《实验一纸层析法分离鉴定氨基酸》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验一纸层析法分离鉴定氨基酸（18页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验一实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法分离鉴定氨基酸v通过实验，掌握纸层析的基本操作技能。v加深对分配层析原理的理解。【一、实验目的】【一、实验目的】 Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose
2、 Pty Ltd.118【二、实验【二、实验原理原理】层析技术层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相固定相，另一相流过此相称作流动相流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。可分离物质可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile
3、5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.218vv固定相固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移起分离作用而不随层析过程移动动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。vv流动相流动相 在层析过程因其本身流动而推动样品移推动样品移动动的物质。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Create
4、d with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.318名称操作方式固定相流动动相分离依据分配层析纸层析薄层层析液体液体 溶解度离子交换层析 离子交换柱层析固体液体带电性静电引力吸附层析吸附薄层层析气体吸附层析固体液体 气体吸附力亲和层析酶与底物抗原与抗体固体液体 配体专一性凝胶层析 凝胶过滤固体液体 分子大小层析的分类层析的分类Evaluation only.Evaluation only
5、. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.418分配层析分配层析：是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术。分配系数 =溶质在固定相的溶解度溶质在流动相的溶解度Evaluation only.Evaluation o
6、nly. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.518纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配分配层析层析：纸纤维上的 OH 基具有亲水性，所以能吸附吸附一层水水作为作为固定相固定相，而通常把有机有机溶剂溶剂作为流动相流动相。流动相流经支持物时与固定
7、相间连续抽提，使物质在两相间不断地分配而得到分离。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.618v 溶质在滤纸上的移动速率用f（比移）值来 表示： 展层层斑点中心与原点间的距离Rf
8、 = -溶剂前沿与原点之间的距离Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.718Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspos
9、e.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.818影响影响R Rf f值的因素值的因素（多种）（多种）vv 物质结构与极性物质结构与极性 物质的极性大小决定了物质在水 和有机溶剂之间的分配情况。pHpH值值 展层剂的pH影响被分离物质的极性基团的解离形式。层析滤纸的质量层析滤纸的质量
10、层析用滤纸要质地均匀，紧密， 有一定的机械强度，并含杂质少。国产新华滤纸可用于一般的纸层析。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.918【三、器材与试剂】【三、器材与试剂】器材：
11、器材：1 1、层析缸、层析缸 2 2、毛细管、毛细管 3 3、喷雾器、喷雾器 4 4、培养皿、培养皿 5 5、层析滤纸、层析滤纸( (新华一号新华一号) )试剂：试剂：1 1、扩展剂、扩展剂 （正丁醇（正丁醇：水水：冰醋酸冰醋酸= 4= 4：3 3：1 1）2 2、显色剂、显色剂 0.1 0.1茚三酮正丁醇溶液。茚三酮正丁醇溶液。3 3、氨基酸溶液、氨基酸溶液0.50.5的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液及它们的混合液 Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides f
12、or .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.10181 1、层析滤纸准备：、层析滤纸准备：取层析滤纸取层析滤纸( (长长20 cm20 cm、宽、宽15 cm)15 cm)一张一张。在纸的一端距边缘。在纸的一端距边缘2 23 cm3 cm处用铅笔划一条直线，在此直处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔线上每
13、间隔2cm2cm作一记号。作一记号。2 2、点样：、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5 5个位置上个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 3 mmmm。【四、实验步骤】【四、实验步骤】Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.
14、0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.11183 3、扩展、扩展 ：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将滤用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线样线1 cm1 cm）。待溶剂上升约）。待溶剂上升约15 cm15 cm时即取出滤纸，铅笔描出时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。4 4、显色：、显色：
15、用喷雾器均匀喷上用喷雾器均匀喷上0 0。1 1茚三酮正丁醇溶液，然茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤后置烘箱中烘烤5 5分钟分钟(100(100) )或用热风吹干即可显出各层析斑或用热风吹干即可显出各层析斑点。点。 5 5、计算、计算R Rf f值值Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-
16、2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.1218【五、实验结果与分析】【五、实验结果与分析】【六、注意事项】【六、注意事项】【七、思考题】【七、思考题】1 1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？2 2、R Rf f值的含义、影响因素？值的含义、影响因素？ 下次实验 ：实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应值值 日日 生生 值值 日日Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides
