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1、 基因工程的概念基因工程的概念基因工程（基因拼接技术或DNA重组技术）： 按照人们的意愿，把某一生物的某基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造另一种生物的遗传性状。 基因工程培育抗虫棉的简要过程：苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因导入棉花细胞 抗虫棉花组织培育+ 载 体1.1 DNA重组技术的基本工具工具1限制性核酸内切酶“分子手术刀” 1.基因工程中的“分子手术刀”是指 ， 目前有四千种,它们全部提取于 生物。据酶切特点 ，可将其分为两类：一类是切割部位无特异性；另一 类是只能在特定的核苷酸序列上切割，这种特定的核 苷酸序列都是 结构。在基因工程中使用最多是后 一类酶。后
2、一类限制酶在切割部位进行切割时，有错 位切和平切两种。切割时都是切断两个核苷酸之间的 .键,其结果是DNA被截成两段并形成新的末端,新末端 有两种即 和 。2. EcoR限制酶能识别 序列，并在 之间切开。Sma限制酶能识别 。 序列，并在 之间切开。 3. CCAGAATTCAGAGCCCGGAATTGCCGGTCT TAAGTCTCGGGCCTTAACGG 上述DNA片段在EcoR限制酶/Sma限制酶切割后 分别是 段和 段.GAATTC G和ACCCGGG G和C限制酶回文微磷酸二酯 平末端 黏性末端21黏性末端的形成平末端的形成中轴线平末端Sma限制酶Sma 限制酶工具2DNA连接酶“
3、分子缝合针”1.“分子缝合针” 即 ，据其来源不同可分为两类，一类是来自大肠杆菌的 。连接酶，另一类则是来自 的T4 DNA连接酶 。 两者都是将 链DNA片段“缝合”起来，恢复被酶切开的两个核苷酸之间的 键。但它们的作用有差别： 连接酶只能作用于黏性末端，而 连接酶两种末端都起作用。 双磷酸二酯 DNA连接酶Ecoli DNAT4噬菌体限制酶Ecoli DNAEcoli DNAT4 DNA2.DNA连接酶与DNA聚合酶的作用有何差别？DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 。DNA连接酶 作用部位DNA连接酶
4、作用部位氢键连接 不需要酶磷酸二酯键 AC磷酸二酯键AATTCGGCATAC TATCGTACGATAGGTACTTAAATAGCATGCTATCCATG GCCGTATG目的基因 TCCTAG AGGATCTTAAAATTCCATAC GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG GGTATG P6 重组DNA分子的模拟操作AATTCGGCATAC TATCGTACGATAGGTACTTAAATAGCATGCTATCCATG目的基因 TCCTAG AGGATCTTAAAATTCCATAC GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGTATG GCCGTATG工具3 基因进入受体细胞的载体 “分子运输车”1.在基因工程中使用的载体除来自细菌的 。 外，还有 、 等，它们的本质都是 。2.作为运送目的基因的载体，必须具备哪些条件？质粒人噬菌体的衍生物动植物病毒双链DNAa.具有多个 ，供 插入其中。b.能在宿主细胞中 或整合到宿主DNA 上 。c.具有某些特殊的 ，便于鉴定、筛选。限制酶切割位点目的基因自我复制 同步复制标记基因复制原点目的基因插入位点氨苄青霉素 抗性基因
