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1、姜黄素对饮水砷暴露小鼠肝脏损伤及对肝脏N r f 2 信号通路的影响E f f e c t so fc u r c u m i no na r s e n i c - i n d u c e dl i v e ri n ju r yt h r o u g hd r i n k i n gw a t e ra n dN r f 2s i g n a l i n gp a t h w a yi nm i c e导论文课题起止时间：至Q ! Q 生兰月= 2Q ! ! 生羔2 旦中国医科大学( 辽宁)20 12 年5 月-0t；一魄、，f乒f，(，、00亏，( 溉中国医科大学研究生学位论文独创性声明
2、本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：违破中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规总即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大尊本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师
3、为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：逊 指导教师签名：耋鳖目录摘要中文论著摘要1英文论著摘要5英文缩略语9论文前言1 0刖茜“”“”“”“”“l U材料与方法1 2结果2 l讨论一”一一“3 1结论”3 5本研究创新性的自我评价3 6参考文献3 7附录综述- 4 2致谢5 5个人简历5 6、，一、I ，l l ，卧虱丸中文论著摘要姜黄素对饮水砷暴露小鼠肝脏损伤及对肝脏N r f 2 信号通路的影响目的
4、砷是国际癌症研究组织( I A R C ) 确认的人类致癌物。砷在体内的代谢过程是一种甲基化代谢反应。主要通过氧化还原和一甲基化、二甲基化过程，最终转化为多种甲基化的砷代谢产物，随尿液排出。肝脏是砷代谢、毒性和致癌性的主要靶器官。氧化应激是慢性砷中毒的主要作用机制之一。无机砷暴露产生活性氧群( r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s ，R O S ) 、并且影响体内许多重要的抗氧化酶的活性和G S H等抗氧化物的大量耗竭。为避免R O S 的损害或肝脏纤维化，肝脏具有一系列复杂的抗氧化防御系统。其中最主要的目前被认为是N r f 2 信号通路。该通路最终
5、通过调控I I 相解毒酶和抗氧化酶基因的转录，包括血红素单加氧酶1 ( h e m eo x y g e n a s e - 1 ，H O 1 ) 、醌氧化还原酶( N A D ( P ) H ：q u i n i n eo x i d o r e d u c t a s e1 ，N Q 0 1 ) 、谷胱甘肽S - 转移酶( g l u t a t h i o n e S t r a n s f e r a s e ，G S T ) 、谷氨酸半胱氨酸连接酶( g l u t a m a t e - c y s t e i n el i g a s ec a t a l y t i c ，G
6、C ka n dG C L m ) 、谷胱甘肽( g l u t a t h i o n e ，G S H ) 、和环氧化物水解酶( e p o x i d eh y d r o l a s e ，E H ) 等，能够降低肝脏对氧化应激的敏感性，从而保持肝脏功能的稳定以及阻止肝脏疾病的发生。姜黄素( c u r c u m i n ) 是从姜黄根茎中提取的一种酚类化合物，具有抗炎、抗氧化等多种广泛的生物学作用，因此其对机体的抗氧化保护作用和机制一直受到普遍关注。姜黄素通过多种机制发挥其保护作用，其中之一是促进细胞的核转录因子N r f 2 发生核转位，进而活化并诱导I I 相解毒酶和抗氧化酶，
7、从而发挥对氧化应激的保护作用。目前，有关姜黄素对于砷诱导的肝脏损伤的保护作用的整体动物实验、以及姜黄素在整体动物中对肝脏N 也信号通路的影响，报道尚不多见。综上所述，本研究拟采用小鼠整体动物实验模型，观察姜黄素干预对饮水砷暴露小鼠肝脏损伤的保护效果、并初步探讨姜黄素对肝脏N r f 2 信号通路的可能影响。本研究试图为使用膳食化合物活化N r f 2 信号途径来对抗或缓解砷诱导的慢性损伤等的可能性和可行性等提供实验依据。实验方法1 、实验动物及分组选择健康昆明种雌性小鼠6 0 只，分组情况如下：对照组( c o n t r 0 1 )蒸馏水，单纯染毒组1 0m g L 、5 0m g L ，1
