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1、实验一 细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞 膜稳定性的影响一 细胞膜的渗透性（一）、实验目的1.了解细胞膜的渗透性 2.了解各种小分子物质跨膜进入红细胞的速度1 物质运输 小分子： 大分子： （二）、实验原理2. 等渗 （isotonic or isosmotic）溶液和溶血 在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%60%则细胞膜损伤而发生溶血，絮状物消失，溶液由悬浊液变为澄清，这时血红蛋白逸出细胞外。 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗
2、入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。（三）、实验材料、用品 1. 器材 50ml烧杯，试管(110cm),试管架，移液管 (5mL、0.5mL). 2. 材料 鸡血. 3. 试剂 0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L 醋酸铵，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵 ，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖， 0.32mol/L甘油，0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙 酮， （四）、实验步骤1. 鸡血细胞悬液取50ml小烧杯一个，加1份鸡血和10份0.1
3、7mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即为稀释的鸡血.2. 低渗溶液取试管一支，加入5ml蒸馏水，再加入0.5ml稀释鸡血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。3. 鸡红细胞的渗透性1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠5ml，再加入0.5ml稀释鸡血，轻轻摇动，注意观察溶液颜色有无变化，有无溶血现象，为什么？不 同 低 渗 溶 液 中 的 溶 血 现现 象试管编号是否溶血时间结果分析1. 5ml水+0.5ml稀释鸡 血 2. 5ml氯化钠+0.5ml稀释鸡 血 3. 5ml氯化铵+0.5ml稀释鸡
4、血 4. 5ml醋酸铵+0.5ml稀释鸡 血 5. 5ml硝酸钠+0.5ml稀释鸡 血 6. 5ml草酸铵+0.5ml稀释鸡 血 7. 5ml硫酸钠+0.5ml稀释鸡 血 8. 5ml葡萄糖+0.5ml稀释鸡 血 9. 5ml甘油+0.5ml稀释鸡 血 10. 5ml乙醇+0.5ml稀释鸡 血 11. 5ml丙酮+0.5ml稀释鸡 血（五）、实验结果将观察到的现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。二 去污剂对红细胞膜稳定性的影响（一）、实验目的掌握用比色计测量去污剂对细胞膜溶解作用的原理。了解各种去污剂对细胞膜稳定性的影响，学会比较这种影响的方法。 （二）、实验原理多种去污剂可以溶解细胞膜上
5、的磷脂化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。本实验以红血球为材料，检测几种去污剂破坏红血球细胞膜的作用。通过测定几种去污剂作用后的无细胞溶液在540毫微米（血红蛋白的特异吸收高峰）波长处的光密度值，进行检验。（三）、实验材料、用品1、材料：鸡血2、试剂：（1）中性去污剂： 10 g/L Triton X-100 ，（2）阳离子去污剂： 10 g/L十六烷基三甲基铵溴（CTAB)（3）阴离子去污剂： 10 g/L十二烷基硫酸钠（SDS）（4）不同浓度Triton X-100: 用生理盐水配制160g/L、140g/L、120g/L、100g/L、80g/L、60g/L3、仪器：722型分光
6、光度计，离心机，移液管（1mL、0.5mL），恒温培养箱。（四）、实验步骤1. 红血球等渗溶液的制备取已加抗凝剂的鸡血7.5mL，加生理盐水30.0mL，2500rpm离心10分钟，收集沉下的红血球，用生理盐水洗涤一次（15mL），再离心10分钟（2500rpm），收集沉淀，加30mL生理盐水，悬浮红血球，即为红血球等渗溶液，备用。2. 不同去污剂对细胞膜的溶解作用表1 不同去污剂对细胞膜的溶解作用管 号123 玻璃离心管玻璃离心管玻璃离心管 去污剂 种类Triton X-100CTABSDS 加10 g/L去污剂 体积（mL ）4.54.54.54.54.54.5H2O（mL）0.20.20
7、.2 红血球等渗溶液（mL）0.20.20.2 2500rpm离心5min5min5min A540000 与Triton X-100的A540相比的 相对溶解作用100以Triton X-100的A值作为100%的溶解作用( 对照)， 计算其它去污剂的相对溶解作用。3. 不同浓度中性去污剂对细胞膜的溶解作用表2 不同浓度中性去污剂对细胞膜的溶解作用管 号123456 玻 璃离 心 管玻 璃离 心 管玻 璃离 心 管玻 璃离 心 管玻 璃离 心 管玻 璃离 心 管 去污剂浓 度(g/mL ）1601401201008060加去污剂体（mL）4.54.54.54.54.54.5 H2O（mL）0.50.50.50.50.50.5 红血球等渗液（mL ）0.50.50.50.50.50.537C恒温水浴20min 2500rpm离心(min)555555 A540000000将测得的密度值为纵坐标，中性去污剂的浓度为横坐标，作图。思考题: 阳、阴离子及中性去污剂对细胞膜稳定性的影 响如何？原因是什么？
