pi3k-akt信号通路与大鼠肝脏缺血预处理保护作用关系的研究

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1、外科学外科学( (普外普外) )专业优秀论文专业优秀论文 PI3K-AktPI3K-Akt 信号通路与大鼠肝脏缺血预信号通路与大鼠肝脏缺血预处理保护作用关系的研究处理保护作用关系的研究关键词：肝缺血再灌注关键词：肝缺血再灌注 缺血预处理缺血预处理 PI3K-AktPI3K-Akt 信号转导信号转导 保护作用保护作用摘要：目的：研究 PI3K-Akt 信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处 理(IPC)后的激活规律，探讨其与缺血预处理保护作用的关系。 方法：将 68 只 SD 雄性大鼠随机分成 5 组：(1)假手术组(Sham 组 n=4)：仅行麻醉开腹、分 离肝蒂；(2)缺血再灌注组

2、(IR 组 n=20)：阻断肝左、中叶肝蒂 1h，再按复灌 Oh、1/2h、1h、2h、4h 分为 5 个亚组；(3)缺血预处理组(IPC 组 n=20)：先阻 断肝左、中叶肝蒂 10min 后继以复灌 10min(IPC)，其后处理同 IR 组；(4)抑制 剂组(LY 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射溶解于二甲亚砜(DMSO) 的 LY294002(1.5mg/kg)，然后再继以 IPC 组处理；(5)二甲亚砜溶剂对照组 (DMSO 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射等体积 DMSO，余处理同 IPC 组。各组大鼠在规定的实验时间点，分别

3、取肝下下腔静脉血 2ml，并切下肝左 叶留取标本。实验指标检测包括：(1)采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨 基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)，乳酸脱氢酶(LDH)的水平变化；(2)肝 脏经切片 HE 染色后，行光镜检查，观察肝组织显微结构；(3)应用免疫组化和 免疫印迹法测定肝组织中 Akt1、p-Akt1 等信号蛋白的表达。 结果：IR 组大 鼠肝脏经缺血 1h 分别再灌注 0、1/2、1、2、4h 后，血清肝酶学指标和肝脏组 织形态学都提示远较 Sham 组大鼠更为明显的肝细胞损伤，并且随复灌的时间延 长呈加重趋势；免疫组化和免疫印迹检测显示 p-Akt1(Thr-30

4、8)表达在复灌后 1/2h 达到高峰，与 Sham 组相比有显著差异(plt;0.01)。与 IR 组比较， IPC 组大鼠在复灌 0h、2h 和 4h 三三个时间点血清肝酶学指标明显降低 (plt;0.01)，肝组织中的 Akt1(Thr-308)磷酸化水平更高、时程延长；同 时，IPC 使 Akt1 下游底物 Bad(Ser-136)磷酸化水平增强、Caspase-3 的活化减 少。PI3K 特异性的阻断剂 LY294002 则在阻断 PI3K-Akt 信号系统的活化的同时， 也完全抑制了 IPC 的保护作用。 结论： 1PI3K-Akt 信号转导通路对肝 IR 损伤有重要的调控作用。 2

5、IPC 通过对 PI3K-Akt 信号转导通路的调控发 挥了对肝脏的保护作用；该信号通路的激活水平上调，可能是肝 IPC 保护作用 的机制之一。正文内容正文内容目的：研究 PI3K-Akt 信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处理 (IPC)后的激活规律，探讨其与缺血预处理保护作用的关系。 方法：将 68 只 SD 雄性大鼠随机分成 5 组：(1)假手术组(Sham 组 n=4)：仅行麻醉开腹、分 离肝蒂；(2)缺血再灌注组(IR 组 n=20)：阻断肝左、中叶肝蒂 1h，再按复灌 Oh、1/2h、1h、2h、4h 分为 5 个亚组；(3)缺血预处理组(IPC 组 n=20)：先阻

