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1、CAT#:80501-2 低温运输，-20保存 CAT#:80501-2 低温运输，-20保存 pIRES2-EGFP 载体pIRES2-EGFP 载体 克必隆系列克必隆系列使用手册 V1.1使用手册 V1.1北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区学院南路 12 号北师大留学生创业园 57 号楼 301 室 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区学院南路 12 号北师大留学生创业园 57 号楼 301 室 QQ:944823743，449730601（销售） ，948393554（技术） ，QQ:944823743，449730601（销售） ，948393554（技术） ， 电话： 01
2、0-80638853， 010-62200278 （销售） ， 15811350851 （技术） ， 电话： 010-80638853， 010-62200278 （销售） ， 15811350851 （技术） ， 产品及特点产品及特点本产品是 pIRES-EGFP 的替代产品，用途基本相同。除了其 EGFP 信号更强外，还有下列特点： 1. 含真核原核两用 Neor/Kanr cassette，由 SV40 early 启动子，Tn5 kan抗性基因（含自身启动子）和 herpes simplex 病毒 thymidine kinase基因的 polyA 加尾信号组成， 故既可用于 G418
3、 筛选稳定转化的真核细胞，也可用卡拉霉素筛选含此结构的E. coli。 2. 用于克隆外源基因的多克隆位点（Multiple cloning site，MCS)。 3. PCMV IE promoter 它使后面的外源基因和 EGFP 基因组成型表达。 4. 允许一条 mRNA 分子上的两个编码基因得到翻译的人脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus ,ECMV)核糖体内部进入位点(internal ribosome entry site, IRES)。 5. 使用增强型绿色荧光蛋白基因 EGFP，可用于流式细胞筛选。 6. 使 mRNA 分子加上 polyA 尾巴的
4、 SV40 polyA 信号区。 7. 含 SV40 和 pUC 复制启始位点，分别用于在哺乳动物细胞中（需含 SV40 T 抗原）和大肠杆菌中复制。还含 f1 复制启始位点，用于制备单链 DNA。规格及成分规格及成分成份 2 ug 包装 (CAT#:80501-2) 载体 DNA 2 ug 使用手册1.01 份 运输及保存运输及保存低温运输，-20保存，有效期一年。 质粒图谱及单酶切位点质粒图谱及单酶切位点单切酶 位点 单切酶 位点 Ase I 7 Nde I 234 Nhe I 591 Bgl II 609 Xho I 613 Sac I 620 EcoR I 629 Pst I 638
5、Sal I 639 Sac II 652 Sma I 658 BamH I 660 Pml I 983 Not I 1976 Xba I 1986 Hpa I 2095 Afl II 2214 Stu I 3153 Cla I 3172 Nar I 3332 Fsp I 3434 使用手册使用手册本产品的转化，质粒提取和转染跟其他质粒没有任何区别，相关方法可以从分子克隆手册等经典参考书中寻找，因篇幅关系，不在此赘述。 MCS位点MCS位点Nhe I Bgl II Sac I 591 GCTAGCGCTA CCGGACTCAG ATCTCGAGCT CAAGCTTCGA CGATCGCGAT G
6、GCCTGAGTC TAGAGCTCGA GTTCGAAGCT Eco47 III Xho I Hind III EcoR I Sal I Sac II BamH I 631 ATTCTGCAGT CGACGGTACC GCGGGCCCGG GATCC TAAGACGTCA GCTGCCATGG CGCCCGGGCC CTAGG Pst I Kpn I Sma I 注：上面标出的位点中，Hind III 和 Kpn I 并非单酶切位点。 DNA序列DNA序列重要序列及其在质粒 中的位置 重要序列及其在质粒 中的位置 CAG enhancer (65352) CMV 早期启动子 (10562)
7、CMV fwd 引物 (519539) CMV 启动子 (520589) IRES (6661250) EGFP N 引物 (13201299) EGFP 基因 (12541970) EGFP C 引物 (19071928) f1 origin (26622356) Amp 抗性基因启动子 (27412769) SV40 enhancer (30562841) SV40 启动子 (28533121) SV40 origin (30203097) SV40 pro F 引物 (30823101) Neomycin 抗性基因 (32073995) TK PolyA 终止子 (41734442) p
8、BR322 origin (45905209) 1 TAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCG 61 CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATT 121 GACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCA 181 ATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCC 241 AAGTACGCCCCCTAT
9、TGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTA 301 CATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTAC 361 CATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGG 421 ATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACG 481 GGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGG
10、CGTGT 541 ACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATCCGCTAGCGCTA 601 CCGGACTCAGATCTCGAGCTCAAGCTTCGAATTCTGCAGTCGACGGTACCGCGGGCCCGG 661 GATCCGCCCCTCTCCCTCCCCCCCCCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGG 721 CCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTTTCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAG 781 GGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGAC
11、GAGCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGC 841 CAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGAAGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTG 901 AAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGGAACCCCCCACCTGGCGACAG 961 GTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAAAGGCGGCACAACCCCA 1021 GTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTCCTCAAGCGTATT 1081 CAA
12、CAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGATCTGGGGCC 1141 TCGGTGCACATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCCCGAA 1201 CCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGTGA 1261 GCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACG 1321 TAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGG
13、GCGATGCCACCTACGGCAAGC 1381 TGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGA 1441 CCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACG 1501 ACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGG 1561 ACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACC 1621 GCATCGAGC
14、TGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGG 1681 AGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCA 1741 AGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACT 1801 ACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGA 1861 GCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATC
15、ACATGGTCCTGCTGG 1921 AGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAAGCGGCC 1981 GCGACTCTAGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAA 2041 CCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTT 2101 GTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAA 2161 AGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTAAGG 2221 CGTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCT 2281 CATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCG 2341 AGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAG
