《波动性高浓度葡萄糖对huvecs粘附分子表达及no分泌的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《波动性高浓度葡萄糖对huvecs粘附分子表达及no分泌的影响（40页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、缩略语D MG l uP B SH U V E C sF B SR P C RG A P D HV C A M 】l C A M 】N Ob pc D N A矾T PE BE D T At u R N AP C RI H C主要缩略英文索引英文全称D i a b e t e sM e l l i t u sG l u c o s eP h o s p h a t eB u f f e rS o l u t i o nH u m a nU m b i l i c a lv e i l lE n d o t h e l i a lC e l l sF e t a lB o v i n eS e r
2、 u mR e v e r s eT r a n s c r i p t i o nP o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o nO l y c e r a l d e h y d e 3 - P h o s p h a t eD e h y d r o g e n a s eV a s c u L a rC e l la d h e s i o nM o l e c u L e - 1I n t e r c e l l u L a rA d h e s i o nM o l e c u L e 1N i t r i cO x i d eB a s eP
3、 a i rC o m p l e m e n t a r yD N AD e o x y nD e o s i d eT r i p h o s p h a t eE m i d i u mB r o m i d eT h y l e n eD i a m i e t e t r a a c e t i cA c i dM e s s e n g e rR i b o n u c l e i cA c i dP o l y m e r m s eC h a i nR e a c t i o nI m m u n o c y t o e h e m c a l3中文译名糖尿病葡萄糖磷酸盐缓冲液
4、人脐静脉内皮细胞胎牛血清逆转录聚合酶链反应三磷酸甘油醛脱氢酶血管细胞粘附分子一l细胞 日J 粘附分子一1一氧化氮碱基对互补D l N A脱氧三磷酸核苷酸溴化乙锭乙二胺四乙酸信使核糖核酸聚合酶链反应免疫细胞化学波动性高浓度葡萄糖对H U V E C s 粘附分子表达及N 0 分泌的影响研究研究生李赞导师刘江华副教授摘要目的对比研究波动性高浓度葡萄糖与恒定性商浓度葡萄糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞粘附分子V c 删l 、I C A M - I 表达及N 0 分泌的影响，从而探讨波动性高血糖在糖尿病慢性血管并发症中的致病机制。方：法从人脐静脉中提取并体外培养人脐静脉内皮细胞，实验分为4 组，分刖加入
5、含刁i 同浓度葡萄糖( 5 5 m m o l f L 、2 0 m m o l L 、5 5 2 0 m m o F L 每8 小时轮换1次) 及甘露醇( 2 0 m m o l L ) 的条件培养液，每间隔8 小时更换新鲜条件培养液一次，一共作用7 天。应用逆转录聚合酶链反应( R T - P C R ) 检测V C 心一1 、I C 姗一l 基因m R N A 的表达，免疫细胞化学检测V C A M l 、I c 脯一l 蛋白表达，硝酸还原酶法检测细胞培养液上清中N O 的含量。结果( i ) 恒定性高浓度葡萄糖( 2 0 m m o l L ) 与波动性高浓度葡萄糖( 5 5 2 0r
6、 e t o o l L ) 作用于人脐静脉内皮细胞7 天后，两组内皮细胞V C A M 一1 与I C A M - l m R N A的表达水平均增高。其中V C A M I m R N A 的表达水平分别为对照组的1 5 1 ( P 1 5 ，提示R N A 无明显降解。( 见下图6 1M12图6 总R N A 电泳图上图中M 代表1 K b 的D N A M a r k e r ，1 、2 代表总R N A2 、葡萄糖浓度的变化对V O I S - - 1 蒯 表达的影响P C R 扩增后的产物经1 8 琼脂糖凝胶电泳，E B 染色后于凝胶图像分析系统摄像，结果见下图7 。V C A M
