微生物学检验奈瑟菌属卡他布兰汉菌属

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1、奈瑟菌属 共同点: 革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽 孢、无鞭毛、有菌毛触酶试验(+)氧化酶试验(+) 种类:脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9种 致病菌:脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 是引起流行性脑脊髓膜炎的病原菌脑膜炎奈瑟菌电镜图形态染色 革兰阴性、肾形、成双排列 新分离菌株有菌毛和荚膜 在患者脑脊液中位于中性粒细胞内培养特性生长条件 营养要求高、在血液、血清培养基中才 能生长 专性需氧、初次分离需5CO2 最适温度35,40不生长 可产生自溶酶常用培养基及生长现象 巧克力色血平板:属营养培养基,菌落 无色、光滑湿润、边缘整齐、有光泽, 似露水珠,易乳化 卵黄双抗平板(EPV):属选择

2、平板, 用于含杂菌的鼻咽拭标本的分离培养, 菌落无色、光滑湿润、较大、扁平生化反应 氧化酶试验阳性 分解葡萄糖、麦芽糖、不分解蔗糖抗原构造与分型 菌体抗原 无特异性 核蛋白抗原 无特异性,与细菌毒力有关 表面荚膜多糖抗原 具有群特异性根据此抗原,将该菌分为13个血清群我国以A群为主,占95,抵抗力 抵抗力弱 对寒冷、湿热、干燥、消毒剂、紫外线 均敏感 能产生自溶酶临床意义 传染源:病人、带菌者 传染途径:呼吸道飞沫传染 致病物质:内毒素、荚膜、菌毛 所致疾病:流行性脑脊髓膜炎 临床表现:上呼吸道症状:鼻咽炎等全身 感染症状:高热、出血点或瘀血点 脑膜 炎症状:头痛、呕吐、颈项强直 特异性预防:

3、接种脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖 疫苗微生物检验标本采集 流脑病人:血液、脑脊液、瘀血点 带菌者检查:鼻咽拭 脑脊液、瘀血点血液分离培养 (卵黄双抗平板)增菌培养直接涂片染色分离培养 (巧克力色平板)可疑菌落、盐水自凝无自凝报告阴性涂片染色生化反应自凝、色素初步报告鼻咽拭子生长特性血清学分群直接涂片镜检 脑脊液沉淀物、瘀血点涂片革兰染色镜 检:若发现中性粒细胞内、外有革兰阴性双 球菌、呈肾形,可作初步诊断培养检查 增菌培养:血液、脑脊液接种增菌液,5 CO2培养。 分离培养:将增菌培养物转种巧克力色 平板,置5CO2环境,35培养1824 小时 可疑菌落:观察菌落特征,取可疑菌落 涂片染色镜检,作盐水

4、自凝试验,盐水 中无自凝。鉴定试验 形态染色:革兰阴性、肾形、成双排列 氧化酶(+) 触酶(+) 糖代谢试验:发酵葡萄糖、麦芽糖 生长特性试验:生长温度、营养需求 血清学鉴定与分群:可与相应诊断血清 发生凝集快速鉴定试验 荧光抗体法荧光素-流脑抗体 +待检物荧光 (直接法)流脑抗体 +待检物 +羊抗兔荧光抗体荧光(间接法) 间接血凝试验流脑多糖抗原致敏红细胞 +待检血清 反向血凝试验流脑抗体致敏红细胞 +标本中可溶性流脑抗原鉴定依据 形态染色:革兰阴性球菌成双排列 菌落典型:光滑型,易乳化,盐水中无 自凝 生化反应: 氧化酶、触酶- 发酵葡萄糖、麦芽糖 生长条件:普通培养基不生长、 血清学:与

5、相应分群血清凝集与卡他布兰汉菌鉴别 形态与奈瑟菌相似 1824环境能生长 普通培养基中可以生长 具有DNA酶淋病奈瑟菌形态染色 革兰阴性肾形、成双排列 有荚膜、菌毛 淋球菌多侵犯尿道粘膜,急性期常位于中 性粒细胞内,急性期多位于中性粒细胞内 ,慢性期则多在细胞外 根据菌毛分型:T1T5T1、T2有菌毛T3、T4、T5无菌毛淋球菌革兰染色图生长条件 营养要求高 专性需氧 510CO2 30或36.5 不生长常用培养基和菌落特征 巧克力色培养基 TM培养基(含万古霉素、多粘菌素、制 霉菌素) MTM培养基(改良的TM) 菌落特征:圆形、光滑、湿润、灰白色 、易乳化生化反应 氧化酶、触酶: 葡萄糖、

6、麦芽糖、蔗糖: 30H2O2试验:抵抗力 抵抗力极弱 对温度变化敏感 对干燥敏感 对消毒剂敏感 易形成耐药性临床意义 致病物质:菌毛、IgA蛋白酶 所致疾病: 性接触引起淋病 产道感染引起新生儿淋病性眼结膜炎标本采集 正确取材女性病人标本:取宫颈内膜分泌物男性病人标本:取尿道口脓性分泌物分泌物直接涂片染色分离培养可疑菌落涂片染色生化反应初步报告生长特性直接涂片 分泌物涂片,做革兰染色 急性炎症期中性粒细胞内可见革兰阴性 双球菌。 阳性率男性90、女性5060。 无症状淋病或轻症患者,尤其是女性, 检出率低,只做涂片可漏诊40以上,培养检查 取材部位准确 培养基预温 立即接种 最好床边接种 合适

