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1、月经期的血清各激素水平及抵抗素进行检测，结果发现P C O S 肥胖者与非肥胖者的抵抗素水平有显著性差异，而P C O S 非肥胖者与正常对照组之间无差异，提示当妇女B M I 2 5 k g m 2 时会产生更多的抵抗素并分泌到血液循环中，从而表现出抵抗素m R N A 和循环中蛋白质水平的强相关性，而在非肥胖性P C O s中抵抗索水平与胰岛素抵抗不相关。同样的研究在离体后的脂肪细胞中未见B M I 与抵抗素m R N A 水平有相关性，可能与分离过程中对基因表达的影响等因素有关。在B M I 2 S k g m 2 组，血糖胰岛素比值明显降低，双变异相关性分析提示：抵抗素水平与B M I
2、 、血糖、胰岛素浓度呈正相关，与血糖胰岛素比值呈负相关。困此，抵抗素与肥胖相关的参数有明显的相关性。在本研究中我们发现，F E T 的： C O S 肥胖妇女( B I I 2 4 k g , 铲) 的血清抵抗素水平明显高于P C O S 非肥胖组( B M I 2 4 k g , , m z ) 和对照组，I ? C O S 非肥胖组与对照组没有差异，卵泡液抵抗素水平在三组间无差异，而且，8 2 例研究对象的整体血清抵抗素水平明显高于卵泡液内抵抗素水平。这些结果与上面的各项报告是一致的。因此，P C O S 患者的抵抗素水平与肥胖是相关的，抵抗素的水平可以作为P C O S 表现型的判定指标
3、之一。本研究中未发现P C O S 孕与未孕妇女的卵泡液抵抗素水平有差异。三组的获卵数、卵裂数和受精率有显著差异( P 2 4 k g m 2 定义为肥胖。血压：间隔3 0 分钟测量两次取平均值。所有研究对象问无血缘关系。均为山东汉族女性。二、方法1 基因多态检测：山东省立医院中心实验室全血D N A 提取试剂盒提取基因组D N A 。目的片段扩增：( 1 ) P c R 引物序列参照文献设计，上游引物：5 一C A T C A A A C T G T G C C A T r G C 一3 ，下游引物：5 一G I T T G G G G G 从A T G AC , C A 二G C 一3 (
4、 引物合成和荧光标记由上海生物工程公司合成) 。( 2 ) P C R 反应体系为2 0 t l l ：包含1xP C RB u f f e r 、1 5 n m a o l LM f + 、2 0 0 p m o l Ld h q P 、各2 5 0 1 a m o l L 上下游引物、0 5 UH o t S t a r t T a q 酶、5 0 1 0 0 n g 基因组D N A 、补足水至2 0 t t l 。A B I9 7 0 0 型P C R 扩增仪进行目的基因扩增。( 3 )循环条件：预变性9 5 q c1 2 m i n ；变性9 4 3 0 s ，退火5 6 3 0 s
5、 ，延伸7 2 。C3 0 s ，共3 0 循环；最后7 c 终末延伸4 5 m i n 。( 4 ) 毛细管电泳：P C R 结束后，取P C R 产物o 5 t a 与o 5 m 分子量M a r k e r 、9 t a 去离子甲酰 胺混合，振荡混匀，离心后置于P C R 仪上9 5 q C 变性1 0 m i n ，迅速置于冰上放置5 m i n ，按照A B IP r i s m3 1 0 0 一A v a n t 遗传分析仪操作说明做毛细管电泳，G e n e S c a n3 7 软件分析数据。2 内分泌测定、血脂分析、S H B G 测定：内分泌、胰岛素测定采用化学发光法，使用
6、B E C K M A N 公司的A c c e s sl m m u n o a s s a yS y s t e m 州5 学发光测定仪，严格按照宁波海尔施进出口有限公司试剂盒的说明来测定，组间及组内差异均小于5 。血脂分析试剂用O l y m p u s 公司专用试剂，使用O b a n p u s 公司A U 6 4 0生化测定仪测定。S H B G 测定试剂盒购白美国D S L 公司，使用科大创新股份有限公司G C 2 9 1 1 7 放射计数器放免法测定。3 葡萄糖耐量试验( o r a ld u c o s et o l e r a n c et e s t ，O G T r )
7、 和胰岛素释放试验( i n s u l i nr e l e a s et e s t ，I R T ) ：在试验前3 天正常饮食，试验前一天晚8 时后禁食，当日早8 时1 3 服葡萄糖水( 7 5 9 葡萄糖溶于2 5 0 3 0 0 m l 水中) ，口服葡萄糖前和口服葡萄糖后3 0 m i n 、6 0 m i n 、1 2 0 m i n 、1 8 0 r a i n 分别抽取静脉血测定葡萄糖及胰岛素的浓度。葡萄糖测定用氧化酶法，胰岛素测定用化学发光法。计算血糖和胰岛素曲线下的面积( A U C G ，A U C I ) ( 葡萄糖和胰岛索曲线下的面积= 0 2 5x 空腹值+ 0
8、，7 5 6 0 值+ o 5 1 2 0 值) 。三、统计学方法计量资料结果以i s 表示，两组均数比较用单因素方差分析及t 检验分析，方差不齐变量行非参数检验。计数资料采用1 2 检验及精确概率法。采用S P S S l l 0 统计软件进行各数据统汁处理。结果一、山东汉旗妇女中C Y P I l a 基因启动子( t t t t a ) 1 1 重复多态分布检测了2 4 6 例山东汉族妇女，C Y P l l a 基因启动子( t t t t a ) n 微卫星多态分布共有( t t t t a ) “ 4 、6 、7 、8 、9 、1 0 次重复6 个等位基因，4 4 、6 6 、8
