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1、外科学外科学( (骨外骨外) )专业毕业论文专业毕业论文 精品论文精品论文 脂肪干细胞直接修复兔脂肪干细胞直接修复兔膝关节软骨损伤的实验研究膝关节软骨损伤的实验研究关键词：脂肪干细胞关键词：脂肪干细胞 种子细胞种子细胞 组织工程组织工程 软骨修复软骨修复摘要：目的：脂肪干细胞由于获得容易，创伤小，数量大等优点成为软骨组织 工程中种子细胞研究的热点。但是传统体外诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化常 需要生长因子，存在分化不充分和去分化的问题，并且费用昂贵。现发现在体 内脂肪干细胞不仅能定向分为成熟细胞，而且还可以分泌细胞因子参与组织修 复。因此，直接移植脂肪干细胞修复关节软骨损伤可能更有效。但目前对关
2、节 内的微环境特别是其病理微环境能否使脂肪干细胞向软骨细胞定向分化还不明 确。有学者发现体外共培养的软骨细胞可以诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞 分化，并构建软骨组织。而对软骨细胞特别是病理状态下的软骨细胞能否诱导 脂肪干细胞分化为软骨细胞尚不清楚。因此，本试验拟通过共培养新西兰大白 兔骨关节炎模型来源的软骨细胞和脂肪干细胞结合体内实验，探讨脂肪干细胞 在关节病理状态微环境里向软骨细胞分化修复软骨损伤的可能性，同时还为体 外诱导脂肪干细胞构建软骨组织提供可能的新方法。 材料与方法：1、分离 培养新西兰大白兔脂肪干细胞；2、油红 0 染色观察脂肪干细胞的形态；3、生 长曲线测定冻存前后脂肪干细胞的
3、增殖率；4、体外诱导脂肪干细胞向成骨细胞 和软骨细胞分化，并分别用 von Kossa 染色和甲苯胺蓝染色检测；5、分离培养 原代新西兰大白兔骨关节炎模型的脂肪干细胞和软骨细胞，分别种植于六孔板 和插入式细胞培养皿。根据不同血清浓度(10FBS 和 2FBS)和不同空间(纤维 蛋白凝胶支架和无支架单层培养)分组，共培养 14d 后，胰酶消化终止；6、倒 置显微镜和电镜观察共培养后脂肪干细胞的形态变化；7、分别用免疫细胞化学 和甲苯胺蓝染色法检测共培养后脂肪干细胞的型胶原和蛋白多糖的表达水平； 8、RT-PER 检测蛋白多糖、型胶原、型胶原和型胶原的基因转录水平； 9、分为脂肪干细胞-支架组和单
4、纯支架组修复兔股骨髁负重关节面软骨全层的 新鲜和陈旧性损伤，分别于术后 6 周和 12 周取材，大体观察和组织学评价。 结果：1、从兔脂肪组织中提取的脂肪干细胞冻存前后体外均增殖迅速，成纤维 细胞样生长并具有成骨和成软骨的能力；2、共培养 7d 后部分脂肪干细胞变圆， 14d 时脂肪干细胞形态高度分化与成熟软骨细胞相似，其蛋白多糖和型胶原 的基因转录和蛋白表达均增高，尤以 10FBS 支架共培养组最为明显，但各组 均发现有型胶原基因的转录，而未发现型胶原基因转录；3、对于新鲜和陈 旧性关节软骨损伤，脂肪干细胞-支架组的治疗效果均好于单纯支架组。 结 论：1、分离培养的脂肪干细胞增殖活性高，具有
5、多向分化能力。而且，冻存后 仍能保持增殖活性，可能是软骨组织工程中良好的种子细胞。 2、病理状态 的软骨细胞可以诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化，其机制可能是通过分泌某些 可溶性细胞因子来发挥诱导作用。提示脂肪干细胞在体内关节病理微环境中可 能会向软骨细胞分化。 3、高浓度血清三维培养有利于与软骨细胞共培养的 脂肪干细胞向软骨细胞分化，在体外构建软骨组织。 4、体内直接移植异体 脂肪干细胞可以使脂肪干细胞向软骨细胞分化修复关节软骨损伤。正文内容正文内容目的：脂肪干细胞由于获得容易，创伤小，数量大等优点成为软骨组织工 程中种子细胞研究的热点。但是传统体外诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化常需 要生长因子，
