《shrna抑制mdr1的表达对人脑胶质瘤干细胞多药耐药性的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《shrna抑制mdr1的表达对人脑胶质瘤干细胞多药耐药性的实验研究（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、外科学专业优秀论文外科学专业优秀论文 shRNAshRNA 抑制抑制 MDR1MDR1 的表达对人脑胶质瘤干细胞的表达对人脑胶质瘤干细胞多药耐药性的实验研究多药耐药性的实验研究关键词：脑胶质瘤关键词：脑胶质瘤 多药耐药性多药耐药性 干细胞干细胞 药物敏感性药物敏感性摘要：目的：构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡 RNA(short hairpin RNA shRNA)表达质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的影响作用，为胶质瘤 的基因治疗提供实验依据。 方法 1根据 MDR1 的 DNA 序列设计 shRNA，3端加入终止信号 TTTTTT，两端分别加入 BamH 和 Hind 的酶切 位
2、点，并加入 LOOP 环(UUCAAGAGA)形成 shRNA 结构，克隆入 pSilencer3.1-H1 neo 质粒，建立 shRNA 表达质粒系统，酶切，测序鉴定正确后扩增质粒。 2胶质瘤干细胞培养传代。 3实验细胞随机分为空白对照，阴性质粒对照 组，MDR1 组，Siport xp-1 脂质体法转染胶质瘤干细胞，检测时间点分别选为 转染后第 1，3，5，7 天。 4逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)，Western Blotting 在 mRNA 和蛋白水平检测目的基因的表达。 5对转染后的细胞进 行药敏实验，评价 shRNA 对多药耐药性的逆转作用。 结果 1成功构建 MDR1 的
3、 shRNA 表达质粒，酶切，测序分析克隆成功，序列完全正确。 2转 染后的胶质瘤干细胞成指数倍增长。 3.转染实验组 RT-PCR 定量 MDR1 mRNA 相对表达水平有所下降。100 nMshRNA 治疗组(49.34.8)，与阴性对照组 (98.79.8)相比，(Plt;0.05)差异显著；其与 50nM shRNA 治疗组 (78.15.9)相比，(Plt;0.05)，差异显著。实验组目的基因 mRNA 在第 3 天后表达明显降低(Plt;0.05)，RT-PCR 显示 MDR1 抑制率第 3，5，7 天 分别为 78.4614.17，82.0211.87，79.5113.27。 4
4、.Westem blot 显示， shRNA 转染组 P-糖蛋白(P-gp)的表达降低。显示 MDR1 第 3，5，7 天抑制率分别 为 58.16.5，39.55.2，45.88.6 。 5.药敏实验显示，阿霉素、长春 新碱对转染 MDR1 shRNA 的胶质瘤干细胞的，IClt;,50gt;均有不同 程度降低，且出现凋亡峰(Plt;0.05)。 结论：MDR1 小干扰 RNA 可以在 转录后水平对多药耐药进行调节，使 MDR1 基因表达下调，提高对药物的敏感性， 诱导细胞凋亡，为胶质瘤基因治疗提供了一种新的手段。正文内容正文内容目的：构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡 RNA(short
5、 hairpin RNA shRNA) 表达质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的影响作用，为胶质瘤的基因 治疗提供实验依据。 方法 1根据 MDR1 的 DNA 序列设计 shRNA，3端加 入终止信号 TTTTTT，两端分别加入 BamH 和 Hind 的酶切位点，并加入 LOOP 环(UUCAAGAGA)形成 shRNA 结构，克隆入 pSilencer3.1-H1 neo 质粒，建 立 shRNA 表达质粒系统，酶切，测序鉴定正确后扩增质粒。 2胶质瘤干细 胞培养传代。 3实验细胞随机分为空白对照，阴性质粒对照组，MDR1 组， Siport xp-1 脂质体法转染胶质瘤干细胞，检测
