医疗机构消毒监督与检测

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1、*1医疗机构消毒效果医疗机构消毒效果 监测监测农垦嘉荫卫生监督所 滕启宏 2010.8*2l医疗机构消毒是预防院内感染的重要措施之一 ，消毒效果的监测是评价其消毒设备运转是否 正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理 、消毒效果是否达标的唯一手段，因而在医院 消毒、灭菌工作中必不可少。l医疗机构消毒效果监测时需遵循以下原则：监 测人员需经过专业培训，掌握一定的消毒知识 ，熟悉消毒设备和药剂性能，具备熟练的检验 技能；选择合理的采样时间(消毒后、使用前)；遵循严格的无菌操作。*3l检测方法和判定标准：l消毒技术规范2002年版 。*4l一、压力蒸汽灭菌效果监测l（1） 化学监测法：l1）化学指示

2、卡(管)监测方法: 将既能指示蒸汽温度，又能指示温 度持续时间的化学指示管(卡) 放入大包和难以消毒部位的物品包 中央，经一个灭菌周期后，取出指示管(卡)，根据其颜色及性状 的改变判断是否达到灭菌条件。l2）化学指示胶带监测法: 将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品 包外，经一个灭菌周期后，观察其颜色的改变，以指示是否经过 灭菌处理l3）对预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌，每日进行一次B-D试验。l4）结果判定: 检测时，所放置的指示管(卡)、胶带的性状或颜色 均变至规定的条件，判为灭菌合格；若其中之一未达到规定的条 件，则灭菌过程不合格。l5）注意事项: 监测所用化学指示物须经卫生部批准，并在有效

3、期 内使用。l（2） 生物监测法（略）*5l二、紫外线消毒效果的监测l 紫外线灯管辐照度值的测定l（1）检测方法: l紫外线辐照计测定法：开启紫外线灯 5min 后，将测定波长为 253.7nm 的紫外 线辐照计探头置于被检紫外线灯下垂直 距离 1m 的中央处，待仪表稳定后，所示 数据即为该紫外线灯管的辐照度值。*6l（2）结果判定: 普通 30w 直管型紫外线 灯，新灯辐照强度 90W/cm2为合格； 使用中紫外线灯辐照强度70W/cm2 为 合格；30W 高强度紫外线新灯的辐照强 度180W/cm2 为合格。l（3）注意事项: 测定时电压 220VV， 温度 2025，相对湿度60，紫 外

4、线辐照计必须在计量部门检定的有效 期内使用；指示卡应获得卫生许可批件 ，并在有效期内使用。*7UV-2000UV-2000紫外辐照度计紫外辐照度计*8l三、手和皮肤黏膜消毒效果监测l采样时间:在消毒后立即采样。l采样方法：l(1) 手的采样:被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的 无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返 涂擦 2 次(一只手涂擦面积约 30cm2)，并随之转动采样 棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。l(2) 皮肤粘膜采样:用 5cm5cm 的标准灭菌规格板，放 在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的 棉

5、拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次， 并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投 入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送 检。不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。*9*10l 检测方法l细菌总数检测:将采样管在混匀器上振荡20s或 用力振打 80 次，用无菌吸管吸取 1.0ml 待检样 品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿， 内加入已溶化的 4548 的营养琼脂 15ml 18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置 361温箱培养 48h，计数菌落数。l采样结果计算方法：l 细菌总数(cfu/cm2)（平板上菌落数 稀释 倍数）/采样面积(cm2)l致病

6、菌检测：参考消毒技术规范3.17.15。l *11*12l四、物品和环境表面消毒效果的 监测l采样时间:在消毒处理后进行采样。l采样方法:用 5cm5cm 的标准灭菌规格板，放 在被检物体表面，采样面积100cm2，连续采 样 4 个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的 棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后， 将棉拭子投入 10ml含相应中和剂的无菌洗脱液 试管内，立即送检。l门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采 样。*13*14l检测方法l细菌总数检测:检测方法按手和皮肤黏膜消毒效果监测执行。小型物体表面的结 果计算，用 cfu/件表示。l

7、致病菌的检测：请参阅消毒技术规范 2002版3.17.15。*15l注意事项l（1）送检时间不得超过 6h，若样品保存 于 04，则不得超过24h。l（2）被采样本表面积100cm2取全部表 面；被采样本表面积100cm2，取 100cm2。l（3）若消毒因子为化学消毒剂，采样液 中应加入相应中和剂。*16l 结果判定l、类区域：细菌总数5cfu/cm2，并 未检出致病菌为消毒合格。l类区域细菌：总数10cfu/cm2，并未检 出致病菌为消毒合格。l类区域细菌：总数15cfu/cm2，并未检 出致病菌为消毒合格。l母婴同室、早产儿室、婴儿室、 新生儿 室及儿科病房的物体表面不得检出沙门 菌。*

8、17为什么使用中和剂？为什么使用中和剂？l 中和剂：在微生物杀灭试验中，用以消除试验 微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留 的消毒剂，使其失去对微生物抑制和杀灭作用的 试剂。l 对消毒效果进行监测时，在抽样的同时会将连 同残余消毒剂一起被采集到样品中并可能被携带 到培养基或检验体系内，会对未被杀死的残存细 菌生长产生影响，使得存活细菌检不出，导致消 毒效果高于实际效果或灭菌效果出现假阴性。所 以，在对消毒剂杀菌效果进行监测时，必须首先 设法去除残余消毒剂，使残存细菌脱离其影响， 获得正常的复苏生长条件，以便有效的检验。 *18l无菌检验用洗脱液：l 吐温80 1gl 蛋白胨 10gl 氯