6、存在分化不充分和去分化的问题，并且费用昂贵。现发现在体内 脂肪干细胞不仅能定向分为成熟细胞，而且还可以分泌细胞因子参与组织修复。 因此，直接移植脂肪干细胞修复关节软骨损伤可能更有效。但目前对关节内的 微环境特别是其病理微环境能否使脂肪干细胞向软骨细胞定向分化还不明确。 有学者发现体外共培养的软骨细胞可以诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化， 并构建软骨组织。而对软骨细胞特别是病理状态下的软骨细胞能否诱导脂肪干 细胞分化为软骨细胞尚不清楚。因此，本试验拟通过共培养新西兰大白兔骨关 节炎模型来源的软骨细胞和脂肪干细胞结合体内实验，探讨脂肪干细胞在关节 病理状态微环境里向软骨细胞分化修复软骨损伤的可能
7、性，同时还为体外诱导 脂肪干细胞构建软骨组织提供可能的新方法。 材料与方法：1、分离培养新 西兰大白兔脂肪干细胞；2、油红 0 染色观察脂肪干细胞的形态；3、生长曲线 测定冻存前后脂肪干细胞的增殖率；4、体外诱导脂肪干细胞向成骨细胞和软骨 细胞分化，并分别用 von Kossa 染色和甲苯胺蓝染色检测；5、分离培养原代新 西兰大白兔骨关节炎模型的脂肪干细胞和软骨细胞，分别种植于六孔板和插入 式细胞培养皿。根据不同血清浓度(10FBS 和 2FBS)和不同空间(纤维蛋白凝 胶支架和无支架单层培养)分组，共培养 14d 后，胰酶消化终止；6、倒置显微 镜和电镜观察共培养后脂肪干细胞的形态变化；7、
8、分别用免疫细胞化学和甲苯 胺蓝染色法检测共培养后脂肪干细胞的型胶原和蛋白多糖的表达水平； 8、RT-PER 检测蛋白多糖、型胶原、型胶原和型胶原的基因转录水平； 9、分为脂肪干细胞-支架组和单纯支架组修复兔股骨髁负重关节面软骨全层的 新鲜和陈旧性损伤，分别于术后 6 周和 12 周取材，大体观察和组织学评价。 结果：1、从兔脂肪组织中提取的脂肪干细胞冻存前后体外均增殖迅速，成纤维 细胞样生长并具有成骨和成软骨的能力；2、共培养 7d 后部分脂肪干细胞变圆， 14d 时脂肪干细胞形态高度分化与成熟软骨细胞相似，其蛋白多糖和型胶原 的基因转录和蛋白表达均增高，尤以 10FBS 支架共培养组最为明显
9、，但各组 均发现有型胶原基因的转录，而未发现型胶原基因转录；3、对于新鲜和陈 旧性关节软骨损伤，脂肪干细胞-支架组的治疗效果均好于单纯支架组。 结 论：1、分离培养的脂肪干细胞增殖活性高，具有多向分化能力。而且，冻存后 仍能保持增殖活性，可能是软骨组织工程中良好的种子细胞。 2、病理状态 的软骨细胞可以诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化，其机制可能是通过分泌某些 可溶性细胞因子来发挥诱导作用。提示脂肪干细胞在体内关节病理微环境中可 能会向软骨细胞分化。 3、高浓度血清三维培养有利于与软骨细胞共培养的 脂肪干细胞向软骨细胞分化，在体外构建软骨组织。 4、体内直接移植异体 脂肪干细胞可以使脂肪干细胞向软
10、骨细胞分化修复关节软骨损伤。 目的：脂肪干细胞由于获得容易，创伤小，数量大等优点成为软骨组织工程中 种子细胞研究的热点。但是传统体外诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化常需要生 长因子，存在分化不充分和去分化的问题，并且费用昂贵。现发现在体内脂肪 干细胞不仅能定向分为成熟细胞，而且还可以分泌细胞因子参与组织修复。因 此，直接移植脂肪干细胞修复关节软骨损伤可能更有效。但目前对关节内的微 环境特别是其病理微环境能否使脂肪干细胞向软骨细胞定向分化还不明确。有学者发现体外共培养的软骨细胞可以诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化， 并构建软骨组织。而对软骨细胞特别是病理状态下的软骨细胞能否诱导脂肪干 细胞分化为软
11、骨细胞尚不清楚。因此，本试验拟通过共培养新西兰大白兔骨关 节炎模型来源的软骨细胞和脂肪干细胞结合体内实验，探讨脂肪干细胞在关节 病理状态微环境里向软骨细胞分化修复软骨损伤的可能性，同时还为体外诱导 脂肪干细胞构建软骨组织提供可能的新方法。 材料与方法：1、分离培养新 西兰大白兔脂肪干细胞；2、油红 0 染色观察脂肪干细胞的形态；3、生长曲线 测定冻存前后脂肪干细胞的增殖率；4、体外诱导脂肪干细胞向成骨细胞和软骨 细胞分化，并分别用 von Kossa 染色和甲苯胺蓝染色检测；5、分离培养原代新 西兰大白兔骨关节炎模型的脂肪干细胞和软骨细胞，分别种植于六孔板和插入 式细胞培养皿。根据不同血清浓度
