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1、药药物分析实验实验实验八 维生素B1片含量测定的方法验证设计性实验实验原理维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride）， 化学名称为氯化4-甲基-3(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)- 甲基-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐性 质溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反应：紫外吸收特性：Amax=246nm与生物碱沉淀试剂反应氯化物特性：特征性鉴别特征性鉴别含量测定含量测定氯化物检查氯化物检查原理特征性鉴别硫色素反应 维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素 ，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显 现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编药 物分析第
2、六版，P258） 含量测定 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，实验方法实验方法鉴别鉴别反应应取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解 ，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振 摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加 碱使成碱性，则荧光复现。含量测定精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 干燥滤纸过滤精密量取续滤液1.0ml，置25ml量瓶中，共2份，盐酸溶液（91000）定容至刻度，摇匀 测 A246， 用吸光系数
3、计算浓度。如何计计算出所需要的量？稀释释倍数？实验内容与要求鉴别试验 吸收波长选择 精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算 RSD% 重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光 度）计算标示量%，计算RSD% 稳定性试验：考察样品溶液1h内的稳定性，计算 RSD% 加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加 样回收率试验 含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。如何引用？如何引用？线线性关系和范围围分析方法的验证验证1精密度试验试验2重现现性试验试验3加样样回收试验试验4稳稳定性试验试验5线性与范围线性与范围目的 范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法 适用的高低限浓度或量的区
4、间 线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈 正比关系的程度 要求 至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要 有明显差距，最好能有一定的比例关系。 线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r 0.99； HPLC法，r 0.999 列出回归方程、相关系数和线性图线线性关系考察(示例）序号序号1 12 23 34 45 5浓度浓度 （mg/mlmg/ml）0.012500.012500.025000.025000.037500.037500.050000.050000.062500.06250测定值测定值0.2360.2360.3360.3360.4360.4360.5360.5360
5、.6360.636精密度试验目的 检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可 信程度 要求 用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶 液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内 RSD 2.0%RSD 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直 到RSD 2.0%)2150.507 3300.509 4450.513 5600.525 6900.548 71200.567稳稳定性试验试验(示例)加样回收率试验目的 考察准确度，即用该方法测定的结果与真实 值或参考值接近的程度 要求 设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别 制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率 RSD 2.0%加样样
6、回收试验试验序号称样量 （g）待测组分 含量 （mg）对照品加 入量 （mg）测得量（ mg）回收率（ %）平均加样 回收率（ %）RSD （%）10.251112.020.250015.027.2100.130.251240.250915.050.250015.029.898.660.250070.250418.080.250015.033.1100.090.2510取含量测定时一半的称样量，0.5g/298102%撰写方法学验证论文线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 精密度试验 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 重复性试验 加样回收试验: 设计称样量、对照品加入量 含量测定：根据实验测定数值进行计算
