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1、http:/ 分为引起皮肤和软组织感染的真菌和引起侵袭性 感染的真菌两大类。皮肤和软组织感染的真菌， 又称为浅部真菌（superficial fungi），主要 侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，寄生和腐生 于表皮、毛发和甲板的角质组织中。深部感染真 菌主要侵袭深部组织和内脏以及全身。上海交通大学医学院2009年3月临床标本真菌检验程序上海交通大学医学院2009年3月真菌鉴定程序上海交通大学医学院2009年3月标本的采集、运送和保存v合适采集、运送与处理标本以及遵守真菌实验检 测与鉴定程序是保证真菌感染的实验检测结果正 确的前提。 v所有标本均应在密封无菌容器运送和处理，运送 时间越短越好；不能
2、用厌氧转运或厌氧容器。粪 便不推荐作为真菌检验的标本。上海交通大学医学院2009年3月标本v 毛发、皮屑、指（趾）甲 v 脓液、伤口、创伤及软组织 v 血液、骨髓 v 导管头 v 结膜、角膜刮片、玻璃体、前房穿刺液 v 前列腺液、阴道分泌物 v 尿液 v 下呼吸道标本（痰、支气管肺泡灌洗液、支气管保护性 毛刷） v 上呼吸道标本 v 无菌体液（脑脊液、心包液，腹膜液和滑膜液） v 组织v v 上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学
3、医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月*17浅部感染真菌检验v浅部感染真菌包括表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮 下组织感染真菌三类。 v临床上最多见的为皮肤癣真菌，包括毛癣菌属、表 皮癣菌属和小孢子菌属。2009年3月*18浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v （一）分类和命名 v 皮肤癣菌（Dermatophytes）是一类嗜角质的丝状真菌 ，具有无性期和有性期两种形态。大多数从环境和人 体分离到的菌株处于无性期，属于丛梗孢科。按菌落 特征及大分生孢子的形态将皮肤癣菌分为3个属，即毛 癣菌属(Trichophyton )、 v
4、 小孢子菌属(Microsporum ) v 及表皮癣菌属(Epidermophyton)。 v 有性期属于裸囊菌科、节皮菌属(Arthroderma)。皮肤 癣菌种类见下表2009年3月*19浅部感染真菌检验2009年3月*20浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v（二）临床意义 v 毛癣菌属易侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发的角蛋 白组织并生长繁殖，可引起头癣、体癣、股癣、叠瓦 癣、手癣、足癣及甲癣等。 v 皮肤癣菌是接触传染，不论男女老少，只要反复接触 患者均有可能被感染。 v 引起皮肤和软组织感染的真菌痊愈，但痊愈后仍可再 感染皮肤癣菌。少数过敏体质的皮肤癣病患者可出现 过敏反应，表现为癣菌疹。2
5、009年3月*21浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v（三）真菌检验 v 1.标本的采集、运送和保存 v 1）甲标本 采集标本前用75%乙醇彻底清洁病甲，以 减少培养时的细菌污染，提高镜检的阳性率。钝刀用 高压或者火焰灭菌，从甲的变色、萎缩或变脆部位、 健甲与病甲的交界处取材，保证一定量与一定深度标 本。甲标本建议取材后立刻进行真菌镜检及培养，甲 标本应尽量剪碎后接种。对于伴有甲沟炎患者的取材 ，应采用棉拭子，75%乙醇清洁局部后沾取损害分泌物 ，每位患者至少应取两个拭子，放入无菌试管中以备 镜检和培养。2009年3月*22浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v （三）真菌检验 v 1.标本的采集、运送和保存