7、 一1 和G A P D H 扩增片段分别为17 0 b p 和4 2 0 b p ，与理论设计相符。灰度分析结果见表2 、图8 。图7 不同组V C A M - I m R N A 的表达表2内皮细胞V C A M - 1m R N A 的表达( zi S ，n = 3 )T a b l e 2E x p r e s s i o no f V C A M 一1m R N Ab ye n d o t h e l i a lc e l l ( z S ，n = 3 )G r o u p sV C A M 一1 G A P D Hm R N AR a t i o5 5 m Mg l u c o s
8、 e 2 0 m Mg l u c o s e5 5 2 0 m Mg l u c o s e 2 0 r a mm a n n i t o lO 4 1 0 0 1 2O 6 2 0 0 1 5 +O 8 7 0 0 1 7 + 卅0 4 2 0 0 1 7注1 ：+ P 2 5 对心血管豹病死率最高，丽C 铲- F P G 2 5 时心血管疾病的病死率最高，而C V - F P G 1 5 对最低。这一结果更证实了血糖波动可能加重心血管镐变。在前瞻性糟尿病干预治疗研究( D I S ) 中通过多变量分析揭示餐后血糖是糖尿病患者心肌梗死的危险因素，餐后血糖控制的好坏与心血管疾病死亡的危险性相
9、关嗍。以上流行病学研究资料均证实波动性高血糖与糖屎病慢性盎管并发症有十分密切的关系。4 l2 致病机理葡萄糖钳夹实验已成为研究血糖波动与糖尿病血管并发症关系的重要方法。R a f f a e l e 等阿7 1 通过葡萄糖钳夹实验开展了系列研究：( 1 ) 评估血糖与胰岛素在调节正常人与2 型糖尿病人循环中可溶性细胞问粘附分子一1 ( s l C A M - I ) 与可溶性血管细胞粘附分子一l ( s V C A I H - I ) 水平的作用，结果提示急性商血糖在胰岛素缺乏或不足时，可改变血管内皮粘附分子的表达。而且高血糖的这种效应是依赖或部分依籁于减少一氧化氮( N O ) 的生物荦J
10、用度。( 2 ) 通过高葡萄糖钳夹实验造成急性离血糖，引起2 型糖尿病人明显的血流动力学改变，这种改变独立于内源性胰岛素，并可通过谷胱甘肽予以预防，添加L 一精氨酸可使这种改变恢复，提示急性高血糖干扰内源性N o 的生物利用，因丽对心血管产生不良影响。( 3 ) 研究急性高血糖与硝基酪氨酸及平均动脉压( 娜P ) 的关系，显示急性高血糖时硝基酪氨酸与鹏P 都显著增高，表明急性高血糖引起氧化应激，产生活性氧，介导血管内皮功能紊乱。J o s h u a掣8 】通过葡萄糖钳夹实验研究离血糖损伤血管内皮的机制，发现急姓离血糖通过升高二酰甘油及线粒体超氧阴离子的过度表达介导蛋白激酶C ( P K C
11、) 活化，应用BI IP K C 抑制剂L Y 3 3 3 5 3 1 可以预防高血糖引起的依赖内皮的血管舒张功能损伤，继而所致的N 0 的生物利用度下降，避免了内皮功能的紊乱。J u r g e n 等t g t 研究发现急性波动性高血糖可削弱葡萄糖诱导的胰岛素分泌反应，降低胰岛索分泌率，提示糖耐量降低患者胰岛素分泌量减少部分是由于高血糖引起。N a w a n o 掣加峻现慢性高血糖所致葡萄糖毒性可诱导肝脏、脂肪组织胰岛素抵抗，表明高血糖不仅是胰岛素抵抗的结果，而且是使胰岛素敏感性降低的一个重要因素。G o l o v c h e n k o 等】的研究提示高胰岛素血症增强血管紧张素I I
12、 、高血糖及糖基化终来产物诱导血管平滑肌细胞核因子( N F ) 一xB 转录后的活性，参与糖尿病血管并发症的发生、发展。近年来亦大量开展了波动性高血糖与血管内皮功能关系的体外研究。R i S S O 等1 1 2 1 通过检测细胞活力、分析细胞周期、D N A 的片段化、细胞的形态学以及凋亡抑制蛋白B C L - 2 及凋亡相关蛋白B a x 表达的检溅，发现间歇性高浓度葡萄糖较恒定高浓度葡萄糖更易促发培养的人脐静脉内皮细胞凋亡，提示前者较后者对内皮细胞的毒性作用更大。P i c o n i 等【1 的研究证明，间歇性高浓度葡萄糖较恒定高浓度葡萄糖更易通过多聚A I ) P 核糖聚合酶( P A R P ) 途径促进培养的入脐静脉内皮细胞内硝基酪氨酸的形成及提高I C A M - 1 、V C A M - 1 、E - 选择素的表达，介导血管内皮的损伤。而Q u a g li a r o等 | 4 , 1 5 1 的研究提示高浓度葡萄糖，尤其是波动性高血糖可以增加P K C 的表达，改变4 2
