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1、Y8 墨7 B2 f 类号+ 一! ! 乏! 一一 沧文编号：一。：竺i I 型一硕士学位论文N I A S T E RT H E S j S 懿兰j 酬秭、 1j、7Jm 备_ l - ? ，。，、恕澎7V r E G F 、P C N A 在良恶性腮腺混含瘤中的表达及其意义扬重恒锦州医学院锦州医学院研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导1 = 进行的研究作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地力外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献
2、均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：锦州医学院研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解锦州医学院有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属锦州医学院。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为锦州医学院、且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为锦州医学院。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：盐鱼舅一一基遵。垒、V
3、 E G F 、P C N A 在良恶性腮腺混合癯中的表达及其意义中文摘要目的：探讨腮腺混合瘤组织中血管内皮生长因子( V E G F ) 、增殖细 胞核抗原( P C N A ) 的奏燃墓垄璺腺混合瘤细胞增殖活性中自! 竺堕，迄 良、恶性腮腺混合瘤的早翅堡断毽鳖型诊断援垡这据，方法：采用免1 魏喊孚聂呆可霭妄了礓测6 1 例人腮腺混合瘤组织和2 9 例正常腮腺组织中V E G F 和P C N A 的表达，其中良性腮腺混合瘤3 0 例，又分为原发良性腮腺混合瘤1 6 例，包括男8 例，女8 例；复发良性腮腺混合瘸1 4例，包括男6 例，女8 例。恶性混合瘤3 l 例，包括男1 6 例，女1
4、5 例。手术切除标本均经1 0 福尔马林固定，常规石蜡包埋，4L t 连续切J ，各取4 张，1 张作H E 染色确认病理结果，3 张作免疫组化染色。每批试验均以已知阳性片作参照，以P B S 代替一抗作阴性对照，操作步骤参照试剂盒说明书进行。光镜观察并拍片。结果：V E G F 、P C N A 在【E 常腮腺组织中的阳性表达率分别为6 9 ，1 0 3 ，在良性腮腺混合瘤鲲中分别为3 6 7 ，4 6 7 ，二组均有显著性差异( P 均 0 0 5 ) ；在V E G F 阳性表达病例中P C N A 的表达随V E G F 表达强度的升高而升高，相关分析显示二者问呈显著正相关( P 0
5、0 5 ) I nt h eV E G Fp o s i t i v ee x p r e s s i v ec a s e s t h ee x p r e s s i o no fP C N Ar i s e sa l o n gw i l lt h er i s eo fV E G Fe x p r e s s i v ei n t e n s i t yt h er e l e v a n ta n a l y s i si n d i c a t e st h ea r ep o s i t i v e l yr e l a t e dt oe a c ho t h e ro b v
6、 i o u s l y C o n c l u s i o nf1 ) c o m p a r e dw i t ht h er l o r m a lt o s s e sb e s i d et h et u m o r , G Fa n dP C N As h o wh i g l le x p r e s s i o ni nb e n i g np a r o t i dg l a n dm i x e dt u m o r , w h i c hi n d i c a t e st h a th a ss o m e t h i n gt od ow i l lt h ea c
7、t i v ep r o l i f e r a t i o no ft h et u m o rc e l l s I fw ec o m p a r et h ep e n i c i o u sp a r o t e dg l a r d m i x e dt u m o rw i t ht h eb e n i g no n e sw ew i l lf i n dt h ep o s i t i v ee x p r e s s i o no fV E G Fa n dP C N Ai Sh i 曲e r , w h i c hs h o w st h a th a ss i g n
8、 e f i e a n tV a l c c ef o rt h e2 d i f f e r e n t i a t i o n ，o ft h ep a r o t i dg l a n dm i x e dt u m o r ( 2 ) o r i g i n a lc o m p a r i n gt h eo r i g i n a lb e n i g hp a r o t i dg l a n dm i x e dt u m o rw i t ht h er e l a p s eo n e st h e r e Sn od i s t i n e t i u ed i f f
