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1、普通外科学普通外科学( (肝胆外科肝胆外科) )专业毕业论文专业毕业论文 精品论文精品论文 抗人抗人 FXYD3FXYD3 单单克隆抗体的制备应用及蓖麻毒素细胞毒作用的实验研究克隆抗体的制备应用及蓖麻毒素细胞毒作用的实验研究关键词：关键词：FXYD3FXYD3 单克隆抗体单克隆抗体 蓖麻毒素蓖麻毒素 胆管癌胆管癌 实时荧光定量实时荧光定量 PCRPCR摘要：研究目的： 1研制抗人 FXYD3 单克隆抗体并对其进行生物学鉴定； 2探讨 FXYD3 在肝胆系统肿瘤中的组织学分布及与肿瘤组织的生物学行为关系， 揭示 FXYD3 蛋白在肿瘤演变过程中与其可能存在的内在联系； 3从蓖麻籽 中提取蓖麻毒素
2、并对其进行生化鉴定； 4比较肝胆肿瘤细胞系对蓖麻毒素 毒性作用的敏感性及该毒素对 FXYD3 表达水平的影响，为本系列后期研究蓖麻 毒素与抗人 FXYD3 单克隆抗体相连的免疫毒素及其在体内作用的实验研究提供 依据。 研究方法： 1采用 BioSunV1.0 分析软件分析 FXYD3 抗原抗体结 合特性的优势抗原表位，采用固相合成法合成多肽并与载体蛋白 KLH 偶联后免 疫 BALB/c 小鼠，利用 Kohler 与 Milstein 于 1975 年创建的杂交瘤技术制备抗 人 FXYD3 单克隆抗体，并对其进行特性分析：间接 ELISA 方法测定抗体的相对 亲和常数，Western-Blot
3、 法检测抗体的特异性，通过免疫细胞化学检测 FXYD3 在胰腺癌 BxPc-3 细胞系中的表达，并观察 FXYD3 蛋白在细胞中的定位； 2用制备好的 FXYD3 单克隆抗体检测肿瘤细胞系原发性肝癌 HepG2、胆管细胞 癌 Hcccc-9810、胰腺癌 BxPc-3 及肿瘤组织中的表达。免疫组化和免疫细胞化 学及 Western-Blot 法定性判断 FXYD3 蛋白是否表达，Real-time PCR 法定量判 断 FXYD3 蛋白的表达程度； 3将传统的由 Nicolson 与 Blaustein 创建的提 取方法稍加改进，从蓖麻种子中提取天然蓖麻毒素并利用 Sepharose4B 亲和
4、层 析法进行纯化，SDS-PAGE 电泳进行鉴定； 4以肿瘤细胞系原发性肝癌 HepG2、胆管细胞癌 Hcccc-9810、胰腺癌 BxPc-3 为研究对象，MTT 比色法分析 蓖麻毒素对不同肿瘤细胞的抑制作用，流式细胞分析法分析其对 Hcccc-9810 细 胞周期的影响及蓖麻毒素与肿瘤细胞系共培养研究该毒素对 FXYD3 在不同细胞 中表述的影响。 研究结果： 1获得了 4 株稳定分泌抗人 FXYD3 的杂交瘤 细胞株，其中 76-02F1E8 特异性最显著，效价可达 1：105，亲和常数为 3.11108L/mol。所有分泌的抗体亚型均为 IgG1 型，轻链为 k 链； 2原发 性肝癌、
5、胆管癌、胃癌、乳腺癌均有 FXYD3 蛋白的表达，且前两者与相应的癌 旁组织相比，表达有统计学差异(P0.05)；胆管癌组织 FXYD3 的表达与肿瘤细 胞的分化程度相关。胰腺癌 BxPc-3、胆管细胞癌 Hcccc-9810 与原发性肝癌 HepG2 均阳性表达 FXYD3，且表达程度依次降低。 3从 500g 蓖麻籽中提取 到 10.25mg 蓖麻毒素，浓度为 1.3mg/ml；4蓖麻毒素对肝癌细胞、胰腺癌细 胞和胆管癌细胞的抑制作用在不同浓度下(110-11mol/L、110- 10mol/L、110-9mol/L、110-8mol/L 和 110-7mol/L)无差异性，IC50 分