9、化钠 8.5gl 蒸馏水 1000mll将各成分加入到1000ml 0.03mol/LPBS液 中，加热溶解后调PH至7.27.4，于 121压力蒸汽灭菌20min备用。lPBS即磷酸盐缓冲液。 *19l0.03mol/L PBS缓冲液：无水磷酸氢二钠 2.83g磷酸二氢钾 1.36g蒸馏水 加至 1000ml将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，待完 全溶解后，调 pH至 7.27.4；注意：去结晶水*20去结晶水问题去结晶水问题l磷酸二氢（ Na2HPO412H2O）142 142 + 1218=2.83XX=7.13g（每1000mL）*21去结晶水问题去结晶水问题l硫代硫酸钠（ Na

10、2S2O35H2O）158 158 + 518=5 XX=7.85g（每1000mL）*22l含相应中和剂的洗脱液种类：l1、卵磷脂 1gl 吐温80 1gl 无菌洗脱液 加至100mll此中和剂用于中和75%乙醇、氯已定、苯扎溴 铵。l2、卵磷脂 1gl 吐温80 1gl 甘氨酸 0.5gl 无菌洗脱液 加至100mll此中和剂用于中和2%戊二醛。*23l3、卵磷脂 1gl 吐温80 1gl 硫代硫酸钠 0.5gl 无菌洗脱液 加至100mll此中和剂用于中和0.5%碘伏。l4、卵磷脂 0.5gl 吐温80 2gl 硫代硫酸钠 0.5gl 无菌洗脱液 加至100mll此中和剂用于中和双链季铵

11、盐消毒剂和其他复 方消毒剂。*24l5、吐温80 0.3gl 硫代硫酸钠 0.5gl 无菌洗脱液 加至100mll此中和剂用于中和单方含氯消毒剂和过氧化物 消毒剂（如过氧乙酸、过氧化氢）。l以上含相应中和剂的洗脱液都要调PH至7.2 7.4，于121压力蒸汽灭菌20min备用。F保存条件和时间：4冰箱半年，常温一个月 （出现混浊、结晶、长菌等应放弃）。*25l五、空气消毒效果的监测l采样时间:在消毒处理后、操作前进行采样。l采样方法：l平板暴露法l(1) 布点方法:室内面积30m2，设内、中、外对 角线3点，内、外点布点部位距墙壁1m处；室 内面积30m2，设 4 角及中央 5 点，4 角的布

12、 点部位距墙壁 1m 处。l(2) 采样方法:将普通营养琼脂平板(直径为 9cm) 放在室内各采样点处，采样高度为距地面 1.5m 采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露 5min，盖好立即送检。*26*27l检测方法：将送检的平板置37温箱培 养48h，计数菌落数，并分离致病菌。l平板暴露法结果计算公式：l细菌总数（cfu/m3）=50000N/ATl式中A为平板面积（cm2）；T为平板暴 露时间（min）；N为平均菌落数（cfu） 。l注意事项l采样前，关好门、窗，在无人走动的情 况下，静止10min 进行采样。公式说明公式说明l细菌总数（cfu/m3） =N100/A5/T1000/10

13、l=50000N/ATl这是个经验公式，是基于5分钟内在100cm2 培养基上降落的细菌数相当于10升空气中 含有的细菌数得出的。*28*29l结果判定l类区域：细菌总数10cfu/m3(或0.2cfu/ 平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性 链球菌为消毒合格；l类区域：细菌总数200cfu/m3(或4cfu/ 平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性 链球菌为消毒合格；l类区域：细菌总数500cfu/m3(或10cfu/ 平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性 链球菌为消毒合格。*30v撞击法：v使用撞击式空气微生物采样器采样，由6层孔 径不一的撞击器组合成一体，采样时空气中的 活性粒子通过各层筛

14、孔由大至小有规律地分别 撞击在各层平板上。不仅能测得空气中带菌粒 子浓度，还能测出其大小分布情况；v仪器组成：采样器（主体）、抽气泵、流量计 及平皿等部件；v选择采样器原则：捕获率高；性能稳定、使用 方便、易消毒；噪声低；*31*32六、消毒剂有效成分检测六、消毒剂有效成分检测l一、戊二醛含量的测定l试剂：l1、6.5%三乙醇胺溶液。l2、0.04%溴酚蓝乙醇溶液。l3、盐酸羟胺中性溶液：17.5g盐酸羟胺加水 75ml溶解，用异丙醇稀释至500ml，摇匀，加 0.04%溴酚蓝乙醇溶液15ml，用6.5%三乙醇胺 溶液滴定至溶液显蓝绿色（PH4.2）。l4、0.25mol/L硫酸标准溶液。*33l操作：l向250ml碘量瓶中精确加入戊二醛消毒剂 10.0ml，精确加入6.5%三乙醇胺溶液 20.0ml及盐酸羟胺中性溶液25ml，摇匀 ，静置反应1小时后，用0.25mol/L硫酸标 准溶液滴定至溶液显蓝绿色（PH4.2）， 记录用去的硫酸溶液总量。同时，以不 含戊二醛的三乙醇胺、盐酸羟胺中性溶 液重复上述操作（空白对照），重复测3 次，取均值进行以下计算。*34l由于1mol/L硫酸标准溶液1ml相当于 0.1001g戊二醛，故可按下式计算戊二醛 含量：l戊二醛含量 100%l式中：C为硫酸标准溶液物质的量浓度（ mol/L）；V1和V2分别为空白和样