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1、细菌的培养与分离技术培养基 常用玻璃器材的准备 培养基的成分和作用 培养基的种类 培养基的制备常用玻璃器材的准备 玻璃器材的种类及用途 玻璃器材的清洗新购置的玻璃器材:12盐酸浸泡清水 清洗用过的无污染器皿:洗涤剂洗刷清水清洗 细菌污染的器材:消毒灭菌后再洗刷盛培养基试管和平皿:高压灭菌趁热倒出 洗涤剂洗刷清水冲洗吸管:3来苏浸泡清水冲洗玻片和盖玻片:3来苏和清洁液浸泡清水 冲洗;染色后的玻片,应肥皂水煮沸10min再洗 涤含油脂的器皿:单独灭菌玻璃器皿灭菌前的准备 玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的 包裹和加塞后才能进行灭菌处理。培养基的成分和作用 培养基:是指人工配制的适合细菌生长繁殖的
2、综合营养基质。 营养物质:蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类 、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐 类 水 凝固剂:琼脂、明胶 抑制剂 指示剂培养基的种类(按用途分类) 基础培养基:培养营养要求不高的细菌,如普通 平板 营养培养基:能满足营养需求较高细菌的生长, 如血平板 鉴别培养基:含有某些特定的底物,用于鉴别细 菌,如克氏双糖培养基(KIA) 选择培养基:具有选择性抑制作用,用于选择性 的培养目的菌,如SS平板 增菌培养基:促进目的菌的生长,适用于含菌量 较少的标本,如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基:用于培养厌氧菌培养基的种类(按物理性状分类) 液体培养基:不含凝固剂,用于增菌和 接种纯种细菌。
3、 半固体培养基:含0.30.5琼脂,用 于观察细菌的动力。 固体培养基:含22.5琼脂,多用于 细菌的分离培养。培养基制备的一般程序调配溶化矫正pH过滤澄清分装灭菌检定培养基灭菌 基础培养基:121高压蒸汽灭菌15分钟 含糖培养基:113 灭菌15分钟 鸡蛋、血清培养基:间歇灭菌3天3次 不耐高温的液体成分:滤过除菌保存培养基pH测定及矫正材料: 待测培养基、 pH7.4标准比色管、4孔比色架、0.02酚红、 氢氧化钠0.1mol/L、1mol/L) 盐酸(0.1mol/L、1mol/L) 蒸馏水 试管(与比色管口径一致)、 刻度吸管(5ml、1ml、0.5ml、0.25ml)、pH矫正水培养
4、基培养基比色管酚红 指示剂目 视培养基蒸馏水pH矫正过酸相同过碱标准比色管待测管培养基蒸馏水标准比色管待测管培养基蒸馏水标准比色管待测管计 算 假设2ml培养基矫正pH至7.4时需 0.1mol/L NaOH 0.12ml,现有培养基 1000ml,求需加NaOH的量。2:10000.12:X设需加NaOH的量为Xml。X=0.1210002 60ml 0.1mol/L NaOH 60106ml 1mol/L NaOH细菌的接种与培养 无菌技术 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作 台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消 毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭 菌 标本的采集 无菌试管
5、、烧瓶的使用细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌,以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌,以免污染环境细菌接种法 平板划线接种法:目的:使混合的细菌呈单个分散生长, 形成单个菌落,以便获得纯菌。方法:分区划线法:适用于含菌量较多的标本连续划线法:适用于含菌量较少的标本 液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环连续划线法细菌培养法 一般培养(需氧培养):培养温度:35(采用恒温培养箱)培养时间:1824h 二氧化碳培养法:烛缸法、二氧化碳培 养箱 厌氧培
6、养法:厌氧培养箱、厌氧袋、厌 氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌在固体培养基中的生长现象 菌落定义:指单个细菌在平板培养基上生长繁殖,形 成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征:大小、形状、边缘、颜色、表面、透 明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型:光滑型(S)、粗糙型(R)、黏液型 (M) 菌苔:指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物 。细菌在液体培养基中的生长现象 混浊 沉淀:多见于链状排列的细菌 菌膜:多见于厌氧菌细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌:在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长,穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌:只沿穿刺线生长,穿刺线 边缘清晰。菌 落菌落与菌苔细菌在液体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象有动力现象无动力 现象