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1、1高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量作者：安阳，杨菁，岳春丽，刘影【摘要 】 目的建立高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量方法。 方法采用菲罗门 Rezex RPM-Monosaccharide Pb+ +8%（7.8mm300mm）色谱柱，以水为流动相，流速 0.8 ml/min，示差检测器测定地黄寡糖中水苏糖含量。结果在该色谱条件下，水苏糖在 0.203.20 mg/ml 范围内峰面积和进样质量有良好的线性关系，其相关系数为 0.999 5。样品平均回收率为99.9%，RSD 为 1.2%（n=6） 。结论该方法灵敏可靠，专属性强，且具有快速、简便、重复性好的特点。 【关键词】 地黄
2、寡糖； 水苏糖； 高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of stachyose contents in Rehmannia Glutinosa Oligosaccharides(ROS).MethodsStachyose was determined with Rezex RPM-Monosaccharide Pb+ +8%（7.8 mm300 mm）column, water as mobile phase and differential refractive index detecto
3、r. ResultsThe correlation coefficient between the area of stachyose and stachyose content was 20.999 5. The sample average recovery was 99.9%, the RSD was 1.2 %( n=6). ConclusionThis method is simple, rapid, specific, accurate and reproducible.Key words：Rehmannia Glutinosa Oligosaccharides (ROS); St
4、achyose; HPLC地黄首载于神农本草经 ，为玄科多年生草本植物（Rehmannia glutinose Libosch）的根。地黄常被作为益智药物使用。地黄饮子治疗血管性痴呆 39 例，总有效率可达 66.67%1 。地黄饮子证明对中风患者的神经功能恢复具有良好的治疗效果2 。熟地黄水煎剂可以改善 AlCl3 导致痴呆小鼠和大鼠的学习记忆功能3 。尽管地黄的药理作用得到人们认可，但地黄发挥作用的具体成分并不清楚。由于以上地黄制剂在使用时均为其水溶性成分，因此，推断其发挥作用的应为水溶性成分。在此推论的基础上制备了地黄寡糖4(Rehmannia glutinosa oligosaccha
5、rides，ROS)，研究表明，ROS 对缺血再灌导致的大鼠学习记忆损伤具有保护作用4 ；对谷氨酸诱导的神经细胞损伤具有保护作用5 。为进一步探讨 ROS 发挥药理学作用的物质基础，对 ROS 中的水苏糖含量进行了测定。1 仪器与试剂3日本岛津液相色谱仪一套，包括 LC-20ATVP 色谱泵、RID-10A示差检测器、柱温箱、LCsolution 1.03 色谱工作站； KQ-250B 超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产；SYS-550 型石英亚沸高纯水蒸馏器，由金坛市丹阳门石英玻璃厂生产；水苏糖对照品，购于北京慧德易科技有限责任公司，纯度 99.8%。ROS ，自制，批号为200803
6、01，20080302，20080303 ，20080304，20080401，20080402。2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 对照品溶液的制备精密称取水苏糖对照品适量，加水制成每毫升含 1.0 mg 的溶液，即得。2.1.2 供试品溶液的制备即自制 ROS，稀释 10 倍，用 0.45 m 的膜滤过，作为供试品溶液。2.2 色谱条件4色谱柱：菲罗门 Rezex RPM-Monosaccharide Pb+ +8%（7.8 mm300 mm） ；流动相：水；流速：0.8 ml/min；柱温：80，示差检测器，进样量：10 l。结果表明供试品溶液在水苏糖位置上有相应的峰存在，且与其
7、它色谱峰可以基线分离。表明水苏糖在此色谱条件下分离良好。理论塔板数按水苏糖计，应不低于 3 000。色谱图见图 1。 2.3 线性关系实验分别精密称取水苏糖对照品，加水配制浓度分别为0.20，0.40，0.80，1.60，3.2 mg/ml 的溶液，按色谱条件分别进样 10 l，测得峰面积，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：Y=100 409X-3 340.9，r=0.999 5。结果表明水苏糖在 0.203.20 mg/ml 时，浓度与峰面积呈良好线性关系。2.4 精密度和稳定性实验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，重复进样 6 次，10 l/次，测定水苏糖峰面积，其
8、 RSD 为1.2，表明此法的精密度良好。取同一供试品溶液，并分别于 0，3，6 ，9，12，24 h，按上述色谱条件，进样 10 l，测定水苏糖含量， RSD 为 1.9%，表明水苏糖在 24 h 内稳定。52.5 加样回收率实验取供试品 6 批，分别加入水苏糖对照品1 或 2 mg，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，进样，计算回收率，见表 1，平均回收率为 99.91%，RSD 为 1.20%。表 1 回收率实验结果（略）2.6 样品的测定取批号为20080301，20080302，20080303 ，20080304，20080401，20080402，20070101，200701
9、02，20070103 的 ROS，按上述方法测定水苏糖含量，结果其水苏糖含量均在 9.012.0 mg/ml 之间。3 讨论水苏糖在 192 nm 处有吸收，但由于在此波长下干扰大，灵敏度差，因此选用了示差折光检测器，虽然灵敏度低受温度影响大，但由于样品水苏糖的含量高，故灵敏度低的不足得到补偿。作者也尝试了利用 C18 柱及 NH2 柱，对流动相进行了筛选，但样品均未能进行基线分离。在选用专用分离糖的 Rezex RPM-Monosaccharide Pb+ +8%色谱柱后分析效果良好。【参考文献】1谢静红.地黄饮子治疗血管性痴呆 39 例J.福建中医6药, 2007, 37 (1) : 38.2何华，王桂香，钟士江，等. 地黄饮子对中风恢复期患者神经功能及体感诱发电位的影响J.山东医药, 2005, 45（34 ）: 45.3崔瑛，颜正华，侯士良，等. 熟地黄对动物学习记忆障碍及中枢氨基酸递质、受体的影响J.中国中药杂志, 2003, 28 (9) : 862. 4杨菁，石海燕，李莹，等. 地黄寡糖对缺血再灌所致痴呆大鼠学习记忆功能的影响J. 中国药理学与毒理学杂志 , 2008 , 22 (3) : 165.5史佳琳，杨菁，徐新利. 地黄寡糖对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响J.中国药理学通报，2009，25（3）：421.
