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1、实验二 PMSG生物学效价的测定一实验目的 掌握用生物测定法测定PMSG的生物学效价。 二实验原理 PMSG含有FSH、LH成分，因此具有FSH、LH 相似的生物学作用，即能促使性成熟前的小鼠 子宫增大、促进卵泡发育、排卵和黄体的形成 ；对雄性动物具有促进精细管发育和性细胞分化 。三、测试材料 （一）实验动物：取健康无伤残的2428日龄(即 将达到性成熟日龄)、体重1215g，同源雌幼 小鼠。各测试组内的实验鼠出生日龄相差不得 超过5天，体重相差不得超过3g。(二)测试样品：孕马血清PMSG生物制剂。 (三)器械及药品：1ml注射器、4号针头、0.1ml 微量注射器、1ml和2ml吸管，酒精棉
2、球、生理 盐水、剪子、大号镊子、带齿小镊子、鼠解剖 台(或用小木板及图钉)、玻璃片(2030cm)，鼠 罐、小玻瓶。四、测试方法 （一）测试组的确定：每取0.1ml孕马血清（0.5 IU/l），按表加入不同量的生理盐水，稀释成 不同浓度，作为各测试组。 （二）对照组：注射生理盐水。测定的方法： 生物测定法、细胞培养生物测定法、 免疫测定法、受体测定法五、检定方法 (一)注射 1注射次数 按各测试组要求，按照稀释成不同 浓度的一定剂量。每个测试组需注射3只雌幼 小鼠，孕马血清只作一次注射。对照组亦为3只雌幼小鼠，在每次给各测试组小 鼠注射的同时，注射同样剂量的生理盐水。 2注射部位 按照各组要求
3、的药物剂量,准确地注 射于小鼠的皮下,注意不得将药液注射于胸腔或 腹腔内，亦不可溢漏于体表。3剂量 每只小鼠注射剂量为0.2ml。 4注射方法 用手指捏住小鼠的头及尾部 固定之，以酒精棉球消毒其背部,提起皮 肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头 微向上挑起不露出针尖时，再注入药物 。随着药物的推入，在皮下可看到鼓起 一个小泡，即证实药物确已注入皮下部 位。注射针头宜选用小号细针头,以防止 注射后的药液从针孔处逸出。(二)剖检 1.剖检时间 测试小鼠应在注射药物后的72-78h内 进行。 2.剖检步骤 (1)处死小鼠 采用颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠 头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱 臼的振
4、动。也可采用将小鼠头部经撞击致死。 然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上 或鼠解剖台上。 (2)剖腹 将处死并固定好的小鼠，沿腹中线剪开 腹腔，向前方揭去肠胃内脏，即可在肾脏后方 看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的 两子官角。(3)组织剥离 将卵巢及子宫周围的组织剥离，于 膀胱后的阴道段剪断，向上提起即可将子宫及 卵巢摘出。 (4)剔除附属组织 按各测试组的顺序，将摘出的 子宫平置于玻璃板上，剔除子宫周围的附属组 织。为了防止子宫干涸，可滴上数滴生理盐水 浸润。 (三)效价确定 将各测试组雌幼小鼠的子宫 与对照组子宫相对比观察。在每组3只雌 幼小鼠中，若有2只鼠的子宫增大一倍者 ，则
5、确定该组为阳性反应组。根据各测 试组中以呈阳性反应的最低浓度组的效 价值，换算出每毫升孕马血清中含有的 小鼠单位。 取最低有效剂量组，将其分母5，即为1ml 血清样品中含PMSG的小鼠单位数。 表1 孕马血清稀释倍数折算鼠单位表组 别每0.1ml血清中加 入生理盐水量(ml)稀释后血 清浓度每鼠注射量 （ml）注射鼠数 （只）实际鼠体内血 清量（ml）每ml血清中含 有小鼠单位10.91/100.231/505021.21/130.231/656531.51/160.231/808041.81/190.231/959552.11/220.231/11011062.41/250.231/1251
6、2572.71/280.231/14014083.01/310.231/15515593.31/340.231/170170103.61/370.231/185185组 别每0.1ml血清中加 入生理盐水量(ml)稀释后血 清浓度每鼠注射量 （ml）注射鼠数 （只）实际鼠体内血 清量（ml）阳性小鼠数 量（只）10.91/100.231/5021.51/160.231/8032.11/220.231/11042.71/280.231/14053.31/340.231/1706对照组30动物科学1001班0. 2组 别每0.1ml血清中加 入生理盐水量(ml)稀释后血 清浓度每鼠注射量 （ml）注射鼠数 （只）实际鼠体内血 清量（ml）阳性小鼠数 量（只）11.21/130.231/6521.81/190.231/9532.41/250.231/12543.01/310.231/15553.61/370.231/1856对照组3动物科学1002班0. 20六、实验报告 计算出被测样品中含有的PMSG小鼠单位数。