6、断肝左、中叶肝蒂 10min 后继以复灌 10min(IPC)，其后处理同 IR 组；(4)抑制 剂组(LY 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射溶解于二甲亚砜(DMSO) 的 LY294002(1.5mg/kg)，然后再继以 IPC 组处理；(5)二甲亚砜溶剂对照组 (DMSO 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射等体积 DMSO，余处理同 IPC 组。各组大鼠在规定的实验时间点，分别取肝下下腔静脉血 2ml，并切下肝左 叶留取标本。实验指标检测包括：(1)采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨 基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)，

7、乳酸脱氢酶(LDH)的水平变化；(2)肝 脏经切片 HE 染色后，行光镜检查，观察肝组织显微结构；(3)应用免疫组化和 免疫印迹法测定肝组织中 Akt1、p-Akt1 等信号蛋白的表达。 结果：IR 组大 鼠肝脏经缺血 1h 分别再灌注 0、1/2、1、2、4h 后，血清肝酶学指标和肝脏组 织形态学都提示远较 Sham 组大鼠更为明显的肝细胞损伤，并且随复灌的时间延 长呈加重趋势；免疫组化和免疫印迹检测显示 p-Akt1(Thr-308)表达在复灌后 1/2h 达到高峰，与 Sham 组相比有显著差异(plt;0.01)。与 IR 组比较， IPC 组大鼠在复灌 0h、2h 和 4h 三三个时

8、间点血清肝酶学指标明显降低 (plt;0.01)，肝组织中的 Akt1(Thr-308)磷酸化水平更高、时程延长；同 时，IPC 使 Akt1 下游底物 Bad(Ser-136)磷酸化水平增强、Caspase-3 的活化减 少。PI3K 特异性的阻断剂 LY294002 则在阻断 PI3K-Akt 信号系统的活化的同时， 也完全抑制了 IPC 的保护作用。 结论： 1PI3K-Akt 信号转导通路对肝 IR 损伤有重要的调控作用。 2IPC 通过对 PI3K-Akt 信号转导通路的调控发 挥了对肝脏的保护作用；该信号通路的激活水平上调，可能是肝 IPC 保护作用 的机制之一。 目的：研究 PI

9、3K-Akt 信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处理(IPC)后 的激活规律，探讨其与缺血预处理保护作用的关系。 方法：将 68 只 SD 雄性 大鼠随机分成 5 组：(1)假手术组(Sham 组 n=4)：仅行麻醉开腹、分离肝蒂；(2)缺 血再灌注组(IR 组 n=20)：阻断肝左、中叶肝蒂 1h，再按复灌 Oh、1/2h、1h、2h、4h 分为 5 个亚组；(3)缺血预处理组(IPC 组 n=20)：先阻 断肝左、中叶肝蒂 10min 后继以复灌 10min(IPC)，其后处理同 IR 组；(4)抑制 剂组(LY 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射溶解

10、于二甲亚砜(DMSO) 的 LY294002(1.5mg/kg)，然后再继以 IPC 组处理；(5)二甲亚砜溶剂对照组 (DMSO 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射等体积 DMSO，余处理同 IPC 组。各组大鼠在规定的实验时间点，分别取肝下下腔静脉血 2ml，并切下肝左 叶留取标本。实验指标检测包括：(1)采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨 基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)，乳酸脱氢酶(LDH)的水平变化；(2)肝 脏经切片 HE 染色后，行光镜检查，观察肝组织显微结构；(3)应用免疫组化和 免疫印迹法测定肝组织中 Akt1、p-Akt1 等信号

11、蛋白的表达。 结果：IR 组大 鼠肝脏经缺血 1h 分别再灌注 0、1/2、1、2、4h 后，血清肝酶学指标和肝脏组 织形态学都提示远较 Sham 组大鼠更为明显的肝细胞损伤，并且随复灌的时间延长呈加重趋势；免疫组化和免疫印迹检测显示 p-Akt1(Thr-308)表达在复灌后 1/2h 达到高峰，与 Sham 组相比有显著差异(plt;0.01)。与 IR 组比较， IPC 组大鼠在复灌 0h、2h 和 4h 三三个时间点血清肝酶学指标明显降低 (plt;0.01)，肝组织中的 Akt1(Thr-308)磷酸化水平更高、时程延长；同 时，IPC 使 Akt1 下游底物 Bad(Ser-136

