南医大药物分析第04章-药物定量分析与分析方法验证

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1、第四章 药物的含量测定方法与验证药物的含量 指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的 重要指标。药物的含量通常是采用化学、物理学或生物学的方法进行测定 ，是评价药物质量的主要手段，是药品质量标准的重要内容。第一节 定量分析方法的分类与特点ChP所收载的关于药物含量、溶出或释放测定的定量分析方 法主要包括：1. 容量分析法，2.光谱分析法，3.色谱分析法一、容量分析法是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管 滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反 应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓 度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物 的含量。（一） 容量分析法的特点与适用范围

2、1.特点：（1）方法简便易行（2）方法耐用性高（3）测定结果准确（4）方法专属性差2.适用范围：化学原料药的含量测定（二） 容量分析法的计算问题1 滴定度指每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的 质量，ChP用mg表示。A:被测药物，B：滴定剂2 滴定度（T）的计算滴定度T例：用碘量法测定 VitC(176.13） m(I2)=0.05mol/laMA b WA mBVm 滴定液的摩尔浓度（ mol/l)T:药典规定的摩尔浓度的滴定度3. 含量计算（1）直接法ChP收载的容量分析法，均给出滴定度。根据称取量W、 消耗体积V、滴定度T，可求。实际工作与药 典要求存在差 异，需要校正 。（2）

3、间接滴定法1）生成物滴定法该法的百分含量计算与直接滴定方法同，只是在计算 滴定度时需考虑被测药物与中间化合物以及中间化合 物与滴定剂三者之间的化学计量关系。2）剩余滴定法药物+定量过量的滴定液A，用另一滴定液B回滴 ；考虑空白实验 二、 光谱分析法（一）紫外-可见分光光度法 1特点紫外-可见分光光度法是根据物质分子对波 长为200nm760nm 这一范围的单色光辐射的吸收特性所 建立起来的光谱分析方法。主要特点如下：（1）灵敏度高，可达10-4g/ml10-7g/ml ，适于低浓度试样 分析。 （2）准确度高，相对误差为2% 5%，适于对测定结果的准 确度有较高要求的试样的分析。 （3）仪器价

4、格较低廉，操作简单，易于普及。 （4）专属性较差：通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近 的有关物质缺乏选择性。2郎伯-比耳定律单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定浓度范围 内该物质吸收的量与该物质浓度、液层厚度成正比 。A=Ecl注意：药物分析中，E通常采用百分吸收系 数：其物理意义为：当待测溶液浓度为每 100ml中含待测药物1g，液层厚度1cm时 的吸光度值3仪器校正和检定（1）波长：允许误差为紫外光区1nm， 500nm处2nm.（2）吸光度的准确度（3）杂散光的检查（4）对溶剂的要求：使用范围不能小于截止使用波长（5）测定法：需做空白对照4测定方法1)对照品比较法Cx为供试品溶液的浓度

5、; Ax为供试品溶液的吸光度； CR为对照品溶液的浓度；AR为对照品溶液的吸光度。 D 为稀释倍数。标示量（%）：制剂含量相当于标示量的百分数单位制剂的平均装量，如：g/片，g/粒，g/ml, ml/ml B:标示量:单位制剂的标示量（ g/片，g/粒，g/ml, ml/ml ）2）吸收系数法通常要求吸光系数大于100，注意仪器的校正和检定 。3）计算分光光度法4）比色法（二） 荧光分析法1. 方法特点与适用范围（1）高灵敏度：较紫外-可见分光光度法高，可达10-1210-10 g/ml。（2）荧光自熄灭：浓度太大，溶液会用“自熄灭”作用，要求 在低浓度下进行。（3）易受干扰：因灵敏度高，干扰

6、因素多，必须做空白试验 。2. 干扰排除（1）溶剂：测定前检查空白溶剂的荧光强度。（2）溶液：溶液中待测药物浓度不宜过高；溶液中的悬 浮物对光有散射作用；溶液中的溶解氧有降低荧光的作 用；控制溶液的pH值。（3）玻璃量器：要求玻璃量器及样品池保持高度洁净。（4）温度：测定时要求控制温度一致3测定法与含量计算Cx为供试品溶液的浓度; Rx为供试品溶液的荧光强度； CR为对照品溶液的浓度； RXb为供试品溶液试剂空白的荧光强度； Rr为对照品溶液的荧光强度； Rrb为对照品溶液试剂空白的荧光强度。要求 在0.52之间（二） 色谱分析法色谱分析法是一种分离分析方法，系根据混合物 中各组分的色谱行为差

