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1、微生物与生化药学专业优秀论文微生物与生化药学专业优秀论文 黏细菌及其抗菌活性物质的筛选黏细菌及其抗菌活性物质的筛选与鉴定与鉴定关键词：黏细菌关键词：黏细菌 菌株筛选菌株筛选 生长特性生长特性 抗菌活性抗菌活性 分离纯化分离纯化 菌种鉴定菌种鉴定摘要：黏细菌属于原核生物，是一类可滑动的、专性好氧的具有复杂多细胞行 为的单细胞革兰氏阴性杆菌，不仅在细胞分化、发育和生物进化研究中占有重 要地位，而且近年来作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群逐 渐受到世界青睐，其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓， 这对于药物的研发具有重要意义。但分离纯化黏细菌相当困难和耗时，并且难 于培养
2、，同时方法特殊。这极大地限制了对这类微生物物种资源的开发，以致 其应用研究较其它的微生物类群更为落后。所以，探索更好的分离纯化黏细菌 的方法非常重要。 本研究以纯食草兔粪为原料筛选黏细菌。采用多菌灵、灰 黄霉素、克霉唑抑制霉菌、丝状真菌等真菌的生长，用加热法除去不耐热的杂 菌，用低温冷冻的方法除去可能存在的蠕虫以及不耐反复冻融的细菌，兼用选 择培养基 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基富集黏细菌。研究中得到了 3 株细菌，通过观察它们在 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基、LB 培养 基中的菌落形态、生长状况及在电子显微镜下菌株的子实体、营养细胞和黏孢 子的形态、结构等
3、特征，初步鉴定这 3 株细菌均为嗜细菌群黏细菌中的囊球黏 细菌属，发现这三株菌还未曾被报道过，被初步认为是新菌株。实验中发现多 菌灵、灰黄霉素、克霉唑等均可抑制霉菌、丝状真菌等的生长，但多菌灵的抑 菌效果较好。多菌灵为农业用药比先前报道的放线菌酮价廉、易得并且毒性较 小。 实验重点研究了 1 号菌，发现其对数生长期为 3.511h，最适起始 pH 为 7.22，最适生长温度为 34；同时发现 1 号菌胞外及胞内物中都有抗菌活性 物质，且抗菌谱不同，胞外物对革兰氏阳性细菌有较明显的抑菌作用，胞内物 对部分革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌如 E.coli 有抑菌作用，但对革兰氏阴 性细菌的抑菌作用较
4、强，两者对真菌均无抑菌作用。 将 1 号菌的胞外培养物 60旋转蒸干后加水溶解，通过液相萃取、薄层层析、硅胶柱层析，得到了抑 制放线菌生长的单一组分，并通过光谱法、双缩尿法、PAGE(聚丙酰胺凝胶电泳)、 三氯醋酸沉淀、Molisch 反应、葸酮反应等对其进行了初步鉴定，发现其在入 =270nm 时有最大光吸收值，初步鉴定为醛基或酮基的衍生物。 由于 1 号菌 胞外抗菌活性物质耐热性、稳定性较好，同时其水溶性较好、对 Glt;#39;+gt;的抗性又明显、4放置 3 个月后仍有活性，所 以有较大的研究价值。 实验还发现 3 号菌的胞内物也可抑制大肠杆菌的生长， 以上这些都表明这 3 株黏细菌的
5、研究具有实用性和新颖性价值。正文内容正文内容黏细菌属于原核生物，是一类可滑动的、专性好氧的具有复杂多细胞行为 的单细胞革兰氏阴性杆菌，不仅在细胞分化、发育和生物进化研究中占有重要 地位，而且近年来作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群逐渐 受到世界青睐，其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓，这 对于药物的研发具有重要意义。但分离纯化黏细菌相当困难和耗时，并且难于 培养，同时方法特殊。这极大地限制了对这类微生物物种资源的开发，以致其 应用研究较其它的微生物类群更为落后。所以，探索更好的分离纯化黏细菌的 方法非常重要。 本研究以纯食草兔粪为原料筛选黏细菌。采用多菌灵、灰黄
