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1、1维胃方对大鼠胃溃疡的疗效及血清白介素 2 影响的研究作者:贺红燕,刘晓伟,肖卫平,张真瑞,彭树灵【摘要 】 目的观察维胃方对血清白介素-2(IL-2)的影响,探讨其治疗胃溃疡的可能机制。方法采用冰醋酸烧灼法制备大鼠胃溃疡模型。经维胃方治疗后测量胃液 pH 值、计算溃疡面积、观察溃疡周围病理组织切片,并采用放射性免疫法检测血清 IL-2 水平。结果从胃黏膜大体观察及病理切片观察,用药组大鼠胃黏膜溃疡愈合良好;与模型组比较,维胃方能恢复胃液 pH 值 (P0.01);用药组大鼠胃黏膜溃疡面积明显小于自愈组(P0.01),其中维胃方中剂量组疗效最好(2.190.26)mm2;与自愈组相比较,维胃方
2、各组可升高血清 IL-2 水平(P0.05) ,维胃方中剂量组(0.7700.038)ng/ml与雷尼替丁组存在着显著性差异(P0.05) 。结论维胃方对实验性胃溃疡具有明显的愈合作用,其作用机制可能与其改善机体细胞免疫功能,调节血清中 IL-2 的水平有关。 【关键词】 维胃方; 胃溃疡; 白介素 2Abstract:ObjectiveTo observe the effect of WWF on serum IL-2 in experimental rats with gastric ulcer and possible 2mechanisms. MethodsThe model rats
3、 with gastric ulcer were prepared by glacial acetic acid. After treating them with WWF, we measured gastric juice pH values, calculated gastric mucosa ulcer areas, observed pathological tissue around ulcer, and detected the level of serum IL-2 by radioactive immunoassay. ResultsFrom general and path
4、ological observation on gastric mucosa,it showed that mucosa of rats in drug groups was in good condition. Compared with model group, WWF could recover the values of PH; Gastric ulcer areas in drug groups was significantly smaller than that of self-healing group (P 0.01), and the effect of WWF group
5、 middle-dose was the best(2.190.26)mm2. Compared with self-healing group, WWF could elevate serum level of IL-2(P0.05),and there was a significant difference between middle-dose WWF group (0.7700.038)ng/mland ranitidine group (P0.05). ConclusionThere is obvious therapeutic effect of WWF on experimen
6、tal gastric ulcer, and the possible mechanism is related to improving cellular immune function and adjusting level of serum IL-2.Key words:Weiweifang prescription; Gastric ulcer; IL-23胃溃疡是临床常见病、多发病,制酸及抗 HP 使溃疡的治愈率大为提高,但溃疡的复发问题仍没有得到根本解决。寻求有效的药物治疗以提高溃疡愈合质量,成为当今医药界研究的热点之一。中医中药在改善全身状况等方面具有自身的优越性,因而受到广泛关
7、注。维胃方是导师刘晓伟教授治疗胃溃疡的经验方,临床上有确切的疗效。IL-2 是目前被证实具有显著的免疫增强作用的一种细胞因子。本研究通过对大鼠胃液 pH 值、溃疡面积、病理组织切片及血清 IL-2 水平的观察,探讨维胃方治疗胃溃疡的作用机制,为中医药的临床运用和开发提供实验依据。1 材料与仪器1.1 动物 SPF 级雄性 Wistar 大鼠 56 只,体重 220260 g,购于南方医科大学实验动物中心。动物合格证号:SCXK 粤2006-0015 号,质量检测单位:广东省实验动物监测所。室温2226安静环境下饲养, 喂以固定的平衡饲料。1.2 药物 维胃方由茯苓、蒲公英、白及、三七组成,药材
8、购于南方医科大学附属南方医院中药房,经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定教研室鉴定。按人和大鼠体表面积系数换算方法,大鼠等用剂量=(人用剂量0.0185) g/ kg。维胃方药物组分低、中、高 3 个剂量,常规煎煮取汁、浓缩、高压灭菌。其中大鼠生药4含量 0.75 g/ml 为中剂量,低剂量和高剂量分别为 0.375 g/ml 和1.5 g/ml。雷尼替丁胶囊按 0.003 g/ml 浓度配置成混悬液。以上药物均保存于 4冰箱中。1.3 试剂 100%冰醋酸( 广东省光华化学厂有限公司,批号20070903);水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司,批号 20060220);雷尼替丁胶囊(广东佛
