HIV实验室检测

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1、HIV实验室检测实习生：叶贝2017/4/28HIV病原学及流行病学特点HIV实验室检测方法罗氏第四代HIV检测试剂特点目录HIV病原学HIV人类免疫缺陷病毒，由包膜及核心组成，为RNA病毒HIV核心部分包括两条单股RNA链，核心结构蛋白及复制所需酶类（蛋白酶、逆转录酶、整合酶）HIV病毒逆转录酶无校对功能，故病毒变异性强，导致检测结果假阴性HIV病原学病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆转录酶作用下由RNA逆转录为DNA经DNA转录及翻译后形成蛋白外壳，将病毒RNA包裹其中，生成新的HIV主要侵入T淋巴细胞及神经细胞，导致细胞免疫功能缺陷，增加机会性感染HIV流行病学全国呈低流行态势，部分地区疫

2、情严重HIV主要分为两种HIV- 1和HIV-2两型；HIV-1类为全球主要流 行类型，分为M、 O、 N三个亚型组 HIV传播途径1、传染源：病人及无症状携带者血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播2、传播途径性传播：同行、异性、双性性接触母婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播血液制品传播：共用针具静脉注射毒品，介入性医疗操作，纹身，耳洞等HIV感染自然史急性期艾滋病期无症状期初次感染HIV 2-4周，传染性最强主要以发热、关节痛、淋巴结肿大为特征可检出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置可持续6-8年，HIV在感染者体内不断复制，具有传染性可检测HIV及抗体，CD4+ T淋

3、巴续保逐渐下降HIV感染最终阶段，HIV血浆病毒载量明显升高，CD4+T淋巴细胞200个/ul主要表现为各种机会性感染及肿瘤血清学检测备注HIV抗体筛查试验：ELISA, CIA, ECLIA确证试验：WB, RIBA仅测抗体HIV p24抗原早期灵敏度更高HIV抗原+抗体HIV Ag/Ab combi PT: ELISA, ECLIA, CIA核酸检测备注HIV RNA 定性辅助确证试验Taqman荧光实时PCR试剂HIV RNA 定量辅助确证试验，监测治疗效果 与疾病进展靶核酸扩增试剂淋巴细胞检测备注CD4+和CD8+ HIV感染分期，抗病毒治疗指针CD4+/CD8+比值下降HIV实验室指

4、标初筛试验+确证试验HIV检测流程全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程初筛试验筛查复检HIV检测流程全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程 确证试验确证仅能检测HIV-1，不能检测HIV-2和HIV Ag，灵 敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观HIV检测流程初始反应必须使用抗原和抗体联合检测 的第四代免疫学方法，这类方法可以同 时检测HIV-1抗体、HIV-2抗体和HIV p24抗原，检测出HIV-1、HIV-2感染和 急性HIV-1感染，初始检测无反应性则无 需进行进一步检测初始反应阳性标本需经过FDA批准的抗 体鉴别试剂进行HIV

5、-1和HIV-2抗体鉴别 试验，结果以HIV-1抗体阳性、HIV-2抗 体阳性、HIV抗体阳性或无法鉴别来解释初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应 性或不明确标本须经HIV-1核酸检测， HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别无反应 性为急性HIV-1感染；HIV-1 NAT有反 应性而抗体鉴别试验不明确为HIV-1感染 ；HIV-1 NAT无反应性而抗体鉴别不明 确为假阳性结果联合试验鉴别试验核酸试验美国CDC推荐HIV检测流程 2014修订版HIV检测HIV感染后首先 检测到HIV RNA第四代HIV检测 试剂检测到HIV p24抗原，为抗 原抗体联合检测第三代及其以前 的试剂均为只检 测HI

6、V抗体HIV-1/2/O抗体HIV-1/2/O抗体+HIV p24抗原3rd 代抗体检测核酸检测方法4th 代抗原抗体检测周年24356789101 2435 6017 8 9p24 抗原检测p24 抗原检测从初始感染后的时间 无症状期急性期第一个血清转换窗口期核酸检测方法第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏HIV试剂艾滋病期缩短检测窗口 期，早期诊断2nd 代抗体检测Seroconversion panelElecsys HIV combi PTElecsys HIV combiADVIA Centaur HIV Ag/Ab comboARCHITE

7、CT HIV Ag/Ab comboVIRONOSTI KA HIV Univ-Form II plus OZhuhai Livzon anti-HIV Serodia HIV1/2PRB 9300440888 PRB 9588NANA8NANANA Nabi 07590000NA48 Nabi 143600NA0999 Nabi 40090NA003NANA Nabi 900366NA610610 Nabi 251650000NA44第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏HIV试剂缩短检测窗口 期，早期诊断Elecsys HIV Combi PT阳转时