6、时间点分别选为转染后第 1，3，5，7 天。 4逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)，Western Blotting 在 mRNA 和蛋白水平检测目的基因的表达。 5对转染后的细胞进行药敏实验， 评价 shRNA 对多药耐药性的逆转作用。 结果 1成功构建 MDR1 的 shRNA 表达质粒，酶切，测序分析克隆成功，序列完全正确。 2转染后的胶质瘤 干细胞成指数倍增长。 3.转染实验组 RT-PCR 定量 MDR1 mRNA 相对表达水平 有所下降。100 nMshRNA 治疗组(49.34.8)，与阴性对照组(98.79.8) 相比，(Plt;0.05)差异显著；其与 50nM shRNA
7、治疗组(78.15.9)相比， (Plt;0.05)，差异显著。实验组目的基因 mRNA 在第 3 天后表达明显降低 (Plt;0.05)，RT-PCR 显示 MDR1 抑制率第 3，5，7 天分别为 78.4614.17，82.0211.87，79.5113.27。 4.Westem blot 显示， shRNA 转染组 P-糖蛋白(P-gp)的表达降低。显示 MDR1 第 3，5，7 天抑制率分别 为 58.16.5，39.55.2，45.88.6 。 5.药敏实验显示，阿霉素、长春 新碱对转染 MDR1 shRNA 的胶质瘤干细胞的，IClt;,50gt;均有不同 程度降低，且出现凋亡峰
8、(Plt;0.05)。 结论：MDR1 小干扰 RNA 可以在 转录后水平对多药耐药进行调节，使 MDR1 基因表达下调，提高对药物的敏感性， 诱导细胞凋亡，为胶质瘤基因治疗提供了一种新的手段。 目的：构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡 RNA(short hairpin RNA shRNA)表达 质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的影响作用，为胶质瘤的基因治疗 提供实验依据。 方法 1根据 MDR1 的 DNA 序列设计 shRNA，3端加入终 止信号 TTTTTT，两端分别加入 BamH 和 Hind 的酶切位点，并加入 LOOP 环 (UUCAAGAGA)形成 shRNA 结构，克
9、隆入 pSilencer3.1-H1 neo 质粒，建立 shRNA 表达质粒系统，酶切，测序鉴定正确后扩增质粒。 2胶质瘤干细胞培养传 代。 3实验细胞随机分为空白对照，阴性质粒对照组，MDR1 组，Siport xp-1 脂质体法转染胶质瘤干细胞，检测时间点分别选为转染后第 1，3，5，7 天。 4逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)，Western Blotting 在 mRNA 和蛋 白水平检测目的基因的表达。 5对转染后的细胞进行药敏实验，评价 shRNA 对多药耐药性的逆转作用。 结果 1成功构建 MDR1 的 shRNA 表达 质粒，酶切，测序分析克隆成功，序列完全正确。 2转染后
10、的胶质瘤干细 胞成指数倍增长。 3.转染实验组 RT-PCR 定量 MDR1 mRNA 相对表达水平有所 下降。100 nMshRNA 治疗组(49.34.8)，与阴性对照组(98.79.8)相比， (Plt;0.05)差异显著；其与 50nM shRNA 治疗组(78.15.9)相比， (Plt;0.05)，差异显著。实验组目的基因 mRNA 在第 3 天后表达明显降低 (Plt;0.05)，RT-PCR 显示 MDR1 抑制率第 3，5，7 天分别为 78.4614.17，82.0211.87，79.5113.27。 4.Westem blot 显示，shRNA 转染组 P-糖蛋白(P-g
