecht et al. J Clin Oncol 2002; 20: 1898GM GM 抗原抗原GM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断 与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。 检测方法有ELISA、放射免疫分析（RIA） 和乳胶凝集试验等。 Platelia试剂盒采用ELISA方法，敏感性80% ，特异性80%。儿童假阳性10%。 Cut-off值影响结果0.5:早期诊断,特异 性差;1.5:特异性提高。可动态观察。Dr.Maschmeyer G. in 2nd
7、 Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berlin曲霉感染检测的影响因素 半乳甘露聚糖在 血中存在时间短 ，建议：高危人群每周至 少检测2次，动态观 察结合影象学、培 养结果综合分析诊 断假阴性假阳性哌拉西林/他唑巴坦与其它细菌或真菌成分有交叉反应 肠道中定植的曲霉释放GM进入血 液循环 含有谷物的食物中存在GM抗原，通过受损肠黏膜进入血循环导致抗 原血症，化疗后出现严重黏膜炎的 更易发生 检测真菌检测真菌DNADNA的的PCRPCR试验试验标本： 全血 血清 活检组织 BAL CSF不同方法： DNA 提取 PCR 设计 产物检测P
8、CRPCR技术用于诊断 种特异种特异- -PCRPCR 非特异非特异 PCRPCR 杂交杂交 Standart Standart “ “singlesingle“ “ “ “nestednested“ “ PCR-EIAPCR-EIA “ “Real-timeReal-time“ “标本标本 全血全血 血浆血浆 血清血清 BALBAL最低检测范围最低检测范围 4-10 cfu/ml4-10 cfu/ml 25-100 fg DNA25-100 fg DNA原位杂交原位杂交目的基因目的基因 多拷贝基因多拷贝基因PCR过筛试验诊断IA 每周监测2次通用引物; 确定采用巢式和实时定量; 敏感性100
9、%,特异性65%; 早于临床症状2天,早于确诊9天; 动态观察持续阴性可排除;Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berlin, Germany.Jun Zhao et al. JCM 2001Jun Zhao et al. JCM 2001Nested PCR in Animal Models余进，等。中华检验医学杂志，2003种特异引物巢式 PCR扩增烟曲霉rRNA基因动物模型中巢式PCR方法检测的灵敏度动物模型 （只数）巢式PCR阳性结果 （百分比）血培养阳性结果 （百分比）侵袭性
10、肺烟曲霉感 染小鼠（29）23（79.3%）2（6.9%）烟曲霉血症小鼠（ 25）19（76%）7（28%）总计（54）42（77.8%）9（16.7%）灵敏度灵敏度=77.8%=77.8%余进，等。中华检验医学杂志，2003突破方向 对基因组序列和功能的了解，找出特异处 改进目前方法，提高敏感性 Real-time PCR 多重PCR 芯片技术 其它特异抗原DNA 微阵列 芯片、探针: Candida spp. Aspergillus spp. 临床标本: 10-20 cfu/ml body fluid PCR electrophoresis: 75.6% DNA microarray: 8
11、7.9% Zhu et al. AAA. San Francisco, 9-12th September 2004真菌非培养诊断小结 在诊断侵袭性真菌感染有一定价值，尤其 早期诊断和疗效监测 理想的检测方法很少 隐球菌乳胶凝集 曲霉ELISA Glucan PCR方法有待验证 多次取材重要 结合临床表现、真菌学等传统方法和影象 学122 patients 323 samples 33 proven cases 122 patients 323 samples 33 proven cases 肺曲霉病诊断时间表CT positive CT positive 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 chest X-rayantigen-glucan-glucanculture culture histologyhistologyPCRKami M et al, Clin Infect Dis 2001;33:1504-12真菌病诊断感染病学家感染病学家临床医师临床医师真菌学家真菌学家生产研发者生产研发者 病理学家病理学家联系方式: , 6551122-3056谢谢大家!
