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1、分析仪器20 08年第1期tureinformationofgasolinse,providingan ewte ehniqueforr apidanalysisofga solinepordu etsa ndafoun-dationforpr edietingqu alityindie esofgasoline sw ithdiffe r enteompositio nehara eteristie s.流式荧光法检测多肿瘤标志物的方法学评价盆振南贾兴旺田亚平(解放军总医院生化科,北京,10 08 53)摘要目的:应用流式荧光法检侧血清中甲胎蛋白( 八卫P )、细胞角质素片段1 9( C Y
2、FR户己1 1)、盛胚抗原(C EA )和神经元特异性烯醉化醉(Ns E)等多肿瘤标志物的浓度水平,并比较本方法与电化学发光法对同一样本检测结果的一致性.方法:在Lu而n ex Zo o多功能流式荧光分析仪上评价了本法 的灵敏度、抗干扰性、精密度、线性,对本法与电化学发光法检测结果的相关性作了线性回归分析.结果:在测定 范围内,流式荧光法侧定AFP、CY FR八召11、C E A和N S E等指标 的线性良好。批内变异系数在2.4 3 %9.2 3% 之间,批间变异系数在4.7 6%9.8 4%之间。20 0 份标本的检侧结果表明,流式荧光法与电化学发光法相关性 良好,检测AFP、C Y F
3、R户召11、C EA和NS E的相关系数分别为. 09760、0.9265、0.9727和0.5992。结论:本方法测定结果准确可靠,操作简便,值得推广使用.关.询流式荧光法肿瘤标志物1前育恶性 肿瘤是危害人体健康的重要 原因。防治肿瘤的基本方针 是早期发现、早期诊断、早期治疗。临床研究证实,肿瘤标志物的检 测能比C T、核 磁 共 振等物理检查手 段更 早地发现 肿瘤,为 临床治疗燕得宝贵时间。对于无 症状的病人,肿瘤标志物是唯 一能较 早发 现肿瘤的线索。流式荧光技术(液体芯片)是一 种新 的检 测肿瘤标志物 的生物 芯 片技术平 台。它 的基本原理 是,在不同荧光编码的微球上进行抗原一抗
4、体反应,通 过 两束激光分别检 测微球 编码和荧光信号,实现 对多种肿瘤指标的联合检测。本文 用 流式 荧光 法 检 测了血清 中甲胎 蛋白(AFP )、细胞角质素片段19(CY FR A211)、癌胚抗原(C EA)和神经元 特异 性烯醇化 酶(NS E)等多肿 瘤标志物的浓度水 平,就该检测技 术进 行了方法学评 价,并与罗 氏E17 0电化学发光法进 行了比较分析。及配套肿瘤标志物检测试剂(罗氏公司)。2.2标本来派200 7年5月6月本 院20 0名 患 者空腹静脉血,每人采集4mL,血样分别置 于美国BD公司分离胶试管中,一2 0下保存待检。2.3操作 与评 价方 法试剂 盒测 定参
5、数设置和仪器操作严格按厂家规定进行。采用S PS S1 0.O统计分析软件进行统计分析。按照NCCLS评价 方案对试剂的精密度、线性等指标进行评价。测定结果与电化学发 光法进行相关性比较。3结果2实验部分2.1仪器和试剂Luminex20 0流式 荧光检测仪(美 国Lumine x公司);流式荧光 多肿 瘤 标 志物 联合检测试剂(上海透景生命科 技有限公 司);E17 0电化 学 发 光 分 析仪3.1员敏度(检 出限)试脸对试剂 盒 的标准 品1(S TO D)重复检测 1 0次,计算测 定结果 的平均值(灭)与标准 差( SD )。各 指标灵敏度为叉+ZS D所 对应 的浓 度值,结果