6、别为 0.63710-9mol/L、0.36610-9mol/L 和 0.53510-9mol/L；该毒素可 使 Hcccc-9810 细胞周期停滞在 G0/G1 期从而促进细胞凋亡；不同浓度蓖麻毒素 的作用下，BxPc-3 和 Hcccc-9810 细胞表达 FXYD3 的水平均有不同程度的降低。研究结论： 1FXYD3 蛋白可能与原发性肝癌、胆管癌、胃癌、乳腺癌及 胰腺癌等肿瘤的发生发展有一定关系； 2FXYD3 的表达有可能成为胆管癌 预后的一个重要辅助指标； 3FXYD3 分别与 AFP、CA19-9 联合检测有可能 提高原发性肝癌和胆管癌的检出率； 4HepG2、BxPc-3 和 H
7、cccc-9810 对蓖麻毒素抑制作用均较为敏感且无选择性； 5蓖麻毒素可导致 FXYD3 在肿瘤 细胞中表达减少。正文内容正文内容研究目的： 1研制抗人 FXYD3 单克隆抗体并对其进行生物学鉴定； 2探讨 FXYD3 在肝胆系统肿瘤中的组织学分布及与肿瘤组织的生物学行为关系， 揭示 FXYD3 蛋白在肿瘤演变过程中与其可能存在的内在联系； 3从蓖麻籽 中提取蓖麻毒素并对其进行生化鉴定； 4比较肝胆肿瘤细胞系对蓖麻毒素 毒性作用的敏感性及该毒素对 FXYD3 表达水平的影响，为本系列后期研究蓖麻 毒素与抗人 FXYD3 单克隆抗体相连的免疫毒素及其在体内作用的实验研究提供 依据。 研究方法：
8、 1采用 BioSunV1.0 分析软件分析 FXYD3 抗原抗体结 合特性的优势抗原表位，采用固相合成法合成多肽并与载体蛋白 KLH 偶联后免 疫 BALB/c 小鼠，利用 Kohler 与 Milstein 于 1975 年创建的杂交瘤技术制备抗 人 FXYD3 单克隆抗体，并对其进行特性分析：间接 ELISA 方法测定抗体的相对 亲和常数，Western-Blot 法检测抗体的特异性，通过免疫细胞化学检测 FXYD3 在胰腺癌 BxPc-3 细胞系中的表达，并观察 FXYD3 蛋白在细胞中的定位； 2用制备好的 FXYD3 单克隆抗体检测肿瘤细胞系原发性肝癌 HepG2、胆管细胞 癌 H
9、cccc-9810、胰腺癌 BxPc-3 及肿瘤组织中的表达。免疫组化和免疫细胞化 学及 Western-Blot 法定性判断 FXYD3 蛋白是否表达，Real-time PCR 法定量判 断 FXYD3 蛋白的表达程度； 3将传统的由 Nicolson 与 Blaustein 创建的提 取方法稍加改进，从蓖麻种子中提取天然蓖麻毒素并利用 Sepharose4B 亲和层 析法进行纯化，SDS-PAGE 电泳进行鉴定； 4以肿瘤细胞系原发性肝癌 HepG2、胆管细胞癌 Hcccc-9810、胰腺癌 BxPc-3 为研究对象，MTT 比色法分析 蓖麻毒素对不同肿瘤细胞的抑制作用，流式细胞分析法分
10、析其对 Hcccc-9810 细 胞周期的影响及蓖麻毒素与肿瘤细胞系共培养研究该毒素对 FXYD3 在不同细胞 中表述的影响。 研究结果： 1获得了 4 株稳定分泌抗人 FXYD3 的杂交瘤 细胞株，其中 76-02F1E8 特异性最显著，效价可达 1：105，亲和常数为 3.11108L/mol。所有分泌的抗体亚型均为 IgG1 型，轻链为 k 链； 2原发 性肝癌、胆管癌、胃癌、乳腺癌均有 FXYD3 蛋白的表达，且前两者与相应的癌 旁组织相比，表达有统计学差异(P0.05)；胆管癌组织 FXYD3 的表达与肿瘤细 胞的分化程度相关。胰腺癌 BxPc-3、胆管细胞癌 Hcccc-9810
11、与原发性肝癌 HepG2 均阳性表达 FXYD3，且表达程度依次降低。 3从 500g 蓖麻籽中提取 到 10.25mg 蓖麻毒素，浓度为 1.3mg/ml；4蓖麻毒素对肝癌细胞、胰腺癌细 胞和胆管癌细胞的抑制作用在不同浓度下(110-11mol/L、110- 10mol/L、110-9mol/L、110-8mol/L 和 110-7mol/L)无差异性，IC50 分 别为 0.63710-9mol/L、0.36610-9mol/L 和 0.53510-9mol/L；该毒素可 使 Hcccc-9810 细胞周期停滞在 G0/G1 期从而促进细胞凋亡；不同浓度蓖麻毒素 的作用下，BxPc-3 和
