自身抗体的检测及应用

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1、自身抗体的检测及应用 一、自身免疫 【概念】 当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫 耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包 括 正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶 类 等自身抗原产生免疫应答反应，出现自身抗体 或 致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫 。一、自身免疫v自身免疫可以是正常生理性的，例如 ：针对衰老或死亡的自体细胞。v自身免疫也可以是病理性的，引起自 身免疫病。二、自身免疫性疾病 【概念】在内因与外因的共同作用下，机体的自身 免 疫应答失控，反应过度，直接或间接破坏自身 组 织，并引起相应器官病变，导致临床症状，则 为 自身免疫性疾病 。分为器官特异性和全身性。二、自身免疫

2、性疾病自身免疫性疾病的特点： （1）多数自身免疫性疾病是自发或特发性的， 感染，药物等外因可能有一定的影响。 （2）患者血清中存在有高水平的球蛋白。 （3）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与 自身抗原反应的致敏淋巴细胞。 （4）病损部位有变性的免疫球蛋白沉积，呈现 以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎 症。二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特点： （5）病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅 有少数为自限性。 （6）女性多男性，老年多于青少年。 （7）有遗传倾向。 （8）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。 （9）常有其它自身免疫病同时存在。 （10）可复制出相似的动物疾病模型 。三、自身抗

3、体 【概念】 由各种原因造成的机体B细胞产生 针 对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体 谱。RA自身抗体谱及临床意义 RF60RA中出现，量与 RA活 动性及严重性呈正相关 。亦在其它CTD出 现 抗CCP在50RA中出现（抗环瓜氨酸肽抗体） 特异性较高 AKA（抗角蛋白抗体）在40RA阳性 APF（抗核周因子）在52RA阳性 抗RA33RA阳性率为35 抗Sa在部分RA阳性以上抗体阳性有助于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展 治疗，改善预后自身抗体与疾病的关系 某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特 异性，已经成为

4、该病的血清标记抗体或特异性 抗 体 。 某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，少 数自身抗体参与了免疫病病理性损伤 。特异性较强的自身抗体 抗Sm系统性红斑狼疮 抗Scl-70系统性硬化症 抗SSA/SSB干燥综合征 抗CCP类风湿关节炎抗体滴度的高低可判断疾病的活动性 抗双链DNASLE aCLSLE、磷脂抗体综合征 RF类风湿关节炎预测疾病的预后及临床亚型 抗Jo-1皮肌炎合并肺间质病变 抗Scl-70弥漫性系统性硬化 抗rRNP狼疮脑病自身抗体的意义 自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后； 指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。自身抗体常用检测方法自身抗体的检测

5、方法：（1）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检 测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗 原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原 ，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗 体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法 在临床免疫实验室的应用受到一定限制 。（2）酶免疫斑点(条带)实验【优点】将经亲和层析纯化的抗原包被在固 定的位置，每一种抗原只对应一条条带，不 会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、 特异好，判断实验结果简单，每个反应区均 有质控带，可以显示操作是正确，阴性与阳 性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体 滴度相关 。(3)间接免疫荧光法(IFT): 检测ANA的金标准 ，具有很高的敏

6、感性和特异性。间接免疫荧光法原理 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定 有包被基质的生物薄片）温育，如果样本 是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体 与相应的核抗原结合。在第二次温育时， 荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质 上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察 到的特异性荧光模式。抗核抗体(ANA)是以自身真核细胞成分作为 靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种 核 成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体 。抗核抗体(ANA)均质型 与AHA（抗组蛋白抗体）、抗 DNA有关，引起LE形成主要见于 SLE、药物性狼疮核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者抗核抗体(ANA)斑

7、点型与抗ENA有关，应进 一步查特异性抗体核仁型 多见于系统性硬皮病项项目检验检验 方法 SLE四项项 ANA间接免疫荧光 抗DSDNA抗体间接免疫荧光 抗组蛋白抗体ELISA 抗核小体抗体ELISA ENA系列 抗RNP免疫印迹、 ELISA 抗SM免疫印迹、 ELISA 抗SSA免疫印迹、 ELISA 抗SSB免疫印迹、 ELISA 抗JO-1免疫印迹、 ELISA抗SCL-70免疫印迹、 ELISA 抗核糖体P蛋白免疫印迹、 ELISA RA三项项 AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光 抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项项 P-ANCA（荧光模型为核周

8、模型）间接免疫荧光 C-ANCA（荧光模型为细 胞质模型）间接免疫荧光 MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISA PR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常 见 的 自 身 抗 体 及 其 检 测 方 法(1 )(2)自身免疫肝炎七项项 检验检验 方法ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项项 RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综综合