6、霉素、克霉唑抑制霉菌、丝状真菌等真菌的生长，用加热法除去不耐热的杂菌， 用低温冷冻的方法除去可能存在的蠕虫以及不耐反复冻融的细菌，兼用选择培 养基 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基富集黏细菌。研究中得到了 3 株 细菌，通过观察它们在 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基、LB 培养基中 的菌落形态、生长状况及在电子显微镜下菌株的子实体、营养细胞和黏孢子的 形态、结构等特征，初步鉴定这 3 株细菌均为嗜细菌群黏细菌中的囊球黏细菌 属，发现这三株菌还未曾被报道过，被初步认为是新菌株。实验中发现多菌灵、 灰黄霉素、克霉唑等均可抑制霉菌、丝状真菌等的生长，但多菌灵的抑菌效果
7、较好。多菌灵为农业用药比先前报道的放线菌酮价廉、易得并且毒性较小。 实验重点研究了 1 号菌，发现其对数生长期为 3.511h，最适起始 pH 为 7.22，最适生长温度为 34；同时发现 1 号菌胞外及胞内物中都有抗菌活性物 质，且抗菌谱不同，胞外物对革兰氏阳性细菌有较明显的抑菌作用，胞内物对 部分革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌如 E.coli 有抑菌作用，但对革兰氏阴性 细菌的抑菌作用较强，两者对真菌均无抑菌作用。 将 1 号菌的胞外培养物 60旋转蒸干后加水溶解，通过液相萃取、薄层层析、硅胶柱层析，得到了抑 制放线菌生长的单一组分，并通过光谱法、双缩尿法、PAGE(聚丙酰胺凝胶电泳)、
8、三氯醋酸沉淀、Molisch 反应、葸酮反应等对其进行了初步鉴定，发现其在入 =270nm 时有最大光吸收值，初步鉴定为醛基或酮基的衍生物。 由于 1 号菌 胞外抗菌活性物质耐热性、稳定性较好，同时其水溶性较好、对 Glt;#39;+gt;的抗性又明显、4放置 3 个月后仍有活性，所 以有较大的研究价值。 实验还发现 3 号菌的胞内物也可抑制大肠杆菌的生长， 以上这些都表明这 3 株黏细菌的研究具有实用性和新颖性价值。 黏细菌属于原核生物，是一类可滑动的、专性好氧的具有复杂多细胞行为的单 细胞革兰氏阴性杆菌，不仅在细胞分化、发育和生物进化研究中占有重要地位， 而且近年来作为一种可产生丰富而有用
9、的次级代谢物的微生物类群逐渐受到世 界青睐，其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓，这对于药 物的研发具有重要意义。但分离纯化黏细菌相当困难和耗时，并且难于培养， 同时方法特殊。这极大地限制了对这类微生物物种资源的开发，以致其应用研 究较其它的微生物类群更为落后。所以，探索更好的分离纯化黏细菌的方法非 常重要。 本研究以纯食草兔粪为原料筛选黏细菌。采用多菌灵、灰黄霉素、 克霉唑抑制霉菌、丝状真菌等真菌的生长，用加热法除去不耐热的杂菌，用低 温冷冻的方法除去可能存在的蠕虫以及不耐反复冻融的细菌，兼用选择培养基 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基富集黏细菌。研究中得到了 3
10、 株细菌， 通过观察它们在 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基、LB 培养基中的菌落形态、生长状况及在电子显微镜下菌株的子实体、营养细胞和黏孢子的形态、 结构等特征，初步鉴定这 3 株细菌均为嗜细菌群黏细菌中的囊球黏细菌属，发 现这三株菌还未曾被报道过，被初步认为是新菌株。实验中发现多菌灵、灰黄 霉素、克霉唑等均可抑制霉菌、丝状真菌等的生长，但多菌灵的抑菌效果较好。 多菌灵为农业用药比先前报道的放线菌酮价廉、易得并且毒性较小。 实验重 点研究了 1 号菌，发现其对数生长期为 3.511h，最适起始 pH 为 7.22，最适 生长温度为 34；同时发现 1 号菌胞外及胞内物中都有抗菌
11、活性物质，且抗菌 谱不同，胞外物对革兰氏阳性细菌有较明显的抑菌作用，胞内物对部分革兰氏 阳性细菌及革兰氏阴性细菌如 E.coli 有抑菌作用，但对革兰氏阴性细菌的抑菌 作用较强，两者对真菌均无抑菌作用。 将 1 号菌的胞外培养物 60旋转蒸 干后加水溶解，通过液相萃取、薄层层析、硅胶柱层析，得到了抑制放线菌生 长的单一组分，并通过光谱法、双缩尿法、PAGE(聚丙酰胺凝胶电泳)、三氯醋 酸沉淀、Molisch 反应、葸酮反应等对其进行了初步鉴定，发现其在入=270nm 时有最大光吸收值，初步鉴定为醛基或酮基的衍生物。 由于 1 号菌胞外抗菌 活性物质耐热性、稳定性较好，同时其水溶性较好、对 Gl