12、 Hcccc-9810 细胞表达 FXYD3 的水平均有不同程度的降低。研究结论： 1FXYD3 蛋白可能与原发性肝癌、胆管癌、胃癌、乳腺癌及 胰腺癌等肿瘤的发生发展有一定关系； 2FXYD3 的表达有可能成为胆管癌 预后的一个重要辅助指标； 3FXYD3 分别与 AFP、CA19-9 联合检测有可能 提高原发性肝癌和胆管癌的检出率； 4HepG2、BxPc-3 和 Hcccc-9810 对蓖 麻毒素抑制作用均较为敏感且无选择性； 5蓖麻毒素可导致 FXYD3 在肿瘤 细胞中表达减少。 研究目的： 1研制抗人 FXYD3 单克隆抗体并对其进行生物学鉴定； 2探讨 FXYD3 在肝胆系统肿瘤中的
13、组织学分布及与肿瘤组织的生物学行为关系，揭示 FXYD3 蛋白在肿瘤演变过程中与其可能存在的内在联系； 3从蓖麻籽 中提取蓖麻毒素并对其进行生化鉴定； 4比较肝胆肿瘤细胞系对蓖麻毒素 毒性作用的敏感性及该毒素对 FXYD3 表达水平的影响，为本系列后期研究蓖麻 毒素与抗人 FXYD3 单克隆抗体相连的免疫毒素及其在体内作用的实验研究提供 依据。 研究方法： 1采用 BioSunV1.0 分析软件分析 FXYD3 抗原抗体结 合特性的优势抗原表位，采用固相合成法合成多肽并与载体蛋白 KLH 偶联后免 疫 BALB/c 小鼠，利用 Kohler 与 Milstein 于 1975 年创建的杂交瘤技
14、术制备抗 人 FXYD3 单克隆抗体，并对其进行特性分析：间接 ELISA 方法测定抗体的相对 亲和常数，Western-Blot 法检测抗体的特异性，通过免疫细胞化学检测 FXYD3 在胰腺癌 BxPc-3 细胞系中的表达，并观察 FXYD3 蛋白在细胞中的定位； 2用制备好的 FXYD3 单克隆抗体检测肿瘤细胞系原发性肝癌 HepG2、胆管细胞 癌 Hcccc-9810、胰腺癌 BxPc-3 及肿瘤组织中的表达。免疫组化和免疫细胞化 学及 Western-Blot 法定性判断 FXYD3 蛋白是否表达，Real-time PCR 法定量判 断 FXYD3 蛋白的表达程度； 3将传统的由 N
15、icolson 与 Blaustein 创建的提 取方法稍加改进，从蓖麻种子中提取天然蓖麻毒素并利用 Sepharose4B 亲和层 析法进行纯化，SDS-PAGE 电泳进行鉴定； 4以肿瘤细胞系原发性肝癌 HepG2、胆管细胞癌 Hcccc-9810、胰腺癌 BxPc-3 为研究对象，MTT 比色法分析 蓖麻毒素对不同肿瘤细胞的抑制作用，流式细胞分析法分析其对 Hcccc-9810 细 胞周期的影响及蓖麻毒素与肿瘤细胞系共培养研究该毒素对 FXYD3 在不同细胞 中表述的影响。 研究结果： 1获得了 4 株稳定分泌抗人 FXYD3 的杂交瘤 细胞株，其中 76-02F1E8 特异性最显著，效
16、价可达 1：105，亲和常数为 3.11108L/mol。所有分泌的抗体亚型均为 IgG1 型，轻链为 k 链； 2原发 性肝癌、胆管癌、胃癌、乳腺癌均有 FXYD3 蛋白的表达，且前两者与相应的癌 旁组织相比，表达有统计学差异(P0.05)；胆管癌组织 FXYD3 的表达与肿瘤细 胞的分化程度相关。胰腺癌 BxPc-3、胆管细胞癌 Hcccc-9810 与原发性肝癌 HepG2 均阳性表达 FXYD3，且表达程度依次降低。 3从 500g 蓖麻籽中提取 到 10.25mg 蓖麻毒素，浓度为 1.3mg/ml；4蓖麻毒素对肝癌细胞、胰腺癌细 胞和胆管癌细胞的抑制作用在不同浓度下(110-11mol/L、110-