9、8 、9 9 、4 6 、4 7 、4 8 、4 9 、4 1 0 、6 8 、6 1 0 、8 9 共1 2 种基因型。整个群体中，等位基因以( t t t t a ) 4 、6 、8 次重复常见，( t t t t a ) 7 、9 、1 0 次重复少见。各等位基因的分布频率分别为0 4 1 8 7 、0 ，8 5 7 7 、O 0 0 8 1 、0 1 5 8 5 、o 0 1 2 2 、o 0 1 2 2 。检测到的基因型以6 6 、4 6 、6 8 、4 4 、4 8 常见，各基因型分布频率分别为：0 4 5 9 3 、0 2 9 2 7 、0 1 0 5 7 、0 0 6 5 0
10、、0 0 4 0 7 ，以8 8 、9 9 、4 1 0 、4 7 、8 9 、4 9 、6 1 0 少见。二、C Y P l l a 基因启动子( 呲t a ) n 微卫星多态与P C O S 的关联P C O S 组C Y P l l a ( t t t t a ) n 微卫星多态分析有6 种基因，重复次数分别是4 ( 2 1 4 b p ) 、6 ( 2 2 4 b p ) 、7( 2 2 9 b p ) 、8 ( 2 3 4 b p ) 、9 ( 2 3 9 b p ) 、1 0 ( 2 4 4 b p ) 。对照组C Y P l l A ( t t t t a ) n 微卫星多态分析
11、有5 种基因，重复次数分别是4 ( 2 1 4 b p ) 、6 ( 2 2 4 b p ) 、7 ( 2 2 9 b p ) 、8 ( 2 3 4 b p ) 、1 0 ( 2 4 4 b p ) ，正常妇女中没有重复次数为9 ( 2 3 9 l , p ) 基因。P C O S 及对照组中各等位基因( 4 R 、6 R 、7 R 、8 R 、9 R 、l o r i ) 的分布频率分别为o 4 3 2 、o 8 5 6 、o ，0 0 8 、o 1 3 6 、o 0 2 4 、o 0 1 6 和o 4 0 5 、o 8 5 9 5 、o 0 0 8 3 、o 1 8 1 8 、o o o
12、o o 、o 0 0 8 3 ，两组比较无显著性差异( P 0 0 5 ) ，见表2 。表1P C O S 组与对照组C Y P I I a 等位基因频率分布盐：f 值23 1 4 。P 值) o 0 51 2 5 例P C O S 患者的基因型分布依次为：6 6 R 、4 6 R 、6 8 R 、4 4 R 、4 8 R 、4 1 0 R 、9 9 R 、4 7 R 、8 9 R 、4 9 R ；1 2 1 例对照组妇女的基因型分布依次为：6 6 R 、4 6 R 、6 8 R 、4 4 R 、4 8 R 、8 8 R 、4 7 R 、6 1 0 R ，两组间各种基因型的分布差异无统计学意义
13、( P 0 ，0 5 ) ，见表3 。表3C Y P l l a 基因型4 R + 和4 R 一与P 0 0 s 患者各种临床特征的比较一8 8 三、C Y P I l a 各等位基因与P C D S 各种特征的比较为了便于比较各种等位基因对P c O s 的影响，我们按照等位基因的不同将1 2 5 例P C O S 患者分为两组，一组为包含( t t t t a ) 4 的纯合子和杂台子个体( 简称4 R + ) ，一组为不含( t t t t a ) 4 的P c o s 个体( 简称4 R 一) ：依次将1 2 5 例P C o S 患者分为6 R + 和6 R 一，8 R + 和8 R
14、 一，比较两组P C O S 患者各种临床特征的异同，包括B M I 、W H R 、血压、L H 、T 、F A I 、I l l 、T G 、C H O 、L D L C 、H L D L C 、A U C C 、A U C I 、窦卵泡数等各项指标，统计结果见表3 、4 、5 。表3 中，4 R + 组的P C O S 患者的血压明显高于4 R 一组的P C O S 患者，统计学分析有显著性差异。表4 中，6 R 一组I C O S 患者O G T r 试验葡萄糖曲线下面积与6 R+ 组P C O S 患者O G T I “ 试验葡萄糖曲线下面积比较，有升高的趋势，6 R + 组P C
15、O S 患者的W H R 明显高于6 R 一组患者的W H R 。表5 中，8 R + 组P C O S 患者W I t R 明显高于8 R 一组P C O S 患者，统计学处理有显著性差异。表4C Y P I I a 基因型6 R + 和6 R 一与1 雕2 0 S 患者各种临床特征的比较四、C Y P l l a 基因启动子( t t t t a ) n 徽卫星多态分布与P C O S 高雄激素血症我们将1 2 5 例P C O s 患者以血清睾酮高低分为高雄激素血症组( T ，5 0 n g d 1 ) 和无高雄激素血症组，1 2 5 例P C O S 妇女中约6 4 的P C O S
16、妇女有高雄激素血症。比较两组间C Y P I l a 基因启动子( t t t t a ) 4 、6 、8 多态分布的情况，见表6 。表6P C O S 高雄激素血症与无高雄激素血症C Y P l l a 基因I t i t l a 】l i t 多态性比较讨论P C O S 发病的家族聚集、P C O S 患者的姐妹的发病风险增加等越来越多的研究证明P c o s 具有一定的遗传学基础。但是从P c o s 的临床表现的多样性提示它可能不是单一基因引起的，可能是多种基因与环境因素共同作用的结果。高雄激素血症是P C O S 的主要特征，椐报道5 0 以上的P C O S 患者存在高雄激素血症，P C O S 的高雄激素血症主要来源于卵巢生长卵泡的卵泡膜细胞层，已经证明，在体外与正常妇女的卵泡膜细胞相比较，P C O S