7、的培养基 CO2培养 取氧化酶阳性菌落做下一步鉴定鉴定试验 氧化酶试验 糖分解试验(葡萄糖、麦芽糖、蔗糖) 30过氧化氢试验药敏试验抗生素纸片含药量判定标准(mm)敏感中度敏感 耐药青霉素2.4(4U)30202919壮观霉素 100g1814头孢呋 肟10g30202919鉴定依据 形态染色典型:革兰阴性球菌 培养特性:光滑、湿润、易乳化菌落 生化反应:氧化酶阳性、仅分解葡萄糖肠道杆菌 是一大群生物学性状相近的革兰 阴性杆菌。与医学关系密切的肠道杆菌 正常菌群埃希菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 枸橼酸菌属致病菌致病性大肠埃希菌 志贺菌属 沙门菌属 耶尔森菌属肠道杆菌共同特性

8、 形态染色:均为革兰阴性杆菌,无芽孢 ,有菌毛,多数有鞭毛,少数有荚膜 培养特性:需氧、兼性厌氧;营养要求 不高;光滑型菌落; 生化反应:氧化酶;触酶;硝酸盐还原试验 发酵葡萄糖非致病菌多数分解乳糖,致病菌多数不 分解乳糖 抗原结构 O抗原:化学成分为脂多糖;耐热;种 属特异性;与相应抗体结合出现颗粒状 凝集;共同抗原可引起交叉反应 H抗原:化学成分为蛋白质;不耐热; 与相应抗体出现絮状凝集 表面抗原:化学成分为多糖;不耐热; 可阻断O凝集 遗传变异:S-R变异、H-O变异 临床意义:致病物质:菌毛、表面抗原、内毒素、 肠毒素传染途径:肠道传染、肠道外传染所致疾病:肠道致病菌引起肠道传染病(细

9、菌性痢疾 、伤寒等)条件致病菌:是医院感染的主要病原常用培养基 选择性培养基:SS平板:含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌 绿、硫代硫酸钠等Mac平板:含乳糖、中性红指示剂、胆盐等中国蓝平板:含乳糖、中国蓝和玫瑰红酸指 示剂、EMB平板:含乳糖、伊红和美蓝指示剂选择性平板的特点 均含有乳糖和酸碱指示剂:细菌分解乳糖产酸,使培养基pH降低, 指示剂呈酸性变色,指示剂不同,菌落 呈现不同的颜色。分解乳糖的细菌呈有 色菌落,不分解乳糖的细菌为无色菌落 含有不同的抑制剂:对革兰阳性菌和非致病菌有不同程度的 抑制作用,因此可以选择性的培养肠道 致病菌。选择平板细菌生长现象双糖铁培养基(KIA) 配方:含蛋白

10、胨、牛肉膏、氯 化钠、硫代硫酸钠、硫酸亚铁 、琼脂、酚红、乳糖1 、葡 萄糖0.1 用途:主要用于观察肠杆菌科 细菌是否分解乳糖、葡萄糖产 酸产气、是否产生H2S。KIA结果观察: 发酵葡萄糖:底层呈酸性反应(黄色), 斜面为碱性反应(红色),若发酵葡萄糖 产酸产气,底层同时有气泡 发酵葡萄糖和乳糖:底层和斜面均呈酸性 反应(黄色) 产生H2S:培养基变黑1.未接种细菌3.分解乳糖和葡萄糖产酸产气、硫化氢阴性 ( AA)2.分解乳糖和葡萄糖产酸不产气、硫化氢阴性(AA)4.不分解乳糖、分解葡萄糖产酸不产气、硫化氢阴性 (KA)5.不分解乳糖、分解葡萄糖产酸不产气、硫化氢阳性 (KA)微生物学检

11、验 标本采集肠道标本:新鲜粪便肠外标本:根据感染部位不同采集不同 标本检验程序粪 便肠道选择培养基可疑菌落生化反应血清学实验结果报告药敏试验肠道标本血平板、弱选择平板肠道杆菌的生化反应鉴定 与其他科细菌鉴别:鉴定试验肠杆菌科非发酵菌弧菌科氧化酶葡萄糖氧化/ 发酵(O/F)FOF鞭毛周鞭毛单、丛、 周单、丛初步分群苯丙氨酸() 葡萄酸盐()苯丙氨酸() 葡萄酸盐()苯丙氨酸() 葡萄酸盐() 埃希菌属变形杆菌属克雷伯菌属沙门菌属普罗威登斯菌属肠杆菌属志贺菌属摩根菌属沙雷菌属枸橼酸菌属哈夫尼亚菌属爱德华菌属耶尔森菌属肠道杆菌属间鉴定菌属KIAMIU 斜面底层气体 H2S动 力吲 哚脲 酶 埃希菌属A/KA/-+/-+-志贺菌属KA-+/-沙门菌属KA+D/+-变形杆菌属KA+/+-/+克雷伯菌属AA+-d+微量生化反应系统鉴定 将细菌的多项生化反应的2进制数结果数 ,转换成8进制编码而汇集成册,丛编码 的检索表中检索而确定细菌菌名 010011100011100010 011 100 011 100000 0 010 1 001 2 011 3 100 4 101 5 110 6 111 713434

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