8、间较PCR 方法平均晚2天，早于或等于其它方法与三种第三代检测方法相比， Elecsys Combi PT 是 1.2 days ，优于Elecsys HIV combi (2.0 days), Zhuhai Livzon anti-HIV(6.2 days) and Serodia HIV1/2 (7.8 days).与ADVIA Centaur相比, the Elecsys HIV combi PTs 的检出时间是 0 days ， ADVIA Centarurs (1.0 days).与VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O相比，Elecsys HIV c

9、ombi PTs 是 1.5 days ，VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus Os (7.5 days).罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 缩短检测窗口 期，早期诊断5.478 days(Roche, data on file)罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT = 诊断相关蛋白p24gp120gp41/gp36p17（基质蛋白）RT(逆转录酶)RNAP24 抗原是 HIV病毒的核 心蛋白HIV-Ag的检测HIV-Ab的检测膜蛋白罗氏HIV试剂第四代HIV抗

10、原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 包含检测物功能抗原检测p24 module 1p24 Ag早期检测HIV感染及终末期感染p24 module 2p24 Ag检测O亚型以及HIV-2抗体检测gp41 module 1HIV-1 IgM and IgG 确保 HIV-1的检测高灵敏gp36 module 1HIV-2 IgM and IgG确保HIV-2的检测高灵敏HIV-1 RTHIV-1 IgG确保检测所有HIV亚型的安全性HIV-2 RTHIV-2 IgG检测所有HIV亚型的安全性gp41 module 2HIV-1 subtype O确保检测O亚型的灵敏度gp3

11、6 module 2 HIV-2 IgG 确保检测HIV-2的备份 缓冲液添加抗干扰物质避免干扰 可识别 所有亚型罗氏HIV试剂可识别 所有亚型第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 6198 472罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 9 min9 min9 min预处理裂解出p24抗原Ag-Ab 复合物磁珠 加入共27min孵育,测量池检测夹心法形成免疫复合物罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 早期感染 血清转换期的检测不同时期HIV感染病人的检测高灵敏度

12、不同亚型的检测Elecsys HIV combi PTARCHITECT HIV Ag/Ab comboADVIA Centaur HIV Ag/Ab comboElecsys HIV combiZhuhai Lizhu anti-HIV EIAVIRONOSTIKA HIV Univ- Form II plus OTotal number 4,4652,7511,039675675703IR (1 s/co)51505102Confirmed positive45440002Number of false positives*665100Specificity (IR, 1 s/co)99.

13、86%99.78%99.52%99.85%100.00%100.00%95% confidence limit (IR, 1 s/co)99.71 99.9599.5299.9298.8899.8499.18 100.0099.45 100.0099.48100.00罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 高特异性罗氏HIV试剂排除类风湿因子、自身抗体、 单克隆丙种球蛋白、EB病毒抗 体、巨细胞病毒抗体、单纯疱 疹病毒抗体、流感疫苗等非特 异性干扰、抗干扰能力强高特异性Case分享REN XX Men 29 YDays since first b

14、leedHIV Combi PT (COI)HIV Combi (COI)ELISA (S/CO)HIV RNA （高精分析）WB010 2011/08/01/4.41/4.05 (POS)0.04(NEG)/P24 (不确定)02134 2011/12/12/4.49(POS)0.01(NEG)HIV RNA (NEG)P24(不确定)罗氏HIV Combi 试剂2次均出现阳性结果，P24抗原也均出现条带，但HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析时注意干扰因素淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳性，需特别对待华西案例分析 CASE

15、1Case分享华西案例分析 CASE 2WUXX Men 30 YDays since first bleedHIV Combi PT (COI)HIV Combi (COI)ELISA (S/CO)HIV RNA （高精分析）WB010 2012/02/1051.15 (POS) 2.59 (POS)0.04 (NEG)/P24 (不确定)02105 2012/05/25302.7(POS)/11.09 (POS)1.8X105 (POS)p24,p31， p51, p66, gp120， gp160该患者第1次检测罗氏HIV Combi PT和HIV Combi均为阳性、 ELISA为阴性、 HIV-Ag检测阳性，患者不同意做确证实验，在105天后第2次采血，罗氏HIV Combi PT 和国产ELISA法检出阳性，WB分析检出较多抗原亚类，实验室作HIV- RNA高精分析证实病毒阳性，最终报告为阳性总结HIV感染自然史有急性期、无症状期、艾滋病期三个时期HIV检测需初筛试验和确证试验共同确认HIV RNA检测为最早识别HIV感染及辅助确诊的重要手段罗氏第四代HIV检测试剂缩短检测窗口期，可识别所有亚型Doing now what patients need next