12、t;#39;+gt;的抗性又明显、4放置 3 个月后仍有活性，所 以有较大的研究价值。 实验还发现 3 号菌的胞内物也可抑制大肠杆菌的生长， 以上这些都表明这 3 株黏细菌的研究具有实用性和新颖性价值。 黏细菌属于原核生物，是一类可滑动的、专性好氧的具有复杂多细胞行为的单 细胞革兰氏阴性杆菌，不仅在细胞分化、发育和生物进化研究中占有重要地位， 而且近年来作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群逐渐受到世 界青睐，其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓，这对于药 物的研发具有重要意义。但分离纯化黏细菌相当困难和耗时，并且难于培养， 同时方法特殊。这极大地限制了对这类微生物物种
13、资源的开发，以致其应用研 究较其它的微生物类群更为落后。所以，探索更好的分离纯化黏细菌的方法非 常重要。 本研究以纯食草兔粪为原料筛选黏细菌。采用多菌灵、灰黄霉素、 克霉唑抑制霉菌、丝状真菌等真菌的生长，用加热法除去不耐热的杂菌，用低 温冷冻的方法除去可能存在的蠕虫以及不耐反复冻融的细菌，兼用选择培养基 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基富集黏细菌。研究中得到了 3 株细菌， 通过观察它们在 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基、LB 培养基中的菌落 形态、生长状况及在电子显微镜下菌株的子实体、营养细胞和黏孢子的形态、 结构等特征，初步鉴定这 3 株细菌均为嗜细菌群黏细菌
14、中的囊球黏细菌属，发 现这三株菌还未曾被报道过，被初步认为是新菌株。实验中发现多菌灵、灰黄 霉素、克霉唑等均可抑制霉菌、丝状真菌等的生长，但多菌灵的抑菌效果较好。 多菌灵为农业用药比先前报道的放线菌酮价廉、易得并且毒性较小。 实验重 点研究了 1 号菌，发现其对数生长期为 3.511h，最适起始 pH 为 7.22，最适 生长温度为 34；同时发现 1 号菌胞外及胞内物中都有抗菌活性物质，且抗菌 谱不同，胞外物对革兰氏阳性细菌有较明显的抑菌作用，胞内物对部分革兰氏 阳性细菌及革兰氏阴性细菌如 E.coli 有抑菌作用，但对革兰氏阴性细菌的抑菌 作用较强，两者对真菌均无抑菌作用。 将 1 号菌的
15、胞外培养物 60旋转蒸 干后加水溶解，通过液相萃取、薄层层析、硅胶柱层析，得到了抑制放线菌生 长的单一组分，并通过光谱法、双缩尿法、PAGE(聚丙酰胺凝胶电泳)、三氯醋 酸沉淀、Molisch 反应、葸酮反应等对其进行了初步鉴定，发现其在入=270nm 时有最大光吸收值，初步鉴定为醛基或酮基的衍生物。 由于 1 号菌胞外抗菌活性物质耐热性、稳定性较好，同时其水溶性较好、对 Glt;#39;+gt;的抗性又明显、4放置 3 个月后仍有活性，所 以有较大的研究价值。 实验还发现 3 号菌的胞内物也可抑制大肠杆菌的生长， 以上这些都表明这 3 株黏细菌的研究具有实用性和新颖性价值。 黏细菌属于原核生
16、物，是一类可滑动的、专性好氧的具有复杂多细胞行为的单 细胞革兰氏阴性杆菌，不仅在细胞分化、发育和生物进化研究中占有重要地位， 而且近年来作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群逐渐受到世 界青睐，其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓，这对于药 物的研发具有重要意义。但分离纯化黏细菌相当困难和耗时，并且难于培养， 同时方法特殊。这极大地限制了对这类微生物物种资源的开发，以致其应用研 究较其它的微生物类群更为落后。所以，探索更好的分离纯化黏细菌的方法非 常重要。 本研究以纯食草兔粪为原料筛选黏细菌。采用多菌灵、灰黄霉素、 克霉唑抑制霉菌、丝状真菌等真菌的生长，用加热法除去不耐热的杂菌，用低 温冷冻的方法除去可能存在的蠕虫以及不耐反复冻融的细菌，兼用选择培养基 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基富集黏细菌。研究中得到了 3 株细菌， 通过观察它们在 VY/4 培养基、纤维素培养基、WCX 培养基、LB 培养基中的菌落 形态、生
