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1、?,? ?反相高效液相色谱法同时测定人血清 中地尔硫草及卡马西平浓度金克宁张本全饶度宁?南 昌铁路 中心医院南昌? ? ? ?本文采用反相高效液相色谱法,以安定为 内标,同时侧定血清 中卡马西平? ?和地尔硫草? ?的浓度。用? ? ?产卜一? ? ,? ? ?, 。色谱柱,甲醇一?为? ?的磷酸盐缓冲液?内含? ?二乙胺? 一? ? ?八?为流动相,紫外检测波长为? ?两种浓度? ?、?昭?而?的平均回收率及其日内精密度? ? 分别为?、? ? 及?、?。?两种浓度?、?耐?的平均回收率及其日内? ?分别为? ?、? ? 及?、?。本法较灵敏、准确、简单?可用于两药合用时血药浓度及药动学变化
2、的研究。关锐词?卡马西平地尔硫草? ?卡马西平? ? ? ? ? ?,? ? ?是一种三环类抗惊厥剂,现已广泛用 于神经科临床,合并用药、药物相互作用及其毒性反应亦日趋增多。地尔硫草? ? ? ?,?是一种新型的钙通道阻滞剂,在临床已引起广泛的重视。有文献报道,? ?与?合用,可使毒副反应 增加。为了探讨两药合用 时各自血药浓度和药动学参数的变化,研究了同时测 定? ? 及?血清药物浓度的方法。? ?和?各自的高效液 相 色谱法都有文献报道?一”,但同时测定两药 的血药浓度尚未见报道。本文采用反相高效液相色谱法分离,内标法定量同时测定两药血药浓度,样品提取一次完成,操作简便,回收率稳定,重现性
3、好。材料和方法一、药品与试剂盐酸地尔硫草?由上海延安制药厂提供。安定及? ?化学对照 品?均 由中国药品生 物制品检定所提供。甲醇?分析纯,经重蒸馏。水溶液均由二次重蒸馏水配制。正己烷、氯仿等其他试剂均为分析纯。二、实验仪器美国? ? ?公司? 仪,配有? ?型紫外检测器,?型进样阀,? ?泵以及上海计算技术研究所生产的?一?色谱数据处理机?一? ?旋涡混合器,上海医科大学仪器厂?一? ?超声波清洗器,上海超声波仪器厂。三、色谱亲件色谱柱?林一? ? ? ? ?。柱 ? ? ? ? ? ?,? ? ?公司产?流动相?甲醇一磷酸盐 缓 冲 液? ? ? ?,内含?的二乙胺,使用前超声脱气? ?检
4、测波长?流量?,衰减?。四、样品处理取含有? ?和?的 人血? ?,静置?戎本一一? 一一洲声“?一 ? ?凡 八?子一几一一喃石?图?空白血清?和样品血 清? ?的? ?色谱图?卡马西平?内标?地尔硫草?,离心? ?,吸取上层血清? ?,置? ?离心管 中,加入碳 酸钠 缓 冲液?协?,混 匀后加入正己烷一氯仿?内含? 异 丙 醇? 一? ? ?的萃取液? ?内标药物分析杂志物安定含量为?林?。用旋涡混合器提取?,离心? ?。取出上 层有机相? ?移入另一容器,? ?下空气吹干,残渣用?流动相 充分溶解,过滤? ?件?,取滤液?川进样 测定。内标物安定及? ? 和?的保留时间分别为? ?、?
5、、?见图?。五、标准曲线取空白血清?份,分别加入?标准 液?和? ? 标准液? ?,使?浓度分别为?、?、?、? ?、?、? ?浓度 分别为?、?、?、? ?、?、?昭? ?,按照样品处理项下操作,以浓度为纵坐标,样品峰面积与内标峰面积的比值为横坐标,进行线性回归处理。结果一、线性关系及最低检测限?和。?其浓度分别在?一? ?以及? ? 一?阳?范围 内,均具有良好的线性关 系。?的标 准 曲线回归方程 为? ?一? ? ?,r =0.9961,最低检测限为10n g/ml( S /N一2)。CB z的标准曲线回归方程为:Y=4.4.703X一0.48 52,r =0.9985。最低检测限为0
6、.0 5昭/m l。二、回收率及精密度血清D z和CBz日内回收率及精密度:取D Z为100ng/而、 CBz为5林g/ml以及D z为2 0 0 ng/而、 CB z为10陀/ml的两种血清样 品各5份,同一日内按样品处理项下操作,测定其含量, Dz平均回收率分别为10 0.2%、9 9.9%;日内精 密度R sD分 别 为2.7%、3.7%。CB z的平均回收率为1 01.3%、1 01.8%;日内精密度R SD分别为0.7%、1.1%。血清D z和CB z日间回收率及精密度:取上述两种浓度血清的样品各5份,在4日中测定结果, Dz平均回收率分别为 9 7.8%、9 7.9%;日间精密 度
7、R SD分 别为5.8%、6.1%。CBz的平均回收率分 别为9 9.7%、1 0 0.6%;日间精密度R SD分别为4.3%、5.0%。讨论一、流动相的选择据文献报道”, Dz的保留时间随甲醇的比例减少而延长,且峰形变宽,灵敏度下降。为了使cB z、 Dz及内标物安定得到很好的分离,试验了流动相中甲醇含量对CBz、Dz及内标物安定的分离及色谱峰形的影 响。当甲醇比例大于95写时,保留时间过短,分 离效果 不好。考虑到两种药物及内标物的保留时间、分离度、分辨率及峰形等诸因素,流动相选择甲醇一磷酸盐缓冲液(P H6.84 )一7 0:3 0较 为适宜。二、提取亲件的选择由于D z和cBz都属弱碱
8、性药物,故在提取前碱化血样,使药物游离,可增大被提物 在有机相中的溶解度,有利于提高回收率。CBz和D z的极性不同,在有机溶剂中的溶解度也不一样,我们试验了氯仿一异 丙醇一9 5,5、正己烷一异丙醉一9 5:5等提取液均不能满意地将两药都提取出来。最后采用复合溶媒正己烷一氯仿(内含5%异丙醉)一6 0:4 0,结果满意。参考文献 1Bro dieMJa ndMaeP he eG JA.Calba叮甘比eP毗n eur ot o石eityPre ciP it at曰by di lt从u兑n. BrMe dJ.19 86, 292:11 70一11712KabraPM,St affor dBEa
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15、LC,usl ngdlazePama si n t e rnals加L n da rdi s代p or de d.Ana i y tic alc ol ul n no fB心nd a件k Cl。wa s11涨月.T hemobi leP has ewa seo n si ste dO fam x tu reO fmeth an ol一P ho sP hat e buffer con-切jnjng0.04%由e由yt a m加e(70:30,v /v ).Tbe320n mUVde te cto rwa ss ele ct曰. within一血yP re ci sio n(RsD)a ndre C Overie so ftwod i fferentcBzeonc entration(5, 10昭/ml)were0.71%, 1.07%a nd100.06%一101.78%,r e spectively.T heRSDan dre c
