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1、第四章 高效液相色谱法和 超临界流体色谱法4.5.1 一般条件选择4.5.2 分离类型的选 择 4.5.3 流动相的选择 第五节 液相色谱分析条 件的选择choice of analytical condition for HPLCHigh performance liquid chromatography and Supercritical fluid chromatography *4.5.1 一般条件的选择1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则在高效液相 色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即H = A + C u 液体的黏度比气体大
2、100 倍，密度为气体的1000倍，故降低传质阻力是提高柱效 主要途径。载体粒度较大时的LC曲线。Date 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。分离过程需要保持恒温。 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。上图为粒度较大时的LC曲线左图为粒度较小时的LC曲线Date2.流速流速是调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。3.固定相及分离柱气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分 离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自 行制备。Date4.5.2 分离类型选择Date4.5.3 流动相
3、的选择选择流动相时应注意以下几个普遍性的问题：（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质 长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或 损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化 铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生 沉淀并在柱中沉积。（4）选择的流动相应满足检测器的要求。如当使用 紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。Date在选择流动相时，溶剂的极性是选择的重要依 据。常用溶剂的极性大小顺序为： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙 醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙
4、烷苯四氯化碳 二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 当纯溶剂不能满足分离要求时，多采用混合溶剂 或梯度洗脱。 Date多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 式中i 为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。二元混合溶剂的则为 式中A， B分别为二元混合溶剂中溶剂A和溶剂B的 体积百分数。 Date多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 色谱分析需要调节流动相极性使试样组分的容量 因子k的数值在适宜范围内。对于正相色谱，二元溶剂的极性参数P 和组分的k 值存在如下关系： 式中、分别为初始和调节后二元溶剂的极性参数。k1 、k2为组分相应的容量因子。Date例4-3 在一反相色谱柱上，当流动相为30%甲醇和 70%水(体积比)
5、时，某组分的保留时间为25.6min，死 时间为0.35min，如何调节溶剂配比使组分容量因子为 5？ 解：初始值 = 0.75 即调整溶剂比例为75%甲醇和25%水可使该组分的k 值为5。Date溶剂的选择性溶剂和样品分子间的作 用力用接受质子的能力xe、 给予质子的能力xd和静电力 xn(由偶极矩决定)三种参数 来表征，并以xe、xd和xn构 成一个三角坐标图 。溶剂可分为八组而分别位于图中不同区。I组的xe值 较大，属质子受体溶剂；VII组的xd值较大，属质子给 于体溶剂；V组的xn值较大，属偶极作用力溶剂。同组 溶剂在分离中具有相似的选择性，不同组差别较大。Date溶剂的选择性Date请选择内容结束4.1 高效液相色谱法的特性4.2 高效液相色谱仪4.3 液相色谱固定相与流动相4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择4.6 高效液相色谱法的应用4.7 离子色谱法4.8 超临界流体色谱法Date
