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1、临床PCR检测的标准化卫生部临床检验中心 李金明标准化(standardization)的概念nStandard:文字nStandards:物质nStandardization:通过对测定方法和检测程序的规范化, 使测定结果的量值可溯源至同一标准物 质或参考方法,从而使测定结果在不同 方法、不同试剂及不同的实验间具有可 比性。标准物质、测定方法和检测程 序标准化之间的关系为什么要进行标准化?n通过标准化以改善实验室测定的准确度 ,从而提高不同的实验室间结果的可比 性。n缺乏标准化,则不同试剂、不同方法、 不同实验室间的测定结果就无法一致, 没有可比性,也无法对一种方法、一种 试剂进行适当的评价
2、。 标准化的先决条件n检测物的同一性n标准品的同一性标准化组织n世界卫生组织(WHO)生物学标准化专家委员会(The Expert Committee on Biological Standardisation, ECBS):负责建立生 物物质的国际标准及参比材料。n国家生物学标准和质控物研究所(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC): WHO通过其提供国际标准品 。n一些区域和地区性组织 :美国CDC、CAP、NIHn国际性科学协会:IFCC、国家临床实验室标准化委员会( National Committ
3、ee of Clinical Laboratory Standardisation,NCCLS)以及美国和加拿大临床化学协会( American Societies for Clinical Chemistry and Canadian Societies for Clinical Chemistry and Canadian, AACC 和CSCC)等:组织 编写一些临床检验的导则等文件 标准品和质控品(1)n可提供标准品的国际标准化组织有: WHO生物学标准化专家委员会(ECBS )、英国国家生物学标准和质控物研究 所(National Institute for Biological S
4、tandards and Control,NIBSC)、美国 CDC和CAP、国家卫生研究所(NIH) 、IFCC等;国内有中国药品生物制品检 定所、卫生部临床检验中心标准品和质控品(2)n在美国临床PCR检验试剂方法用于临床 必须有FDA批准;在德国监督机构为 INSTAND;在国内试剂批准文号由 SFDA负责。n仅使用标准品并不能保证PCR测定结果 的可比性,但其在保证PCR测定质量中 的重要性却是不可替代的。标准品和质控品(3)n标准品和质控品的功能:可用作临床检测的校 准物; 可用来评价试验的有效性;作为室内质 控样本; 作为室间质评样本.n国际标准品分级:可分为第一,第二和第三等三
5、个等级. 一级标准数量有限,可使用10-20年, 是冻干品,内含载体蛋白. 一级标准可用来校 准第二和第三级标准. 国际标准品(IS)中作为 第一级标准, 二级标准可用来维持校准.n国内标准品分级:一级和二级。标准品和质控品(4)n标准品的单位: 病毒核酸国际标准品均以IU/L表示。 有关标准品单位和溯源的问题n长度单位的确定和溯源举例标准品定值的测定方法 :参考方法n决定性方法(Definitive method): 是一个具有高精密度及没有系统偏差的参考方法。n参考方法:(Reference method):应有低测定下限、不受非特异干扰及不与相关的化合物发生 交叉反应,同时还应该容易得到
6、。n为保持参考方法的有效性, 有必要建立一个参 考实验室的网络.国际单位(International Units)的由来n国际单位(International units, IU)定义 :国际标准的应用目的是为测定提供一个通 用的标准单位, 使用相同的测定生物学单 位来指定标准品或工作校准品的单位. 核酸检测国际标准项目 研制者 发布年 编号 浓度HBV DNA NIBSC 1999 97/746 106 IU/mlHCV RNA NIBSC 1997 96/790 105 IU/mlNIBSC 2005 96/798 105 IU/mlHIV-1 RNA NIBSC 1998 97/656
7、105 IU/瓶HAV RNA NIBSC 2003 00/560 105 IU/mlB19 DNA NIBSC 2000 99/800 106 IU/ml病毒核酸检测国家标准项 目 研制者 发布年 编 号 浓 度HBV DNA NCCL 2005 GBW(E)090031 1.03106 IU/mlNCCL 2007 GBW09151HCV RNA NCCL 2005 GBW(E)090032 1.29105 IU/mlNCCL 2007 GBW09152测定方法的标准化 n一个测定方法的组成 (1)核酸提取方法; (2)扩增及产物分析方法; (3)如果靶核酸,还有反转录过程 。核酸提取方法 n对抑制物去除的有效性;n简便性。 扩增及产物分析方法 n实时荧光PCRnPCR-ELISA等。n扩增检测条件(循环条件、试剂等)的 理想化。n内标的设置:假阴性质控的最有效的方 法n反转录试剂的效率。 工作程序的标准化n标本采集程序的标准化n仪器设备的校准、维护和正确使用n试剂和消耗品的质检n防“污染”措施的实施n人员的培训上岗n严格的室内质量控制n参加室间质量评价n结果报告和解释的标准化n工作规范的制订