9、征三项项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常 见 的 自 身 抗 体 及 其 检 测 方 法 ds-DNA 判断疾病活动性-ELISA诊断疾病-IFT自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性自身免疫病自身抗体非常复杂SLE患者中存在100多种自身抗体Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.自身免疫病自身抗体非常复杂APS患者中存在30种自身抗体J Autoimmu

10、n, 2008. 30(1-2): p. 74-83.N Engl J Med 2003;349:1526-33.疾病预警自身抗体在SLE发病前9.4年出现疾病预警AMA在PBC发病前10年出现临床复杂性急性肝衰患者出现2和PBC特异性抗体临床复杂性抗CCP抗体在丙肝中8.5 指标阴性是否意味着疾病的排除 ？ 指标阳性意味着什么？特异性的局限 各指标与对应疾病之间：如 SLE 抗Sm抗体特异性99%敏感性仅为25% RA RF阳性可出现在SLE, pSS, SSc, 慢性肺结核，高球蛋白血症等，5%正常 人可出现低滴度的RF 。“自相矛盾”的结果ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性ANA

11、 (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法），占10%，为客观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5% ）特异性指标阳性，人无相应症状 健康人 - 一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月 后复查可能转阴或者下降。 貌似健康人- 检测自身抗体（微观）影像-组织表现-器官（最晚） 患者 - 但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察 滴 度变化，一般会下降 自身免疫性疾病-但不是指标对应的疾病自身抗体检测结果的解释疾病标记（志）性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体疾病前期存在检测方法及检测程序局限性检测质量:假阴性假阳性解读困难四、常见自身抗体的检测及应

12、用 自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几 种 常见的自身抗体的检测 ：（1）类风湿因子（RF）（2）抗ENA抗体谱 类风湿因子（RF）的检测及应用RF是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原 决 定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗 体，可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常 IgG发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者， RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型为主要类型 。类风湿因子（RF）检测方法： a.胶乳凝集试验：只能定性或定量，灵敏度及 特异性不变，只能检测IgM型RF。 b.速率散射比浊法：定量检测，准确、快速， 准确性和敏感性高于胶乳凝集试验，也只能 检测IgM型R

13、F。 c.ELISA法：可检出不同Ig类型的RF。类风湿因子（RF）临床应用 RF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的 重要标准之一。 RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续 高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生 率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外 表现，提示预后不良。RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断 不具特异性SLE 30% SS 70%90%SSc 20%30% MCTD 50%60%5%以下的正常人 RF阳性不等于一定就是RA RF阴性也不等于一定就不是RA抗抗ENAENA抗体谱抗体谱是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体

14、的总称的总称，它主要包括抗它主要包括抗S Sm m、抗、抗RNPRNP、抗抗SSASSA、抗抗 SSBSSB、抗抗J Jo o-1-1、抗抗S Sclcl-70-70、抗组蛋白抗体、抗核抗组蛋白抗体、抗核 小体抗体、抗核糖体小体抗体、抗核糖体P-P-蛋白抗体蛋白抗体、抗着丝点抗抗着丝点抗 体体, , 抗抗dsdsDNADNA。不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗 ENAENA抗体抗体，ENAENA抗体的检测对自身免疫性疾病的抗体的检测对自身免疫性疾病的 诊诊 断和鉴别具有重要意义断和鉴别具有重要意义。抗抗ENAENA抗体谱抗体谱检测方法检测方法免疫印迹法免疫

15、印迹法（IBTIBT）、）、ELISAELISA法、双扩散法法、双扩散法 对流免疫电流、金标法等对流免疫电流、金标法等。免疫印迹技术不需要纯化抗原免疫印迹技术不需要纯化抗原，灵敏度高灵敏度高 、 特异性强特异性强、操作简单操作简单，是广泛采用检测抗是广泛采用检测抗ENAENA抗抗 体的技术。体的技术。临床意义临床意义 nRNPnRNP SmSm SS-ASS-A SS-BSS-B Scl-70Scl-70 Jo-1Jo-1 CENP BCENP B dsDNAdsDNA 核小体核小体 组蛋白组蛋白 核糖体核糖体P P蛋白蛋白nRNPnRNP 高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNPU1-nRNP抗体是混合性结缔抗体是混合性结缔 组织病（组织病（MCTDMCTD，夏普综合征）的标志，夏普综合征）的标志， 阳性率为阳性率为95-10095-100，抗体滴度与疾病活动，抗体滴度与疾病活动 性相关。在性相关。在30-4030-40的系统性红斑狼疮患的系统性红斑狼疮患 者中也可检出抗者中也可检出抗U1-nRNPU1-nRNP抗体，但几乎抗体，但几乎 总伴有抗总伴有抗SmSm抗体。抗体。SmSm 抗抗SmSm抗体是系统性红斑狼疮的特异性标抗体是系统性红斑狼疮的特异性标 志，与抗志，与抗dsDNAdsDNA抗体一起，是系统性红抗