8、 0 0m g LN a A s 0 22 0 0 m g k g 姜黄素干预组2 0 0m g k g 姜黄素+ 1 0m g L 、5 0m g L ，1 0 0m g LN a A s 0 26 0 0 m g k g 姜黄素干预组6 0 0m g k g 姜黄素+ 1 0m g L 、5 0m g L ，1 0 0m g LN a A s 0 22 、染毒小鼠一般状况观察3 、测定血清A L T 和A S T 活力：南京建成试剂盒4 、测定肝脏M D A 含量：南京建成试剂盒5 、测定全血G S H 含量及肝脏G S H 活力：D T N B 法6 、肝脏G S H - P x 活力测
9、定：南京建成试剂盒7 、肝脏N r f 2 、H 0 - 1 和N Q 0 1 的蛋白表达水平：w e s t e r nb l o t 方法分析8 、肝脏病理形态观察和免疫组化9 、饮水砷暴露小鼠的尿砷含量测定实验结果1 、一般情况所有的6 0 只小鼠用N a A s 0 2 处理6 周均存活。不同水砷浓度不同组别小鼠体重、饮水量和肝脏脏器系数间均无明显差异。2 、姜黄素干预对饮水砷暴露小鼠肝脏损伤的影响1 0m g L 、5 0m g L 和1 0 0m g LN a A s 0 2 单纯染毒组小鼠与对照组小鼠相比，血清A L T 和A S T 活力均显著升高( p Aqqn。0d。铎丑囊
10、憾球趟蛏嚣长1宕g。n崆鼎村龌坷H。0v(I薯窨0vA一群翌g艚球趟蠖嚣簧蛊go HE I j 埘妪柙。od鄙丑裂储臻越蛏嚣*毽靛g七b(8盖巨83H鼹卜懈槭帐埽：IoocI藁价。oA蔫祥丑积储球蒙斟趟蠖嚣*毯莨订IIo墓：no0d群羞矧匪莨岬燃三、姜黄素干预对饮水砷暴露小鼠肝脏N r f 2 信号通路的影响由图5 可见，W e s t e r nb l o t t i n g 结果显示，1 0m g L 、5 0m g L 和1 0 0m g L N a A s 0 2单纯染毒组小鼠的肝脏N r f 2 蛋白表达与对照组相比有所增高；当给予小鼠2 0 0m r d k g 和6 0 0m g
11、 l ( g 姜黄素干预时，则与相同剂量N a A s 0 2 单纯染毒组相比，肝脏中N r f 2 蛋白表达均显著增高。1 0m g L 、5 0I I 虮和1 0 0m r J L N a A s 0 2 单纯染毒组小鼠，肝脏N Q 0 1 蛋白表达随染毒剂量增高而明显下降；而当给予小鼠2 0 0m g k 和6 0 0m k g 姜黄素干预时，则与相同剂量N a A s 0 2 单纯染毒组相比，肝脏中N Q 0 1 蛋白表达均显著增高。1 0m g L 和5 0m g LN a A s 0 2 单纯染毒组小鼠与对照组小鼠相比肝脏H O 1 蛋白表达有所增高，而1 0 0m r d LN
12、a A s 0 2 单纯染毒组的肝脏H O 1 蛋白表达则显著降低；而当给予小鼠2 0 0m r d k g 和6 0 0m g k g 姜黄素干预时，则与相同剂量N a A s 0 2单纯染毒组相比，肝脏中H O 1 蛋白表达均显著增高。”_ ”_ - W1 r _ 嘲嗣P 啊H _ P _ 矽_ _ _ r 鞴叫罗1 芒= 竺竺三曼置= - 叠M 2_ ，一- _ _ _ - - N Q 0 11 舅P 呵 缈：H O - 1_P4 ”“M 自_ “m ”目“* * “w 目$ _ 自“4 q lib一_ _ 一- 啊- a 伽n。、一1 _ F _ 。c o n t r o l1 01
13、01 05 05 01 0 01 0 01 0 0N a A s 0 2 ( m g L )02 0 06 0 002 0 06 0 0O2 0 06 0 0c u r c u m i n ( m g k g l图5 ，不同水砷浓度不同组别小鼠肝脏N r f 2 、N Q 0 1 和H O 一1 蛋白表达情况( 四) 姜黄素干预对饮水砷暴露小鼠肝脏N r f 2 蛋白免疫组化结果通过使用含抗N r f 2 抗体的免疫组化分析的方法，观察不同水砷浓度不同组别小鼠肝脏N r f 2 定位及其相对表达量。镜下可见，1 0m g L 、5 0m g L 和1 0 0m # LN a A s 0 2 单
14、纯染毒组小鼠与对照组相比，肝脏的胞浆和胞核中的N r f 2 均有所增高2 7 ：lIj ， 誓k 。0 Dp - 主j 。| 麓jI ， P I 二矽乳? 囊，誓7 J - + 第孓 。：惫。i 乙文、：? 0j 毫意童：l 辫镨2 I 7 嚣一图6 ，不同水砷浓度不同组别小鼠肝脏组织N r t 2 蛋白的免疫组化结果注：A ，对照组；B ，1 0 m g L N a A s 0 2 单纯染毒组；C ，1 0 m g L N a A s 0 2 + 2 0 0 m g k g 姜黄素干预组；D ，1 0 m g L N a A s 0 2 。0 6 0 0 峨姜黄素干预组；E ，5 0m g L N a A s 0 2 单纯染毒组；F ，5 0m g L N a A s 0 2 + 2 0 0 哦姜黄素干预组；G ，5 0m g LN a A s 0 2 + 6 0 0m g A , g 姜黄素干预组；H ，1 0 0m g LN a A s 0 2 单纯染毒组；I ，1 0