9、 e r e t eo ft h ep o s i t i v et h eV E G Fa n dP C N Aw h i c hs h o w si th a sn oe v a l e u l i u ev a l u ef o rt h er e l a p so f b e n i g l nm i x e dt I , I n o r K e yw o r d s p a r o t i dg l a n dm i x e dt u m o r ；V E G F ；P C N A ；i m m u c n a lt i s s u ec h e m i s t r y3 前言混合瘤
10、是涎腺瘤中最常见的种，腮腺是该病的最好发部位，约占其发病率的8 5 。腮腺混合瘤可发牛在任何年龄，人多为无痛毂肿块，生长缓慢，病程较长，大小不等，结节状，周界清楚，中等硬度。若出现短期内生长迅速、疼痛、面瘫、破溃等症状时，应考虑混合瘤恶变。腮腺混合瘤的诊断一般可根据病史、临床检查、腮腙造影以及超声和c T 检盔做出初步诊断，但其最后确诊必须依靠病理检查 “。肿瘤的生物学行为与多种因素有关【2 _ 3 】，通过研究表明V E G F 、P C N A 与多种肿瘤的病理分级、恶性程度、转移及预后有密切关系 4 - 7 1 ，据此推测可能也与腮腺混合瘤有关。在肿瘤组织中，癌细胞合成分泌V E G F
11、 后以旁分泌的形式作用于内皮细胞丘的膜受体，促进血管内皮细胞的增殖、分离和迁移，诱导肿瘤血管形成。新牛的肿瘤血管为肿瘤生长提供营养并间接促进肿瘤细胞的增殖，促进瘤体组织血管新生，加速肿瘤的生长 8 1 ；另外它还可以通过自分泌途径作用于肿瘤细胞本身，促进肿瘤细胞的增酸，进一步加速肿瘤细胞的生长。P C N A 又称周期素，它的表达合成与增殖细胞的增殖周期有关1 9 l 。G ，期在核中表达逐渐增加，s 期达到高峰，G 2 期与M 期减少。P C N A 被证实是种很好的判断细胞增殖状况的标记，可用于肿瘤的诊断、指导治疗投预后评估I l ” 。目前关于V E G F 和P C N A 与腮腺混合
12、瘤关系的研究及临床应用开展较少，希望通过对V E G F 、P C N A 与腮腺混合瘤关系的研究，能够对良、恶性腮腺混合瘤的早期诊断、鉴别诊断、临床治疗及预后评估提供定的病理学和分子生物学依据。估提供一定的病理学和分子生物学依据。4 1 材料与方法1 1 实验材料实验组6 l 例标本，来源予1 9 9 0 年2 0 0 4 年锦州医学院附属第医院和附属第二医院病理科存档标本，选取良性腮腺混合瘤3 0 例，其中原发良性腮腺混合瘤1 6 例，包括男8 例，女8 例，年龄1 8 7 3 岁，平均3 9 岁；复发良性腮腺混合瘤1 4 例，包括男6 例，女8 例，年龄1 9 7 5 岁，平均4 2 岁
13、。恶性腮腺混合瘤3 1 例，包括男1 6 例，女1 5例，年龄5 0 7 5 岁，平均6 7 岁。2 9 例正常腮腺组织为随机从良悻腮腺混合瘪旁的正常腮腺组织中选取。l 。2 实验仪器设鲁产地万能昱徽镶石切片机徽量移液羹恒墨水潜麓B 5 - 一2 型懂曩磁力境拌矗微波妒电子天平烘片机日本O l ”a o u s镶国L i c a法重6 i l s 上海稽宏实譬设鲁有隈公司上海司乐仪嚣广国产E 海纛辩天平仪器厂湖北毒薯惠子嫂嚣厂1 3 试验试剂鼠抗人单克隆V E G F 抗体( Z l d - - - - 0 4 0 ) ，鼠抗人单克隆P C N A 抗体( Z M0 2 1 3 ) 及通用性二
14、抗( S P 一9 0 0 0 ) ，均购自北京中杉金桥生物技术公司。1 4 实验方法手术切除标本均经1 0 福尔马林固定，常规石蜡包埋，哇u 连续切片，各取4 张，1 张作H E 染色确认病瑗结果，3 张作免疫组化染色。每批试验均以己知阳性片作参照，以P B S 代替一抗作阴性对照，操作步骤参照试剂盒说明书进行。脱蜡；3 甲醇过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，室温l O m i n ；P B S ( P H 7 4 ) 冲洗3 次各5 m i n ，0 0 1 M P H 6 0 枸橼酸盐缓冲液微波修复抗原“：P B S 冲洗3 次各5 m i n ，加山羊非免疫血清，3 7 水浴2 0 r a
15、 i n ；倾去血清，加一抗工作液4 孵育过夜；P B S一5 冲洗3 次各5 m i n ，加生物素化二抗，3 7 。C 水浴3 0 m i n ：P B S 冲洗3 次锌5 m i n ，加辣根酶标记链霉卵白素工作液，3 7 “ C 水浴3 0 m i n ：P B S 冲洗3次各5 m i n ，D A B 显色l O m i n ，光镜下控制；蒸馏水水冲洗中止漫色，苏木素复染，二F 燥，透明，封固，光镜观察并拍片。1 5 结果判定V E G F 阳性信号表达于肿瘤细胞和内皮细胞，定位于细胞质和细胞膜，呈弥漫分布的棕褐色颗粒“；P C N A 阳性信号定位于细胞核，呈棕褐色颗粒。阳性染色
16、细胞选取条件为细胞结构清晰、阳性颗粒定位好、着色与背景对比明显。视野选取染色均匀的肿瘤区。每张切片随机选取5 个高倍视野( 4 0 X ) ，各计数2 0 0 个细胞，阳性细胞数取均值，再计算该标本的阳性表达率。光阳性细胞为0 分，阳性细胞1 0 为1 分u 5 0 为2 分，5 1 7 5 为3 分， 7 5 为4 分。按着色强度判断，无色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。着色强度积分与数量积分的乘积 3 分判为免疫反应( + ) ”。1 6 统计学处理所有资料均用X 2 检验进行统计分析。6 一2 结果2 1 V E G F 、P C N A 的表达V E G F 阳性信号表达于肿瘤细胞和内皮细胞，定位于细胞质和细胞膜，呈弥漫分布的檫褐色颗粒：P C N A 阳性信号定位于细胞核，呈棕褐色颗粒。见图( 3 8 ) 。图1良性腮腺混合瘤( H E 染色4 0 0
