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1、遗传病的分析5 DNA扩增产物的鉴定限制性内切酶酶切技术琼脂糖凝胶电泳技术一、限制性内切酶酶切技术原 理限制性内切酶大多由大肠杆菌中提取纯化 得到，能特异性识别和切割双链DNA分子 中的特异序列（一般识别46个核苷酸序 列） 由于大多数内切酶具绝对的位点特异性， 因此可以选择合适的内切酶切割扩增产物 ，通过片段大小鉴定基因是否有缺失或缺 陷。 原 理本实验使用限制性内切酶（Lwe I） ， 酶切位点：5.GCATC(N)533.CGTAG(N)9.5正常人样品具有酶切位点，能够被酶切开 ，分成2个片断；而病人组G则被A替代， 酶切位点丧失，不能被酶所切动，所以还 是个片断。器材与试剂高速离心机
2、、恒温水浴箱、移液枪 、枪头、塑料离心管等 Lwe I限制性内切酶、三蒸水、缓冲 液等操 作1、取样品2份（病人、正常人PCR扩增产 物）无菌ddH2O 14ul缓冲液10 2ul扩增产物 3.5ul内切酶 0.5ul 2、置37oC水浴3h（或过夜）20ul混匀注意事项内切酶需在20环境中保存。 内切酶活性的发挥需要Mg2 。 为使酶反应时达到最佳条件，需使用生产 厂商提供的反应条件或缓冲液。二、琼脂糖凝胶电泳技术原 理溴化乙啶（EB）是一种高度灵敏的荧光染色剂 ，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA。EB用标准 302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号 ，可用带CCD 摄像头的凝胶成像处理系
3、统拍摄 。 一定量的DNA加入琼脂糖凝胶，能与凝胶中的 EB结合，在TAE介质溶液中，进行电泳。由于 电场作用，DNA分子会从负极向正极泳动，分子 量小的泳动在前，大的在后，形成不同的DNA条 带。此时用紫外透射仪可以检测之。 以标准Marker为参照物，可以得知被检DNA的 大小。器材与试剂紫外透射仪、电泳仪、电泳槽、凝胶板、凝胶梳、橡皮膏、薄膜、移液枪、枪头、塑料离心管等 1琼脂糖（含EB）、 DNA样品、标准Marker、溴酚蓝溶液、TAE缓冲液等操 作1、制备1%凝胶板：配置好的琼脂糖溶液加热溶解后，至50-60 时，浇板 ；冷却后，置电泳槽内，并轻轻拔出梳子。 2、制备上样样品3份（Marker、病人及正常人酶切产物） ：每份样品在塑料薄膜上加：溴酚蓝溶液 6 1ul样品 ul 3、点样：吸取混合好的上样样品，轻轻加入琼脂糖凝胶孔内。 4、电泳：接通电源（80mA），约30min。 5、鉴定：取凝胶置紫外透射仪察看、照相、分析。混匀结 果注意事项溴化乙啶（EB）是强诱变剂， 具有高致癌性！定义： 细胞培养 细胞分裂指数 细胞活率 细胞的生长曲线 细胞周期 细胞培养的生命周期 细胞系、细胞株 细胞“代” 微核 系谱分析