12、(10FBS 和 2FBS)和不同空间(纤维蛋白凝 胶支架和无支架单层培养)分组，共培养 14d 后，胰酶消化终止；6、倒置显微 镜和电镜观察共培养后脂肪干细胞的形态变化；7、分别用免疫细胞化学和甲苯 胺蓝染色法检测共培养后脂肪干细胞的型胶原和蛋白多糖的表达水平； 8、RT-PER 检测蛋白多糖、型胶原、型胶原和型胶原的基因转录水平； 9、分为脂肪干细胞-支架组和单纯支架组修复兔股骨髁负重关节面软骨全层的 新鲜和陈旧性损伤，分别于术后 6 周和 12 周取材，大体观察和组织学评价。 结果：1、从兔脂肪组织中提取的脂肪干细胞冻存前后体外均增殖迅速，成纤维 细胞样生长并具有成骨和成软骨的能力；2、
13、共培养 7d 后部分脂肪干细胞变圆， 14d 时脂肪干细胞形态高度分化与成熟软骨细胞相似，其蛋白多糖和型胶原 的基因转录和蛋白表达均增高，尤以 10FBS 支架共培养组最为明显，但各组 均发现有型胶原基因的转录，而未发现型胶原基因转录；3、对于新鲜和陈 旧性关节软骨损伤，脂肪干细胞-支架组的治疗效果均好于单纯支架组。 结 论：1、分离培养的脂肪干细胞增殖活性高，具有多向分化能力。而且，冻存后 仍能保持增殖活性，可能是软骨组织工程中良好的种子细胞。 2、病理状态 的软骨细胞可以诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化，其机制可能是通过分泌某些 可溶性细胞因子来发挥诱导作用。提示脂肪干细胞在体内关节病理微环境
14、中可 能会向软骨细胞分化。 3、高浓度血清三维培养有利于与软骨细胞共培养的 脂肪干细胞向软骨细胞分化，在体外构建软骨组织。 4、体内直接移植异体 脂肪干细胞可以使脂肪干细胞向软骨细胞分化修复关节软骨损伤。 目的：脂肪干细胞由于获得容易，创伤小，数量大等优点成为软骨组织工程中 种子细胞研究的热点。但是传统体外诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化常需要生 长因子，存在分化不充分和去分化的问题，并且费用昂贵。现发现在体内脂肪 干细胞不仅能定向分为成熟细胞，而且还可以分泌细胞因子参与组织修复。因 此，直接移植脂肪干细胞修复关节软骨损伤可能更有效。但目前对关节内的微 环境特别是其病理微环境能否使脂肪干细胞向软骨
15、细胞定向分化还不明确。有 学者发现体外共培养的软骨细胞可以诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化， 并构建软骨组织。而对软骨细胞特别是病理状态下的软骨细胞能否诱导脂肪干 细胞分化为软骨细胞尚不清楚。因此，本试验拟通过共培养新西兰大白兔骨关 节炎模型来源的软骨细胞和脂肪干细胞结合体内实验，探讨脂肪干细胞在关节 病理状态微环境里向软骨细胞分化修复软骨损伤的可能性，同时还为体外诱导 脂肪干细胞构建软骨组织提供可能的新方法。 材料与方法：1、分离培养新 西兰大白兔脂肪干细胞；2、油红 0 染色观察脂肪干细胞的形态；3、生长曲线 测定冻存前后脂肪干细胞的增殖率；4、体外诱导脂肪干细胞向成骨细胞和软骨细胞分化
16、，并分别用 von Kossa 染色和甲苯胺蓝染色检测；5、分离培养原代新 西兰大白兔骨关节炎模型的脂肪干细胞和软骨细胞，分别种植于六孔板和插入 式细胞培养皿。根据不同血清浓度(10FBS 和 2FBS)和不同空间(纤维蛋白凝 胶支架和无支架单层培养)分组，共培养 14d 后，胰酶消化终止；6、倒置显微 镜和电镜观察共培养后脂肪干细胞的形态变化；7、分别用免疫细胞化学和甲苯 胺蓝染色法检测共培养后脂肪干细胞的型胶原和蛋白多糖的表达水平； 8、RT-PER 检测蛋白多糖、型胶原、型胶原和型胶原的基因转录水平； 9、分为脂肪干细胞-支架组和单纯支架组修复兔股骨髁负重关节面软骨全层的 新鲜和陈旧性损伤，分别于术后 6 周和 12 周取材，大体观察和组织学评价。 结果：1、从兔脂肪组织中提取的脂肪干细胞冻存前后体外均增殖迅速，成纤维 细胞样生长并具有成骨和成软骨的能力；2、共培养 7d 后部分脂肪干细胞变圆