9、山阿特维斯制药有限公司,批号 0802763);IL-2 放免试剂盒(北京普尔伟业生物科技有限公司提供,批号 20081024)。1.4 仪器低速离心机 LD5-2A 型(北京医用离心机厂); LeicaRM2135 切片机( 德国 Leic 公司); 光学显微镜(Olympus 公司);SN-695B 型放免测量仪(上海日环仪器一厂)。2 方法2.1 分组及给药 按完全随机法分为 7 组,每组 8 只。正常组:自由饮水,进食;模型组、自愈组:冰醋酸致大鼠胃溃疡术后,自由饮水进食;维胃方低、中、高剂量组、雷尼替丁组:冰醋酸致大鼠胃溃疡术后第 4 天开始,分别灌胃低、中、高剂量维胃方药液、雷尼替
10、丁混悬液,1 次 /d,连续 7 d。造模各组术后次日起给予自由饮食。模型组在造模后第 4 天取材,其它各组均在造模后第 115天取材。2.2 造模参照 Takagi 等1的经典造模方法,并加以改进。大鼠造模前 24 h 禁食不禁水。按 3.5 ml/kg 体重腹腔内注射 10%水合氯醛麻醉。仰卧位四肢固定,腹部剃毛、消毒,铺手术孔巾,于剑突下腹中线纵向打开腹腔,手术切口长约 2 cm,将胃轻轻移出腹腔,在胃前壁浆膜面窦体交界处靠胃窦侧用 100%冰醋酸浸泡过的直径为 5 mm 的圆形滤纸压贴 30 s2 次,用生理盐水棉签轻轻抹洗 2 次,然后将胃还纳腹腔,分层缝合腹壁肌肉和皮肤,75%酒精
11、棉球消毒切口及周围。2.3 指标检测2.3.1 血清 IL-2 含量测定 腹主动脉采血约 3ml 于普通负压采血管中,4冰箱中静置待自然凝固收缩后, 以 2 000 r/min 离心10min,分离血清保存于 -20 冰箱。采用放射免疫法测定血清 IL-2 含量,操作按照说明书进行。2.3.2 测量胃液 pH 值 在剑突下偏左剪开腹腔,暴露胃部。结扎贲门,于十二指肠和食管处剪断取出鼠胃,由幽门挤出少量胃液于 pH 试纸上,读取并记录 pH 值。62.3.3 溃疡面积 由幽门处向胃内注入 10%中性福尔马林溶液10 ml,固定 10 min 后沿胃大弯剪开,展平,用游标卡尺测量溃疡面的最大横径及
12、最大纵径,分别记为 d1、 d2。溃疡面积(S)按公式S=d1d21/4 计算( 取 3.14)。2.3.4 胃黏膜病理组织切片制备 以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材,放入 10%中性福尔马林溶液中固定,常规脱水、包蜡、切片、HE 染色后于光学显微镜下观察。2.4 统计学处理 实验数据用(s)表示。多个样本均数比较用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间均数两两比较若方差齐性,用 LSD 法;若方差不齐性,用 Dunnetts T3 方法。以上数据均用 SPSS13.0 统计软件进行分析。显著性水平 P0.05。3 结果3.1 肉眼观察标本正常组:胃黏膜光整完好,呈淡红
13、色,无充血、水肿、糜烂等。模型组:浆膜面造模处有黄色炎性分泌物与周围组织粘连,胃窦处见火山口样溃疡,底部覆盖有黄白苔,部分标本有多个溃疡点或溃面。自愈组:浆膜面充血,与周围有粘连,胃窦区黏膜溃疡愈合不全,可见苍白色瘢痕组织增生。雷尼替丁组:浆膜面少有粘连,胃窦区黏膜溃疡多数基本愈合,表面粗糙色白。维胃方低、高剂量组:部分可见浆膜面粘连,胃窦黏膜可见少数溃7疡点或瘢痕组织增生;维胃方中剂量组:浆膜面少粘连,胃黏膜表面多数已愈合,极少溃疡点或仅见小范围瘢痕增生。3.2 镜下观察病理切片正常组:黏膜层完整,腺细胞排列均匀,黏膜下层、肌层、浆膜层完好。模型组:溃疡处粘膜缺损大,腺体完全被破坏;黏膜下层
14、毛细血管内见血流淤滞,部分毛细血管破裂、出血,粘膜下层、浆膜层见大量炎性细胞浸润。自愈组:部分黏膜缺损达黏膜肌层,再生腺细胞排列紊乱;黏膜下层有炎细胞浸润,见明显血栓。雷尼替丁组:缺损较小,表面见新生上皮细胞及腺细胞,排列致密不整齐;黏膜下层有炎细胞浸润,肌层见瘢痕纤维形成。维胃方各剂量组:维胃方组低、高剂量组可见缺损达腺细胞层,再生腺细胞密度不匀,黏膜下层炎细胞浸润,其中高剂量组腺体细胞增生数量较多,黏膜下血管未见明显病理改变,但仍有炎性细胞浸润; 中剂量组黏膜基本完整,腺体细胞增生数量较多;黏膜下层仅见少量炎性细胞浸润。3.3 胃液 pH 值 模型组和自愈组 pH 值明显高于正常组(P0.
15、05)。维胃方可以促进腺体再生,恢复泌酸功能,其中以低、中剂量组较接近正常组水平, 结果见表 1。3.4 血清 IL-2 含量的比较 各用药组与自愈组的差异有统计学意义(P0.05); 维胃方中剂量与雷尼替丁组的差异有统计学意义(P0.05)结果见表 1。3.5 溃疡面积 各用药组与自愈组溃疡面积的差异均有统计学意义; 维胃方中剂量组与雷尼替丁组存在显著性差异(P0.01),表明维胃方中剂量治疗效果优于雷尼替丁,结果见表 2。表 1 各组胃液 pH 值及血清 IL-2 含量变化分析与模型组比较,P0.05,P0.01;与正常组比较,*P0.05 ,*P0.01;与自愈组比较,#P0.05、#P
16、0.01; 与雷尼替丁比较, P0.05;n=8 表 2 溃疡面积的比较与自愈组比较,P0.05,P0.01;与雷尼替丁组比较,#P0.05,#P0.01;n=84 讨论胃溃疡属于祖国医学中的“胃痛” “吞酸”等范畴。初起多由外感寒邪、饮食所伤、情志不遂等引发,病变较单一,日久多种病因相互作用相互影响,由实转虚或虚实错杂,迁延不愈。临床上胃溃疡以虚实夹杂、寒热并见、气滞血瘀者较为多见。维胃方由茯苓、蒲公英、白及、三七 4 味药组成。白及能收敛止血,消肿生肌, 本草纲目中指出“以此研末日服,能坚敛脏,封填破损,痈肿可消,溃败可托,死肌可去,脓血可洁,有托早生新之妙用也” 。三七可活血化瘀,消肿止痛,茯苓可补益脾胃,蒲公英清热解毒、消痈散结,9本草正义中指出:“蒲公英,其性清凉,治一切疔