6、v 2）皮屑标本 采集标本前用75%乙醇清洁取材区域。 用高压或者火焰灭菌钝刀，从损害的边缘向外刮取或 用剪刀剪去疱顶。如果鳞屑量较少或婴幼儿患者，可 采用粘着透明胶带或粘着皮肤采样送检，将透明胶带 粘着面紧压于损害之上，然后剥下，将粘着面向下贴 在透明载玻片上送检。皮屑标本建议取材后立刻进行 真菌镜检及培养。2009年3月*23浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v（三）真菌检验 v 1.标本的采集、运送和保存 v 3）毛发标本 选择适当的毛发，应检测那些无光泽毛 发或断发以及在毛囊口折断的毛发。先将镊子高压灭 菌，用镊子将毛发从头皮拔除。不应去掉毛根部。如 果怀疑头皮隐性感染，可用塑料梳子刷头皮后将
7、其压 在琼脂表面进行培养。毛发标本建议取材后立刻进行 真菌镜检及培养。2009年3月*24浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v （三）真菌检验 v 2.常用检验方法 v 1）直接显微镜检查 v 【操作】皮屑标本用 10 KOH液；甲屑用 25 KOH液 或25NaOH液含5甘油处理后制成涂片；病发置载玻片 上，加10%KOH微加温使角质溶解。直接镜检或棉蓝染色 后镜检。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌 丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征 、位置、大小和排列等。 v 【结果判定】皮肤癣菌感染在皮屑、甲屑镜检时可见有 隔菌丝或成串孢子,病发可见发内孢子或发外孢子； v 【注意事项】掌
8、握真菌菌丝或孢子判定标准，即具有一 定折光性的为菌丝或孢子，勿将纤维、细胞等误认为真 菌。2009年3月*25浅部感染真菌检验-皮肤癣菌v（三）真菌检验 v 2.分离培养 分离培养的目的在于鉴定真菌的菌种。 v 【操作】真菌小培养法参见深部真菌标本 v 【结果判定】 v 1.真菌生长后观察菌落的以下方面 生长速度； 菌落大小：以mm或cm记录菌落直径；表面形态： 菌落性质；菌落颜色；菌落边缘；菌落底部 v 2. 显微镜下观察 高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特 征、位置、大小和排列依据菌落特征，镜检特点，尤 其是大分生孢子形状及特殊形状菌丝，必要时辅以鉴 别试验鉴定皮肤癣菌。2009年3月浅部感染
9、真菌检验-皮肤癣菌鉴定v 皮肤癣菌菌种鉴定主要依靠培养的菌落特征、显微镜下 孢子和菌丝的形态以及生理生化试验。 v 其中关键在于促进皮肤癣菌产生孢子，对于难于产孢的 菌种需要采用特殊培养基诱导产孢，例如：对于怀疑毛 癣菌属可以采用燕麦培养基，对于怀疑小孢子菌属可以 采用米饭培养基。 v 个别上述方法均难以鉴定菌种需要借助分子生物学方法 鉴定。 v 皮肤癣菌试验培养基（dermatophyte test medium ,DTM）用于皮 肤癣菌筛选。皮（甲）屑与毛发标本接种该培养基，随着皮肤癣菌 生长，1周内培养基由黄色转变为红色。培养基中大豆蛋白胨提供 营养，放线菌酮抑制腐生霉菌，氯霉素抑制革兰
10、阳性菌和庆大霉素 抑制革兰阴性菌。镜下很容易识别皮肤癣菌的形态特征。上海交通大学医学院2009年3月*27浅部感染真菌检验-皮肤癣菌鉴定v 1.毛癣菌属 在SDA（加CCG）上27+1培养，毛癣菌 属菌落生长速度慢到中等；质地光滑到毛状；表面呈 白色、黄色、米黄色或红紫色，背面呈苍白色、黄色 、褐色或红褐色。显微镜下大分生孢子呈多细胞、圆 柱状、棒状或香烟形，壁光滑，常缺乏。小分生孢子 呈单细胞、圆形、梨形或棒形，孤立或像葡萄状群生 。有时存在关节型孢子和厚膜孢子。2009年3月*28毛癣菌：菌落灰白、红、 橙或棕色,表面呈绒毛状 、粉粒状或蜡样。大分生 孢子细长棒状薄壁。菌丝 有螺旋状、球拍