6、如 表1所 示。衰1流式荧光法检侧 员敏度试脸结.(ng/mL)项目AF PC E A灵敏度e utoff值0.64 6 120C Y Zl l0。77120.069 4作者简介:t 振南,男,1 9 6 1年2月出生,副主任技师.主要从事全 自动生化分析仪器的使用及管理。20 08年第l期分析仪器3.2千 扰试验随机挑 选一份正常人血清,分别添加浓度为1 0mg/mL的血红蛋 白、浓度为20 0mg/mL的甘 油三酷、浓度为1 0mg/mL的胆 红素三种 干扰物质,进行对照检测,结果见表2。由子血红蛋白对NS E检测结果有干扰,故不 观察血 红蛋白对NS E的干扰。衰2流式荧光法干扰试脸结
7、.(ng/mL)项目无干扰物添加血 红蛋添加甘油三醋添加胆红素A F PC Y2 11NS EC E A1.22二0.5。68.84.69。23.23。642l343.3精密度试脸对低、中、高三种定值血清,平 行测 定1 0次,计算批内变异 系数,连续 测 1 0日,计算 批 间变 异系数,结果如表3所示。3.4线性试验取一高值标准液做倍比稀释,进行线性测 定,结果 见 图1。由 图可见,在测定 范围内,AF P、CY-F R A Zl l、NS E、CE A等指标的线性 良好。3.5相关性试脸取标本20 0份,同时 用本法与罗 氏公司1 E7 0电化学发光法进测定,回归分析结 果表明,两种
8、方 法 的相关性良好,检测A FP、C Y F R A21 1、C EA和NSE的相关系数分别为0.9760、0.9268、0.9727和0.8992,说明两者测定结果 的可靠性是相 同的,见 图2。衰3流式荧光法的精密度试脸结 .项目批 内变异 系数(%)批间变异 系数(%)低值高值A F PCYZl l1509NS EC E A.4 3.42中值7.859.237.278.736728低值6。3 36.5 87.4 87.52中值4.769.846.679.47高值7.138.988.3 78.7110. 008.0060 04.0 02.000.00 0一日、叻三翅侧班1 1人卜口8 0
9、 0.006 0 0.0040 0002 0 0. 0 00.00日口、的口侧翅砚d 匕记0.0 02 00.0040 0.0 06 00. 0 08 0 0.0 0八FP理论值 (ng/mL,002.0 04.006.0 08. 0 010.0 0CYZ1 1理论健 可ng/mL)15.000 00 0 0 00050闷已劝三翻侧魂目 S之4 0 0.0 03 0 0.0 02 0 0.0 0100.0 0 .0o o 0曰日谕三侧理,哎国O0 010 0.02 00. 0003 0 0. 040 0.000CEA理论值套ng/mL)圈1流式荧光法线性实脸0 05 0 010 0 015.0
10、02 0(】(NS E理论值 tng/mL)4讨论目前,用 于肿瘤标志物检测 的三大技术为,放射性核素标记抗原或 抗体的放射性免疫测定(I RA)、用酶标记的酶联免疫测 定( E IA)和 用荧光素标记的荧光免疫测 定(F IA).R IA由于 有放射性 物质,已逐渐被EIA和I FA代替。流式荧光技术是 流 式 细胞术(flow。ytometry,F CM)与酶联免疫吸附实验(enzymelinkedimmunos orbenta s s ay,EL I SA )相结合的技术。它的技术原理是,用两种荧光染料,按不 同比例,把微小 的乳胶颗粒(微 球)分 别 染 成上百种不 同的能发 出荧光
11、的颜色。然后再把针对 不同检测物的 蛋白(如包被抗体)以共价 方式交 联到 不 同颜色的微球上。应用 时,先把针 对 不 同检测物 的微球混合,再加人待测血 清。在悬 液 中,微球上 的抗体与待测 血清 中 的抗原特异性 结合,并 加上荧光标记。分析仪器2008年第l期010 0y.0习12X3+0.2724R.0.9706.1200 01yo2974x一I2077-R一0. 8269 .。趁00 0 08642曰日、的口一创遥11人AO坦长粼拭粗奋尹今今0 00 0 0 0808642一曰日、的侧洛匕V犯嗽拭椒粗0 0240 00600 08AFP浓度(ng/mL)电化学发光法0 01000