7、异，将各组分从混合物中 分离后再（在线、离线）选择性对待组分进行分 析的方法。1. 方法特点与适用范围（1）高灵敏度：最低检出浓度可达10-1510-12 g/ml。（2）高专属性：有效分离样品中与待测组分结构相近的有关 物质，检测信号具有较高专属性，实现选择性检测。（3）高效能与高速度：广泛用于复方制剂含量测定（一） 高效液相色谱法1对仪器的一般要求系统适用性实验（1）色谱柱的理论塔板数（n）（2）分离度（3）重复性（4）色谱峰的拖尾因子. 测定法包括 内标法和外标法（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：内标法精密量取药物对照品和内标物，分别配成溶液，精密量取药物对照品和内标物，分别

8、配成溶液， 精密量取适量，混合配成校正因子测定用的对照精密量取适量，混合配成校正因子测定用的对照 溶液。溶液。式中，式中，AsAs为内标物质的峰面积（峰高）；为内标物质的峰面积（峰高）；A AR R为对为对 照品的峰面积（峰高）；照品的峰面积（峰高）；Cs Cs 为内标物的浓度；为内标物的浓度；C CR R为对照品的浓度。为对照品的浓度。式中，式中，A AX X为供试品的峰面积（峰高）；为供试品的峰面积（峰高）；C CX X为供试为供试 品的浓度；品的浓度；f f为校正因子；为校正因子；AAS S和和CsCs分别为内标物分别为内标物 质的峰面积（峰高）和浓度。质的峰面积（峰高）和浓度。（2）外

9、标法测定供试品中主成分含量：外标法可分为标准曲线法和外标一点法。1）标准曲线法：2）外标一点法：(二) 气相色谱法1. 对仪器的一般要求2. 系统适应性实验3. 测定法 第二节 定量分析样品的前处理方法 一、概述 分析含金属或含卤素、氮、硫、磷、硒等特殊元素药 物分析的前处理方法。 含金属或卤素的药物，如葡萄糖酸锑钠，硬脂酸镁、 碘苯酯、磺溴酞钠等，处理方法因金属或卤素在分子 中结合的牢固程度而异，如：有机卤素药物，所含卤 素原子均直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处 的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。 如果卤素和芳环相连接，则结合牢固，与脂肪链的碳 原子相连接，则结合不牢固；而

10、含金属的有机药物，有两种情况：一是金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸及酚的金属 盐或配位化合物，称为含金属的有机化合物，其分子结构中的 金属原子结合不够牢固，在水溶液中既可离解出金属离子，可 在溶液中直接进行其金属的鉴别或含量定；二是金属原子直接与碳原子以共价键相连接，结合状态比较牢，称为有机金属药物.在溶液中其金属一般不能解离成离子 状态，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态（多转变 为无机的金属盐或离子），方可进行其金属的鉴别或含量测定 。 一、不经有机破坏的分析方法（一） 直接测定法凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些C-M（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有

11、机金属药物，在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方法进行测定 。（二）经水解后测定法1直接回流后测定法2用硫酸水解后测定法（三）经氧化还原后测定法碱性还原后测定二、 经有机破坏的分析方法（一） 湿法破坏1 硝酸-高氯酸法2 硝酸-硫酸法3 硫酸-硫酸盐法4 其它湿法（二） 干法破坏（三） 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method）系将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。

12、本法是快速分解有机物的简单方法，它不需要复杂设备，就能使有机化合物中的待测元素定量分解成离子型。该方法被各国药典所收载。1 仪器装置 燃烧瓶为500ml、1000ml、或2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞应严密、空心、底部熔封铂丝一根（直径为1mm），铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的23 ，如图 2 称样3 燃烧分解操作法4 吸收液的选择（ 2） 仪器与材料仪器装置燃烧瓶为250、500、1000或2000ml无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状称样用材料及称样A. 固体样品 无灰滤纸B. 液体样品 纸袋C. 软膏类样品：将适量样品置

13、不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹样品的燃烧点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放 置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。吸收液A. 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。氧气B. 吸收液的选择氟 水 （HF） 氯 NaOH溶液（HCl)溴 H2O2-NaOH(NaOH饱和溶液-SO2(Br2,HBr)碘 NaOH

14、饱和溶液-SO2(I2,HI)硫 浓H2O2溶液 硒 硝酸溶液（3）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地 通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。（5 5）应用）应用例 磺溴酞钠的含量测定 ChP (2000)燃烧分解O2HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O2溴 取本品约0.2g，照氧瓶燃烧法（附录 C）进行有 机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以0.4%氢氧化钠溶液10ml ，浓过

15、氧化氢溶液0.5ml与水10ml作为吸收液，生成的烟 雾完全吸入吸收液后，用水稀释至100ml，煮沸5分钟，放 冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸银滴定液（0.1mol/l ）20ml，摇匀，再加硫酸铁胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴 定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。 每1mL硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于7.990mg的溴(Br)。例 碘苯酯的含量测定 ChP（2010）原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分 解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘， 并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反 应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴-醋酸溶 液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸 及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反 应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与 淀粉结合所显的蓝色消失即为终点 取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法 进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水l0ml为 吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾 10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰 醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振摇，放置数分 钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流 约35min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g， 密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02 Mol/L)滴定