11、p)的表达降低。显示 MDR1 第 3，5，7 天抑制率分别 为 58.16.5，39.55.2，45.88.6 。 5.药敏实验显示，阿霉素、长春 新碱对转染 MDR1 shRNA 的胶质瘤干细胞的，IClt;,50gt;均有不同 程度降低，且出现凋亡峰(Plt;0.05)。 结论：MDR1 小干扰 RNA 可以在 转录后水平对多药耐药进行调节，使 MDR1 基因表达下调，提高对药物的敏感性， 诱导细胞凋亡，为胶质瘤基因治疗提供了一种新的手段。 目的：构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡 RNA(short hairpin RNA shRNA)表达 质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的影
12、响作用，为胶质瘤的基因治疗 提供实验依据。 方法 1根据 MDR1 的 DNA 序列设计 shRNA，3端加入终 止信号 TTTTTT，两端分别加入 BamH 和 Hind 的酶切位点，并加入 LOOP 环 (UUCAAGAGA)形成 shRNA 结构，克隆入 pSilencer3.1-H1 neo 质粒，建立 shRNA 表达质粒系统，酶切，测序鉴定正确后扩增质粒。 2胶质瘤干细胞培养传 代。 3实验细胞随机分为空白对照，阴性质粒对照组，MDR1 组，Siport xp-1 脂质体法转染胶质瘤干细胞，检测时间点分别选为转染后第 1，3，5，7 天。 4逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)，We
13、stern Blotting 在 mRNA 和蛋 白水平检测目的基因的表达。 5对转染后的细胞进行药敏实验，评价 shRNA 对多药耐药性的逆转作用。 结果 1成功构建 MDR1 的 shRNA 表达 质粒，酶切，测序分析克隆成功，序列完全正确。 2转染后的胶质瘤干细 胞成指数倍增长。 3.转染实验组 RT-PCR 定量 MDR1 mRNA 相对表达水平有所 下降。100 nMshRNA 治疗组(49.34.8)，与阴性对照组(98.79.8)相比， (Plt;0.05)差异显著；其与 50nM shRNA 治疗组(78.15.9)相比， (Plt;0.05)，差异显著。实验组目的基因 mRN
14、A 在第 3 天后表达明显降低 (Plt;0.05)，RT-PCR 显示 MDR1 抑制率第 3，5，7 天分别为 78.4614.17，82.0211.87，79.5113.27。 4.Westem blot 显示， shRNA 转染组 P-糖蛋白(P-gp)的表达降低。显示 MDR1 第 3，5，7 天抑制率分别 为 58.16.5，39.55.2，45.88.6 。 5.药敏实验显示，阿霉素、长春 新碱对转染 MDR1 shRNA 的胶质瘤干细胞的，IClt;,50gt;均有不同 程度降低，且出现凋亡峰(Plt;0.05)。 结论：MDR1 小干扰 RNA 可以在 转录后水平对多药耐药进
15、行调节，使 MDR1 基因表达下调，提高对药物的敏感性， 诱导细胞凋亡，为胶质瘤基因治疗提供了一种新的手段。 目的：构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡 RNA(short hairpin RNA shRNA)表达 质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的影响作用，为胶质瘤的基因治疗 提供实验依据。 方法 1根据 MDR1 的 DNA 序列设计 shRNA，3端加入终 止信号 TTTTTT，两端分别加入 BamH 和 Hind 的酶切位点，并加入 LOOP 环 (UUCAAGAGA)形成 shRNA 结构，克隆入 pSilencer3.1-H1 neo 质粒，建立 shRNA 表达质粒系统，酶切，测序鉴定正确后扩增质粒。 2胶质瘤干细胞培养传 代。 3实验细胞随机分为空白对照，阴性质粒对照组，MDR1 组，Siport xp-1 脂质体法转染胶质瘤干细胞，检测时间点分别选为转染后第 1，3，5，7 天。 4逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)，Western Blotting 在 mRNA 和蛋 白水平检测目的基因的表达。 5对转染后的细胞进行药敏实验，评价 shRNA 对多药耐药性的逆转作用。 结果 1成功构建 MDR1 的 shRNA 表达 质粒，酶切，测序分析克隆成功，序列完全正确。 2转染后的胶质瘤干