12、0864CZY11浓度(n以mL)电化学发光法二洲产. .山-. . . .州J0 01102080604020一曰、的口侧级目的2之嗽似拭淞=09448万一2. 9617R吕0. 9727奋ILIL0 00 0器0 0 0 0 0 00曰匕劝口侧趁记目O当长绷狱撼010 002030040 00 050 0670 00204006CEA浓度(ng八nL)NES浓度ng/mL)电化学发光法电化学发光法圈2流式黄光法与 电化学发光法检侧结果线性回归分析然后,微球被微量液体传翰系统排成单列 通 过检测器。检测 器内的一束荧光 判定微球的编 号,另 一束荧光测定该编号 微球上 的荧光 强度,通过 电
13、脑 处理后获得待测物质的含 量。灵敏度试验结 果表明,各指标的检测灵 敏 度远低于极 限(cu to ff )值;干扰试验结果 表 明,在 一 份低值血清样本中加 入高浓度 的血红 蛋 白、甘油三醋、胆红素三种 干扰物质,并不 影 响 结果 的判断。本研究的结果表明,在测 定范围 内,流式荧光法 测 定C EA、AF P、C YFRAZn和N S E的线性 良好。由于该 方法对每种 检测指标最少 进 行10 0个微球 的计数,而后取其平均值,相当于对每例样本重复了 至少 1 00次检测,从而保证了检 测结果 的准确性和重复性闭。精密度试验表 明该方法 重复性好。由于反应 在悬浮溶液 中进 行,
14、因而加快了检 测 速 度,所以又有“液体芯片”之称。流式荧 光法 与罗氏公司E17 0电 化学 发光法 相关性 良好,相关 系数在0.89 92到0.97 60之 间,特别是A F P和C EA两 个指标 的相关系数在0.9 7以上,可 见两者测 定 结 果 的可靠性 是 相 同 的。但是,从2。份标本测 定结果 的比较可以看 出,流式荧光 法结果普遍低于 罗 氏公 司E1 70电化 学发光 法,在临界值附近尤其明显。其原 因可能是 与不同试剂制备采用 的抗体不 同有关闭。另外,流 式荧光 法 检 测 所 需 血清量 非 常 少(10拜L),而 电化学 发 光 法需 要10 0200拌L血清。
15、在检测 速度上,一 定数量标本 的多指标检测,流式荧光检测 速度 大大快于电化学发 光检 测。因此该方法适 用于批量标本多指 标检测,特别是 肿瘤高危人员的筛查和肿瘤疑似病人 的辅助 诊断。参考文橄Du nbarSA,Va nde rZeeCA,O live rKGetal.J Mi-e robiolMethods,2003,53:245一252.Walla e eJ,ZhouY,UsmaniGN,etal.Le ukemia.20 03,17:1404一14 10王雅 杰,张馄,方芳等.中国实验 诊 断学,20 06,1 0(6):5 88一592王雅杰,张馄,齐军等.中华 检验医学杂志,2
16、00 6,2 9(5):431一432收稿日期:20 07一09一03Methd eevalu atio nof f lowf luore se e n e ea ssayf ordetc etio nofmulti一tumo rmarke比.Dongh Ze n n an,JiaXingwang,Tiana YPing(DePartme ntofClinic alBio chemistr夕,PLAGe n e r alHosPital,Beijing,10 08 5 3)Ob jeetiv e:Todete etlevelsofmulti一tumorma rke r s( A FP,CY F RAZll,C E AandNSE )ins e r umbyflowflu o r e s e eneeas s ayandtoeompar ethee o neo rdane eoftheanalytiealr esultsofthisa s sayandele etr o-20 08年第1期分析仪器ehemilumin o