11、状、鹿角 状和结节状2009年3月毛癣菌属(Trichophyton )上海交通大学医学院2009年3月*30浅部感染真菌检验鉴定 v2.小孢子菌属(Microsporum ) 菌落生长慢到快； 质地光滑、毛状或羊毛状；表面颜色呈白色、米黄 色、黄棕色、黄色或锈色，背面呈苍白色、黄色、 红色、褐色或红褐色。显微镜下大分生孢子呈梭形 ，壁薄或厚，有棘状突起，孤立，含225个细胞。 小分生孢子单细胞，卵圆形到棒形，孤立。2009年3月*31小孢子癣菌：菌落为 灰色、橘红色或棕黄 色，厚壁大分生孢子 ，菌丝有结节状、梳 状和球拍状(Microsporum )2009年3月*32浅部感染真菌检验鉴定
12、v3.表皮癣菌属(Epidermophyton) 菌落生长缓慢；质 地膜状变成毡状到粉状；表面呈黄色到土黄色，背面呈羚 羊皮色到褐色，中心有不规则皱襞或脑回状沟。显微镜下 大分生孢子丰富，棒形、顶端钝圆、壁薄、光滑、孤立或 成群，形成在菌丝侧壁或顶端，23个一组。无小分生孢子 ，在成熟菌落中形成大量厚壁孢子。2009年3月*33表皮癣菌：菌落初为 白色鹅毛状,以后变 为黄绿色粉末状。粗 棒状薄壁大分生孢子 。菌丝球拍状(Epidermophyton)2009年3月*34浅部感染真菌检验v角层癣菌 v角层癣菌主要寄居于人体皮肤和毛干的最表层，因 不接触组织细胞，很少引起宿主组织细胞的炎症反 应，
13、即使有也极轻微。临床主要有糠秕马拉癣菌（ Malassezia furfur）、何德毛结节菌（Piedraia hortae）和白吉尔丝孢酵母（Trichosporon beigelii）。2009年3月糠秕马拉癣菌（Malassezia furfur）v 糠秕马拉癣菌主要寄居在人体皮肤和毛干的最表层，可在 健康人皮肤上分离到，为条件致病菌。 v 侵入表皮后，在皮肤角质层外2/3处生长、繁殖，引起一 种慢性、无症状或轻微症状的皮肤斑疹，呈灰白色、褐色 或淡黄色，上面附着细小糠皮样鳞屑，有时可融合成片， 似汗渍斑点，俗称汗斑即花斑癣（tinea versicolor）。 皮损最常见于胸、背、臂的
14、上半部皮脂腺丰富部位。病程 缓慢，多年不愈，对健康无碍，但影响美观。油性皮肤易 感，而且与遗传、免疫缺陷等因素有关，诱发因素为高温 多汗。近年大量研究显示，糠秕马拉癣菌还可引起毛囊炎 ，可能为脂溢性皮炎的重要发病原因之一。上海交通大学医学院2009年3月糠秕马拉癣菌（Malassezia furfur）v真菌检验 v1.标本采集 疑似汗斑癣：病损极为表浅，以钝 手术刀取材时应尽可能刮取表面皮屑，或用双面 胶粘贴于皮肤表面，数分钟后揭下，直接移至载 玻片上。有时可借助Woods灯照射呈金黄色荧 光处取材。疑似毛结节癣：取带有结节的病发、 胡须。上海交通大学医学院2009年3月糠秕马拉癣菌（Mal
15、assezia furfur）v 真菌检验 v 2.直接显微镜检查 将取材的胶带直接贴于载玻片上镜检 或经棉蓝染色或革兰染色后检查，皮屑加10%KOH制片、观 察。如果是糠秕马拉癣菌感染，可找到弯曲或弧形的菌丝 及圆形或卵圆形孢 子。 v 病发置载玻片上，加10%KOH微加温使角质溶解，直接镜检 或棉蓝染色后镜检。何德毛结节菌引起的感染可见：菌丝 分枝、棕色，菌丝分隔形成关节孢子，并可见子囊，每个 子囊内含24个新月形子囊孢子。白吉尔丝孢酵母菌引起 的感染可见：菌丝淡绿色，与毛干垂直，分裂为圆形、卵 圆形或长方形的孢子，无子囊及子囊孢子。上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院200
16、9年3月糠秕马拉癣菌（Malassezia furfur）v 3.分离培养 疑似花斑癣的鳞屑标本接种于含氯霉素、 放线菌酮及植物油的沙氏培养基上，35培养，观察菌 落。疑似毛结节癣的病发接种于含放线菌酮的沙氏培养 基上，29培养，观察菌落。 v 4.鉴定 糠秕马拉癣菌的主要特征是：病损皮屑Woods 灯照射呈金黄色荧光，嗜脂性生长，酵母型菌落，腊肠 样菌丝，厚壁孢子。根据病发上结节的颜色、硬度、大 小，即可对何德毛结节菌和白吉尔丝孢酵母菌初步诊断 ，直接镜检看到子囊或子囊孢子，可确定为何德毛结节 菌。上海交通大学医学院2009年3月上海交通大学医学院2009年3月*41浅部感染真菌检验v皮下组织感染真菌 v引起皮