12、)磷酸化水平增强、Caspase-3 的活化减 少。PI3K 特异性的阻断剂 LY294002 则在阻断 PI3K-Akt 信号系统的活化的同时， 也完全抑制了 IPC 的保护作用。 结论： 1PI3K-Akt 信号转导通路对肝 IR 损伤有重要的调控作用。 2IPC 通过对 PI3K-Akt 信号转导通路的调控发 挥了对肝脏的保护作用；该信号通路的激活水平上调，可能是肝 IPC 保护作用 的机制之一。 目的：研究 PI3K-Akt 信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处理(IPC)后 的激活规律，探讨其与缺血预处理保护作用的关系。 方法：将 68 只 SD 雄性 大鼠随机分成 5

13、组：(1)假手术组(Sham 组 n=4)：仅行麻醉开腹、分离肝蒂；(2)缺 血再灌注组(IR 组 n=20)：阻断肝左、中叶肝蒂 1h，再按复灌 Oh、1/2h、1h、2h、4h 分为 5 个亚组；(3)缺血预处理组(IPC 组 n=20)：先阻 断肝左、中叶肝蒂 10min 后继以复灌 10min(IPC)，其后处理同 IR 组；(4)抑制 剂组(LY 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射溶解于二甲亚砜(DMSO) 的 LY294002(1.5mg/kg)，然后再继以 IPC 组处理；(5)二甲亚砜溶剂对照组 (DMSO 组 n=12)：于 IPC 前 30min

14、经阴茎背静脉注射等体积 DMSO，余处理同 IPC 组。各组大鼠在规定的实验时间点，分别取肝下下腔静脉血 2ml，并切下肝左 叶留取标本。实验指标检测包括：(1)采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨 基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)，乳酸脱氢酶(LDH)的水平变化；(2)肝 脏经切片 HE 染色后，行光镜检查，观察肝组织显微结构；(3)应用免疫组化和 免疫印迹法测定肝组织中 Akt1、p-Akt1 等信号蛋白的表达。 结果：IR 组大 鼠肝脏经缺血 1h 分别再灌注 0、1/2、1、2、4h 后，血清肝酶学指标和肝脏组 织形态学都提示远较 Sham 组大鼠更为明显的肝细胞损伤，

15、并且随复灌的时间延 长呈加重趋势；免疫组化和免疫印迹检测显示 p-Akt1(Thr-308)表达在复灌后 1/2h 达到高峰，与 Sham 组相比有显著差异(plt;0.01)。与 IR 组比较， IPC 组大鼠在复灌 0h、2h 和 4h 三三个时间点血清肝酶学指标明显降低 (plt;0.01)，肝组织中的 Akt1(Thr-308)磷酸化水平更高、时程延长；同 时，IPC 使 Akt1 下游底物 Bad(Ser-136)磷酸化水平增强、Caspase-3 的活化减 少。PI3K 特异性的阻断剂 LY294002 则在阻断 PI3K-Akt 信号系统的活化的同时， 也完全抑制了 IPC 的保

16、护作用。 结论： 1PI3K-Akt 信号转导通路对肝 IR 损伤有重要的调控作用。 2IPC 通过对 PI3K-Akt 信号转导通路的调控发 挥了对肝脏的保护作用；该信号通路的激活水平上调，可能是肝 IPC 保护作用 的机制之一。 目的：研究 PI3K-Akt 信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处理(IPC)后 的激活规律，探讨其与缺血预处理保护作用的关系。 方法：将 68 只 SD 雄性 大鼠随机分成 5 组：(1)假手术组(Sham 组 n=4)：仅行麻醉开腹、分离肝蒂；(2)缺 血再灌注组(IR 组 n=20)：阻断肝左、中叶肝蒂 1h，再按复灌 Oh、1/2h、1h、2h、4h 分为 5 个亚组；(3)缺血预处理组(IPC 组 n=20)：先阻 断肝左、中叶肝蒂 10min 后继以复灌 10min(IPC)，其后处理同 IR 组；(4)抑制 剂组(LY 组 n=12)：于 IPC 前 30min 经阴茎背静脉注射溶解于二甲亚砜(DMSO) 的 LY294